目的:探讨组织激肽释放酶12(KLK12)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2014年2月至2018年10月间中国科学技术大学附属第一医院胆胰外科行根治性手术切除且病理确诊的95例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织，采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织KLK12的表达，分析其与胰腺癌临床病理特征的相关性。采用蛋白质免疫印迹法和荧光定量PCR法检测胰腺癌细胞株SW1990、PANC1及正常胰腺腺泡细胞株HPDE6-C7的KLK12蛋白和mRNA表达。通过质粒转染构建上调及下调KLK12表达的胰腺癌细胞株，以未转染的及转染携带阴性对照质粒的胰腺癌细胞作为空白对照组和阴性对照组，运用CCK8法和Transwell小室检测各组细胞增殖、侵袭及迁移能力。结果:胰腺癌组织KLK12的阳性表达率显著高于癌旁组织(70.5%比29.5%， P<0.001)，其表达与肿瘤分化程度低、TNM分期晚和淋巴结转移显著相关( P值均<0.05)。SW1990、PANC1细胞的KLK12蛋白及mRNA表达量均显著高于HPDE6-C7细胞(0.34±0.01、0.28±0.01比0.21±0.01，3.31±0.10、2.91±0.09比1.41±0.20， P值均<0.01)。下调KLKL12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(0.94±0.02比1.16±0.05)、穿膜细胞数[(373.7±14.8)个比(726.0±11.8)个/高倍视野]、迁移细胞数[(696.0±13.1)个比(841.3±15.4)个/高倍视野]均显著下降；PANC1细胞的 A450值(0.96±0.03比1.21±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±13.6)个比(646.0±15.1)个/高倍视野]、迁移细胞数[(449.0±16.5)个比(595.7±8.6)个/高倍视野]也均显著下降。而上调KLK12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(1.32±0.03比1.11±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±22.2)比(402.7±10.5)个/高倍视野]、迁移细胞数[(639.3±16.5)比(433.0±11.8)个/高倍视野]均显著增加；PANC1细胞增殖的 A450值(1.26±0.04比1.08±0.03)、穿膜细胞数[(571.0±17.4)个比(426.7±23.3)个/高倍视野]、迁移细胞数[(740.3±13.0)个比(442.7±10.3)个/高倍视野]均显著增加( P值均<0.05)。 结论:KLK12在胰腺癌组织呈高表达；KLK12在胰腺癌细胞株的表达上调可促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

目的:探讨他克莫司(TAC)诱导大鼠使用胰激肽原酶(PK)之后的肾脏损伤治疗效果，分析胰激肽原酶的药用机理。方法:选取48只雄性Sprague-Dawledy大鼠作为样本，随机将大鼠分为VH组、VH+PK组、TAC组、TAC+PK组，每组各12只。VH组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1、腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；VH+PK组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1和腹腔PK为7.2 U·(kg·d) －1注射；TAC组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；TAC+PK组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔PK 7.2 U·(kg·d) －1注射，每组大鼠的给药周期为4周，在给药结束后采集大鼠尿液样本，检测尿蛋白水平(UPRO)；在大鼠颈部右侧静脉部位采集血液样本，检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、TAC水平；使用电子显微镜观察肾组织的超微结构改变，运用蛋白免疫印迹法对组织细胞内的自噬相关因子轻链蛋白3B(LC3B)、P62、Beclin的变化进行分析。 结果:与VH组比较，TAC组大鼠的饮水量增加，尿量提高，而体重明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK组大鼠的体重大于TAC组( P<0.05)。TAC组大鼠的Scr、BUN、UPRO大于VH组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK治疗组的Scr、BUN和UPRO均较TAC组明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。VH+PK组大鼠在电子显微镜下的各项变化和VH组无差异，而TAC组不仅出现了肾小管基膜增厚，还伴有肾小管萎缩，肾小管间质炎性细胞增多以及肾间质胶原纤维明显增生，同时出现了上皮细胞空泡变形，大量自噬体形成。相较于VH组，TAC组大鼠组织细胞中的LC3B-Ⅱ表达下降，而P62和Beclin表达显著增强(均 P<0.05)；TAC+PK组大鼠的LC3B-Ⅱ表达大于TAC组，而P62、Beclin表达低于TAC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:自噬可参与免疫抑制剂诱导肾损伤的发生发展，TAC诱导肾脏损伤大鼠在采用PK给药治疗后的肾脏损伤程度有所下降，其原因可能源于PK对肾脏细胞自噬功能的调节作用。

组织激肽释放酶(tissue kallikrein-related peptidase,KLK)家族是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,有15个家族蛋白,分别为KLK1～KLK15.近年来,越来越多的研究表明,KLK家族可通过切割病毒和细菌关键蛋白、激活多种宿主受体、调控激肽系统等方式参与机体的多种生理活动,影响着病毒、细菌和真菌中多种病原微生物感染的进程,作用机制复杂且广泛.本文通过对近年来KLK家族蛋白在微生物感染中的作用和机制进行综述,以更好地探究KLK在微生物感染中的重要作用,特别是为其在结核分枝杆菌感染中的研究提供思路,也为KLK家族蛋白作为抗结核治疗靶点提供理论基础.

