目的:制备壳聚糖/Ⅱ型胶原/聚乳酸复合水凝胶支架，以支架为骨髓间充质干细胞载体，评价修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法:将壳聚糖、Ⅱ型胶原、聚乳酸联合β-甘油磷酸钠盐制备复合水凝胶，检测凝胶形成时间、弹性模量及细胞相容性；制作新西兰兔关节软骨缺损模型，分为四组。空白组：正常软骨，未作任何处理；模型组：旷置骨软骨缺损作为对照；凝胶组：单纯以水凝胶填充软骨缺损；凝胶+干细胞组：以骨髓间充质干细胞及水凝胶复合物填充软骨缺损。分别于术后8周取材，根据大体观察及组织染色，比较各组膝关节软骨缺损修复效果。结果:壳聚糖/Ⅱ型胶原/聚乳酸复合溶液在37℃下形成凝胶，成胶时间(7.50±0.41)min，弹性模量(6.96±0.43) kPa；骨髓间充质干细胞在凝胶中具有较好的增殖能力，且软骨分化相关基因的表达明显增高；动物实验大体观察及组织染色结果表明凝胶+干细胞组软骨缺损修复效果明显优于凝胶组及模型组，其新生软骨与正常软骨边界模糊，其内可见软骨细胞，Ⅱ型胶原蛋白含量与正常软骨类似。结论:壳聚糖/Ⅱ型胶原/聚乳酸复合水凝胶支架具有良好的温敏性及细胞相容性，联合骨髓间充质干细胞可有效修复兔膝关节软骨缺损。

目的:探讨温敏性羟丁基壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法:采用实验研究方法。取51只7~10周龄SD大鼠，雌雄不限，在大鼠背部距脊柱约1.0 cm处，制造2个直径2 cm的全层皮肤缺损圆形创面。将大鼠按随机数字表法分为温敏性水凝胶组、凝胶组和空白对照组，每组17只大鼠（34个创面），前2组大鼠创面伤后即刻分别涂抹0.3 mL温敏性羟丁基壳聚糖水凝胶和羧甲基壳聚糖凝胶，空白对照组大鼠创面不行任何处理，3组大鼠创面均外用凡士林油纱。每天换药时观察温敏性水凝胶组大鼠创面温敏性羟丁基壳聚糖水凝胶及凝胶组大鼠创面羧甲基壳聚糖凝胶状态，记录去除凡士林油纱的难易程度。伤后3、7、10、14、21 d，观察3组大鼠创面愈合情况，并计算创面愈合率。伤后3、7、10、14、21 d，每组各取2只大鼠的4个创面组织，行苏木精-伊红染色观察炎症细胞浸润、血管新生、再上皮化情况；Masson染色观察胶原纤维再生和重塑情况，并计算胶原容积分数；酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素6（IL-6）、转化生长因子β 1（TGF-β 1）、基质金属蛋白酶1（MMP-1）的表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析及Bonferroni检验。 结果:伤后换药时，凝胶组大鼠创面羧甲基壳聚糖凝胶呈液态凝胶状，可随体位流动；而温敏性水凝胶组大鼠创面温敏性羟丁基壳聚糖水凝胶呈固态凝胶状，不随体位变化而流动，且分布更均匀；温敏性水凝胶组大鼠创面凡士林油纱较易去除，而其余2组凡士林油纱不易去除。伤后3、7、10、14、21 d，温敏性水凝胶组和凝胶组大鼠创面肉芽组织生长好，未见明显感染；空白对照组伤后3、5 d各有1只大鼠因创面感染而死亡。伤后7、10、14、21 d，温敏性水凝胶组和凝胶组大鼠创面愈合率明显高于空白对照组（ P<0.01）；伤后10 d，温敏性水凝胶组大鼠创面愈合率明显高于凝胶组（ P<0.05）。伤后3 d，3组大鼠创面均有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。伤后7~21 d，温敏性水凝胶组和凝胶组大鼠创面炎症细胞浸润逐渐减少，创面逐渐愈合，可见表皮层和真皮层，未见毛囊等皮肤附件；空白对照组大鼠创面伤后21 d未完全愈合。伤后3~10 d，3组大鼠创面新生胶原纤维组织逐渐增多；伤后14、21 d，与空白对照组比较，温敏性水凝胶组和凝胶组大鼠创面胶原纤维更加致密，排列整齐有序。伤后10、14、21 d，温敏性水凝胶组和凝胶组大鼠创面胶原容积分数显著高于空白对照组（ P<0.01）；伤后14 d，温敏性水凝胶组大鼠创面胶原容积分数显著高于凝胶组（ P<0.01）。伤后3、7、10 d，温敏性水凝胶组大鼠创面IL-6的表达显著高于凝胶组和空白对照组（ P<0.01），凝胶组大鼠创面IL-6的表达显著低于空白对照组（ P<0.01）。伤后3、7、10 d，温敏性水凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达显著高于凝胶组及空白对照组（ P<0.01）；伤后3、7 d，凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达显著低于空白对照组（ P<0.01）；伤后10 d，凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达显著高于空白对照组（ P<0.01）；伤后14 d，凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达明显高于温敏性水凝胶组和空白对照组（ P<0.01）；伤后21 d，温敏性水凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达显著低于凝胶组和空白对照组（ P<0.01），凝胶组大鼠创面TGF-β 1的表达显著低于空白对照组（ P<0.01）。伤后7 d，凝胶组大鼠创面MMP-1的表达显著高于温敏性水凝胶组和空白对照组（ P<0.01）；伤后10、14、21 d，温敏性水凝胶组大鼠创面MMP-1的表达显著高于凝胶组及空白对照组（ P<0.01）；伤后10 d，凝胶组大鼠创面MMP-1的表达显著低于空白对照组（ P<0.01）；伤后14、21 d，凝胶组大鼠创面MMP-1的表达显著高于空白对照组（ P<0.01）。 结论:温敏性羟丁基壳聚糖水凝胶可通过增加IL-6、TGF-β 1和MMP-1的表达，调节创面愈合环境，抑制炎症反应，提高组织修复强度，促进胶原的合成/分解，从而促进大鼠全层皮肤缺损创面的愈合。

壳聚糖是一种通过甲壳素脱乙酰化衍生而来的天然高分子多糖.脱乙酰基后,壳聚糖可以很容易地与DNA、蛋白质、脂类或带负电的合成聚合物产生相互作用,从而拥有独特的生物相容性、降解性等特性.壳聚糖温敏性水凝胶是由壳聚糖与表面活性剂复合制成的高分子水凝胶,当外界温度发生变化时,水凝胶自身发生状态的变化.因温敏性水凝胶具有良好的生物相容性、较低组织免疫反应及优良的细胞黏附性,在组织工程技术、药物载体、再生医学等方面有着重要应用价值.本文将对壳聚糖及壳聚糖温敏性水凝胶对口腔组织工程中的应用进行简要综述.

[目的]制备负载紫杉醇(PTX)的壳聚糖/β-甘油磷酸钠(CS/β-GP)温敏水凝胶,表征其理化性质,探讨其对体内外鼻咽癌生长的影响.[方法]在CS/β-GP水凝胶中加入PTX,制备PTX/CS/β-GP水凝胶,扫描电子显微镜观察水凝胶的形态,紫外光谱检测水凝胶的低临界转变温度(LCST)和体外释药性能.体外实验:细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定CS/β-GP水凝胶与PTX/CS/β-GP水凝胶对鼻咽癌HNE1细胞活力的影响,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)法检测细胞凋亡.体内实验:采用人HNE1细胞皮下注射法建立鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,观察PTX和PTX/CS/β-GP水凝胶对移植瘤生长的抑制效果,免疫组织化学法检测移植瘤中Ki-67的表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡.[结果]制备的PTX/CS/β-GP水凝胶呈现规整的三维网络结构、良好的温敏性和药物缓释性能.CS/β-GP水凝胶对HNE1活力无明显抑制作用,PTX/CS/β-GP水凝胶可显著抑制HNE1细胞生长,并促进细胞凋亡.PTX/CS/β-GP水凝胶可显著抑制鼻咽癌移植瘤生长,其抗癌效应优于相同剂量的游离PTX.PTX/CS/β-GP水凝胶可抑制移植瘤组织中Ki-67的阳性表达,并促进TUNEL阳性细胞增多.[结论]CS/β-GP温敏水凝胶具有稳定的理化性质和良好的组织相容性,与游离PTX相比,PTX/CS/β-GP温敏水凝胶具有较低的细胞毒性和更好的抗癌效果,可以作为鼻咽癌治疗的候选药物负载系统.