目的 探讨人尿激肽原酶(human urinary kallidinogenase,HUK)对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 110只雄性ICR小鼠随机分为假手术组、对照组和HUK组,采用短暂性大脑中动脉闭塞法制作脑缺血再灌注模型.利用氯化三苯四氮唑染色检测梗死体积,蛋白质印迹法检测缺血皮质Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶-3蛋白表达量,免疫组化染色检测缺血侧海马CA1区Bcl-2和Bax阳性细胞,TUNEL染色法检测缺血皮质细胞凋亡.结果 假手术组未见梗死灶和神经功能缺损.缺血再灌注24 h时,HUK组梗死体积(P＜0.01)和神经功能缺损评分(P=0.02)均显著低于对照组;缺血再灌注72 h时,HUK组梗死体积(P＜0.01)和神经功能缺损评分(P=0.03)同样显著低于对照组.蛋白质印迹分析显示,HUK组缺血皮质Bcl-2表达显著高于对照组(P ＜0.001),而胱天蛋白酶-3(P＜0.001)和Bax(P ＜0.001)表达均显著低于对照组.假手术组小鼠未见凋亡细胞,HUK组缺血侧海马CA1区凋亡细胞数量(P＜0.01)和Bax阳性细胞数量(P＜0.01)显著少于对照组,而Bcl-2阳性细胞数量显著多于对照组(P＜0.01).结论 HUK对小鼠缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达以及下调胱天蛋白酶-3和Bax蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关.

目的 探讨尤瑞克林联合阿司匹林治疗急性脑梗死的临床效果及安全性.方法 将2014年2月—2017年2月在我院住院治疗的172例急性脑梗死病人随机分为2组,每组86例病人.对照组予以阿司匹林口服,研究组在阿司匹林口服治疗的基础上,静脉给予尤瑞克林.治疗2周后,比较两组病人的血液流变学指标、临床疗效及同型半胱氨酸(Hcy)、血管内皮生长因子(VEGF)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、胱抑素C(Cys-C)、白细胞介素6(IL-6)等血清学指标和药物不良反应.结果 两组病人治疗后的全血黏度、血浆黏度及血小板聚集率均显著低于治疗前(t=4.027～11.452,P<0.05),且研究组病人治疗后的全血黏度、血浆黏度及血小板聚集率均低于对照组治疗后(t=5.793～10.862,P<0.05).研究组病人的治疗有效率为93.1％,明显高于对照组的69.8％(χ2=5.454,P<0.05).两组病人治疗后的Hcy、hs-CRP、Cys-C、IL-6水平及研究组治疗后的VEGF水平均明显低于治疗前(t=4.014～26.994,P<0.05),且研究组治疗后的Hcy、hs-CRP、Cys-C、IL-6水平显著低于对照组治疗后(t=3.872～26.552,P<0.05).治疗期间,研究组和对照组的药物不良反应发生率分别为15.1％和12.8％,差异无统计学意义(P>0.05).结论 尤瑞克林联合阿司匹林治疗急性脑梗死具有良好的临床效果和可靠的安全性.

目的 运用胰激肽原酶肠溶片联合强精汤治疗Ⅱ型糖尿病不育症,观察精液质量和精子运动参数的变化,同时检测性激素水平,研究其治疗该病的作用机制.方法 将64例2型糖尿病不育症患者在积极治疗原发病的情况下分为治疗组和对照组,各32例.对照组给予五子衍宗汤和葡萄糖酸锌片治疗,治疗组采用强精汤联合胰激肽原酶肠溶片治疗,连续3个月为1疗程.对比两组精液质量和精子运动参数,同时检测在治疗前后性激素的变化.结果 治疗组总有效率为81.25％(26/32),对照组总有效率为31.25％(10/32),治疗组显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且治疗后治疗组的精子密度和活动率均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).两组精液量治疗前后变化均不明显(P>0.05);治疗组治疗后血清睾酮(T)水平及卵泡刺激素(FSH)水平均较治疗前有所提高且明显高于对照组(P<0.01);黄体生成素(LH)治疗前后升高不明显(P>0.05).对照组治疗前后性激素水平均无明显改变(P>0.05).结论 胰激肽原酶肠溶片联合强精汤可以改善Ⅱ型糖尿病不育症患者的精液质量,增加受孕概率,并能促进睾丸微循环和改善性激素水平,这也可能是其发挥作用的重要机制之一.

目的 研究激肽释放酶-激肽系统在ED大鼠模型中的表达变化,探讨其生物学意义.方法 具有正常性功能的雄性SD大鼠120只,其中正常对照组(N组)20只,余100只为造模组(M组),采用环境雌激素样饮食联合冷应激干预条件建立复合应激大鼠模型,通过性行为学实验和阿朴吗啡(APO)阴茎勃起实验筛选出ED模型(ED组),未成ED者为复合应激组(S组).从ED组和S组中分别抽取20只大鼠分为ED用药组(ED-Y组)和应激用药组(S-Y组),用药组以伊木萨克片干预,每日1次,每次250mg/kg,2周后取材,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western-blot技术和免疫组化方法检测大鼠阴茎组织中激肽释放酶1、T-激肽原mRNA及蛋白表达水平.结果 激肽释放酶1在S组与ED组均显著低于N组,经药物分别干预后,S-Y组与ED-Y组均较S组与ED组组显著升高,P<0.05;T-激肽原在S组与ED组显著高于N组,分别经药物干预后均显著高于S组与ED组,P<0.05.结论(1)激肽系统改变参与了ED的发生发展,并可能在ED产生中发挥着重要作用;(2)伊木萨克片治疗ED的机制与调控激肽系统有关.