目的 通过制备PLGA-PEG-PLGA温敏性水凝胶、海藻酸钠-壳聚糖复合水凝胶和slanc自组装多肽水凝胶,探讨大鼠下肢肌肉注射水凝胶对微血管再生的作用,为应用水凝胶材料治疗缺血性疾病提供新的策略和理论依据.方法 制备出可注射型PLGA-PEG-PLGA温敏性水凝胶、海藻酸钠-壳聚糖温敏复合水凝胶和slanc自组装多肽水凝胶.SD雄性大鼠随机分为PLGA-PEG-PLGA组(PPP组)、海藻酸钠-壳聚糖组(SA-CS组)、slanc组、PBS对照组及正常对照组.前四组建立雄性大鼠急性下肢缺血模型,缺血24 h后,下肢肌肉多点注射1.0 ml上述四种溶液;正常对照组行假手术处理.分别于4周、8周后,取各组大鼠下肢腓肠肌做组织切片.免疫组化检测CD31,检测各组大鼠的微血管密度,评价三种水凝胶对大鼠下肢微血管再生作用效果.结果 各组内比较,8周时,三种水凝胶组大鼠血管密度比4周时有所增加(P＜0.05).4周时,与PBS对照组比较,PPP组微血管密度未见明显增加(8.67±1.66比7.33±1.66),P＞0.05),SA-CS组(15.33±3.64)及slanc组(13.78±2.99)微血管密度增加(P＜0.05).8周时,与PBS对照组(8.72±1.36)比较,PPP组(14.39±1.33)、SA-CS组(23.33±2.11)及slanc组(18.61±1.72)微血管密度明显增加(P＜0.05),其中SA-CS组微血管密度增加最多(P＜0.05).结论 设计合成的三种水凝胶都具有一定促进血管再生的能力,其中海藻酸钠-壳聚糖复合水凝胶促进血管再生功能最为明显,在组织工程修复、器官组织再生、缺血性疾病治疗方面有潜在临床应用价值.

目的 探究红景天苷/壳聚糖水凝胶对大鼠脂肪间充质干细胞抗氧化应激损伤的影响.方法 将细胞株分为Control组,H2O2组(模型组),低、中、高浓度实验组,对模型组和各实验组进行氧化应激造模.通过不同温度观察水凝胶温敏性,使用光镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,CM-Dil Dye标记细胞进行计数及3D形态观察.结果 水凝胶在4℃为溶胶态,37℃为凝胶态.光镜下中浓度实验组细胞形成明显集落.第0、1天各组细胞活力比较,差异无统计学意义(P＞0.05).第3、7天,模型组细胞活力低于Control组,各实验组细胞活力均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).第0、1天各组细胞数量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).第3、7天,模型组细胞数低于对照组,各实验组细胞数均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).3D图像观察到中浓度实验组细胞随时间增长从球形逐渐呈树枝状生长.结论 红景天苷修饰的水凝胶促氧化应激损伤的大鼠脂肪干细胞存活.

背景:单独应用壳聚糖或胶原蛋白可改善心肌梗死区微血管密度,参与心肌梗死后的短期心肌修复,基于此课题组制备了温敏性壳聚糖-胶原复合水凝胶,证实其具有良好的理化性能,适合作为心肌组织工程支架材料.目的:制备负载碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶,分析其理化性能、生物相容性及治疗小鼠心肌梗死的预后疗效.方法:①将bFGF分别负载于壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶与壳聚糖水凝胶中,检测水凝胶中bFGF的释放效率;②将H9C2心肌细胞分别接种于负载bFGF的两种水凝胶中,采用CCK-8法检测细胞增殖;③构建C57BL/6J小鼠心肌梗死模型,随机分3组干预:空白组心肌梗死区注射PBS,对照组注射负载bFGF的壳聚糖水凝胶溶液,实验组注射负载bFGF的壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶溶液,术后28 d进行超声心动图检测与心肌组织学观察.实验获得山西医科大学伦理委员会批准.结果 与结论:①相较于壳聚糖水凝胶,壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶可促进凝胶中bFGF的释放;②相较于负载bFGF的壳聚糖水凝胶,负载bFGF的壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶可促进心肌细胞的增殖;③超声心动图显示,实验组、对照组的左心室射血分数与左室短轴缩短率均高于空白组(P<0.05),实验组的左心室射血分数与左室短轴缩短率均高于对照组(P<0.05);④心肌组织学观察显示,实验组、对照组的心肌梗死面积均小于空白组(P<0.05),梗死区室壁厚度大于空白组(P<0.05);实验组的心肌梗死面积均小于对照组(P<0.05),梗死区室壁厚度大于对照组(P<0.05);⑤结果表明,负载bFGF的壳聚糖-胶原蛋白复合水凝胶具有良好的生物相容性,动物体内移植后可显著减缓心肌梗死后的心室重构.

目的:考察羧甲基壳聚糖(CCS)阴道温敏原位凝胶治疗家兔细菌性及霉菌性阴道炎的疗效,并观察其对阴道的刺激性.方法:选取健康雌性家兔分别制造细菌性及霉菌性阴道炎模型,并各随机分为5组:模型组、阳性对照组(碘伏组或保妇康栓组)、CCS原位凝胶低、中、高剂量组,每组10只,另分别取10只健康雌性家兔作为空白对照组;模型组及空白对照组给予无菌生理盐水,碘伏组给予2 ml市售碘伏消毒液,保妇康栓组给予0.08 g·kg-1栓剂,CCS原位凝胶组分别给予0.06,0.12,0.24 g·kg-1 CCS原位凝胶;各组家兔每天给药1次,连续7 d.每日观察家兔一般行为,并于末次给药12 h后观察外阴、阴道红肿及分泌物情况,临床微生物检验阴道及宫颈分泌物含染病病源菌.另取36只雌性家兔随机分为阴性对照组、碘伏组、保妇康栓组、CCS低、中、高剂量组,连续给药7 d后处死家兔,取出完整阴道纵向切开,肉眼观察,并选取阴道组织HE染色后,显微镜下观察,按阴道黏膜刺激反应评分标准评分,并按阴道黏膜刺激强度分级标准确定刺激性强度.结果:各药物治疗组在治疗7 d后均取得显著疗效,与模型组相比,阴道红肿率及病原菌阳性率均显著下降(P<0.05).与阳性对照组相比,CCS低剂量组疗效较差,高剂量组疗效更好,差异有统计学意义(P<0.05),中剂量组效果相当(P>0.05);刺激性实验表明,阳性对照药品及CCS高浓度组对家兔阴道有极轻微刺激,CCS低、中浓度均对阴道无刺激.结论:CCS温敏性原位凝胶对家兔细菌性和霉菌阴道炎有较好的治疗作用,且无明显阴道刺激性.

构建了间充质干细胞外泌体-温敏水凝胶系统并考察其在表皮创伤修复中的作用.首先采用差速离心法提取分离了间充质干细胞外泌体,透射电镜表征结果显示其呈完整球形.再通过单因素和正交试验优化温敏壳聚糖水凝胶的处方.优化的空白处方为:壳聚糖2％,β-甘油磷酸二钠40％,碳酸氢钠0.4 mol/L.验证试验表明,3批制品在37℃下的凝胶时间为(9.6±1.2) min,凝胶温度为(34.1±1.3)℃,具有良好的温敏性.荧光标记法显示,外泌体在温敏凝胶中均匀分散,且该载药凝胶在大鼠表皮上可滞留3d以上.体外释放试验表明,相对于游离外泌体,载药凝胶中的外泌体具有缓释特征,7d累积释放率为(79.6±4.0)％.在体外细胞增殖试验中,经外泌体-温敏水凝胶处理的大鼠成纤维细胞d5的增殖率达(387.7±26.6)％,约为磷酸盐缓冲液和游离外泌体组的1.9和1.2倍,提示该间充质干细胞外泌体-温敏水凝胶在表皮创伤修复方面具有良好的应用前景.

目的:利用氧化石墨烯(GO)和透明质酸钠(HA)的材料特性,增强以壳聚糖(CS)为基底的复合温敏水凝胶的理化性质和生物特性,以便更好的应用于骨组织工程中.方法:使用质量分数2％CS做基质,质量分数60％的β-甘油磷酸钠(β-GP)作为交联剂,交联GO和HA制备复合三相水凝胶,通过使用扫描电子显微镜观察其表面特征,并检测孔隙率、吸水性、机械强度、蛋白吸附量以及体外生物降解情况;将人的骨肉瘤细胞MG-63与复合水凝胶的浸提液进行共培养检测水凝胶的细胞毒性.结果:CS/GO/HA复合水凝胶呈现均匀相互通连的多孔结构,孔隙率达到(71.90±4.56)％,机械强度(1399.36±33.65)kPa,吸水率(229.63±6.41)％以及很好的体外降解率和良好的生物相容性等特性.结论:相比于CS/GO温敏水凝胶,CS/GO/HA复合温敏水凝胶具有更好的理化性质和生物学特性.