目的 探讨组织激肽释放酶1(KLK1)对心脏缺血/再灌注损伤大鼠线粒体功能的影响及其机制.方法 通过KLK1重组腺病毒感染实现大鼠心脏KLK1过表达,然后采用冠状动脉左前降支结扎和再灌注的方法建立大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型,检测梗死区面积和心脏缺血危险区细胞凋亡情况;分离大鼠心脏缺血危险区心肌组织线粒体,检测线粒体功能(线粒体过氧化物生成量、线粒体膜电位、线粒体ATP生成量).分离新生大鼠心肌细胞,通过KLK1重组腺病毒感染实现KLK1过表达,然后建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,对心肌细胞缺氧/复氧损伤模型应用缓激肽1型受体(B1R)阻断剂R715或缓激肽2型受体(B2R)阻断剂HOE140处理,利用MTT法检测细胞活力,并观察线粒体功能的变化.结果 在大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型中,KLK1过表达能减轻心肌缺血/再灌注损伤,使心肌梗死区面积减小、缺血危险区细胞凋亡减少(P均<0.01);改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,降低过氧化物生成量、增加线粒体膜电位和线粒体ATP生成量(P均<0.01).在离体大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型中,KLK1过表达能减轻心肌细胞损伤(P<0.05)、改善线粒体功能障碍(P<0.05,P<0.01),并且其作用可被B2R阻断剂HOE140抑制.结论 KLK1能改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,这可能是其具有心脏保护作用的重要机制.

目的 探讨人尿激肽原酶(human urinary kallidinogenase,HUK)对超过溶栓治疗时间窗的急性缺血性卒中患者脑灌注、炎症标志物水平、神经功能缺损以及短期临床转归的影响.方法 回顾性纳入2016年6月至2018年3月期间在南通大学第二附属医院神经内科接受治疗的超过溶栓治疗时间窗,且在入院后第1天和第14天进行磁共振灌注成像的急性缺血性卒中患者,按是否接受HUK治疗分为HUK和对照组.所有患者在入院后第1天和第14天进行磁共振灌注成像及血清炎症标志物测定.比较两组治疗前后美国国立卫生院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale,NIHSS)评分、脑灌注水平及血清炎症标志物水平.在入院后14d时根据改良Rankin量表(modified Rankin Scale,mRS)评分进行转归判定,0～2分定义为转归良好,＞2分定义为转归不良.采用多变量logistic回归分析确定转归的独立影响因素.结果 共纳入62例超过溶栓治疗时间窗的急性缺血性卒中患者,其中HUK组37例,对照组25例.除基线NIHSS评分差异有统计学意义(P =0.049)外,HUK组人口统计学和其他基线资料与对照组差异均无统计学意义.HUK组治疗后NIHSS评分降幅较非HUK组更为显著(P＜0.01).HUK组血清高敏C反应蛋白水平在治疗后显著下降(P＜0.01),血浆脂蛋白相关磷脂酶A2也出现下降的趋势.在灌注成像参数方面,HUK组治疗后相对脑血流量显著升高,相对平均通过时间和相对达峰时间均显著下降,上述增幅和降幅与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05).入院14 d时mRS评分显示,51例转归良好,11例转归不良.多变量logistic 回归分析显示,基线NIHSS评分[优势比(odds ratio,OR)2.545,95％可信区间(confidence interval,CI)1.124～5.541;P=0.024]、心房颤动(OR 5.712,95％ CI 1.737 ～24.685;P=0.039)以及心源性栓塞(OR 4.485,95％ CI1.148 ～ 18.262;P=0.040)是转归不良的独立危险因素,而是否应用HUK与转归无显著相关性,可能与随访时间较短有关.结论 对于超过溶栓治疗时间窗的急性缺血性卒中患者,HUK可改善脑灌注,减轻炎症反应,改善患者神经功能缺损,但并不能改善神经功能转归.

激肽-激肽释放酶系统(kinin-kallikrein system,KKS)系机体内源性多蛋白级联反应系统;其激活可导致内源性凝血级联途径活化并促使激肽原酶解,进而释放缓激肽和胰激肽等相关肽.KKS参与炎性反应、血管生成、心脏保护、血管通透性、血压控制、凝血和疼痛等多种病理和生理过程,并与肝癌、前列腺癌和卵巢癌等多种肿瘤的病因病理密切相关.本文针对KKS在原发性肝癌进程中的作用以及干预KKS辅助治疗肝癌可能性的研究进展进行综述.