目的:探讨组织激肽释放酶12(KLK12)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2014年2月至2018年10月间中国科学技术大学附属第一医院胆胰外科行根治性手术切除且病理确诊的95例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织，采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织KLK12的表达，分析其与胰腺癌临床病理特征的相关性。采用蛋白质免疫印迹法和荧光定量PCR法检测胰腺癌细胞株SW1990、PANC1及正常胰腺腺泡细胞株HPDE6-C7的KLK12蛋白和mRNA表达。通过质粒转染构建上调及下调KLK12表达的胰腺癌细胞株，以未转染的及转染携带阴性对照质粒的胰腺癌细胞作为空白对照组和阴性对照组，运用CCK8法和Transwell小室检测各组细胞增殖、侵袭及迁移能力。结果:胰腺癌组织KLK12的阳性表达率显著高于癌旁组织(70.5%比29.5%， P<0.001)，其表达与肿瘤分化程度低、TNM分期晚和淋巴结转移显著相关( P值均<0.05)。SW1990、PANC1细胞的KLK12蛋白及mRNA表达量均显著高于HPDE6-C7细胞(0.34±0.01、0.28±0.01比0.21±0.01，3.31±0.10、2.91±0.09比1.41±0.20， P值均<0.01)。下调KLKL12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(0.94±0.02比1.16±0.05)、穿膜细胞数[(373.7±14.8)个比(726.0±11.8)个/高倍视野]、迁移细胞数[(696.0±13.1)个比(841.3±15.4)个/高倍视野]均显著下降；PANC1细胞的 A450值(0.96±0.03比1.21±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±13.6)个比(646.0±15.1)个/高倍视野]、迁移细胞数[(449.0±16.5)个比(595.7±8.6)个/高倍视野]也均显著下降。而上调KLK12表达，培养72 h时，SW1990细胞增殖的 A450值(1.32±0.03比1.11±0.03)、穿膜细胞数[(556.3±22.2)比(402.7±10.5)个/高倍视野]、迁移细胞数[(639.3±16.5)比(433.0±11.8)个/高倍视野]均显著增加；PANC1细胞增殖的 A450值(1.26±0.04比1.08±0.03)、穿膜细胞数[(571.0±17.4)个比(426.7±23.3)个/高倍视野]、迁移细胞数[(740.3±13.0)个比(442.7±10.3)个/高倍视野]均显著增加( P值均<0.05)。 结论:KLK12在胰腺癌组织呈高表达；KLK12在胰腺癌细胞株的表达上调可促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

目的:探讨他克莫司(TAC)诱导大鼠使用胰激肽原酶(PK)之后的肾脏损伤治疗效果，分析胰激肽原酶的药用机理。方法:选取48只雄性Sprague-Dawledy大鼠作为样本，随机将大鼠分为VH组、VH+PK组、TAC组、TAC+PK组，每组各12只。VH组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1、腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；VH+PK组大鼠进行皮下橄榄油1 mL·(kg·d) －1和腹腔PK为7.2 U·(kg·d) －1注射；TAC组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔生理盐水2 mL·(kg·d) －1注射；TAC+PK组进行皮下TAC 1.5 mg·(kg·d) －1和腹腔PK 7.2 U·(kg·d) －1注射，每组大鼠的给药周期为4周，在给药结束后采集大鼠尿液样本，检测尿蛋白水平(UPRO)；在大鼠颈部右侧静脉部位采集血液样本，检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、TAC水平；使用电子显微镜观察肾组织的超微结构改变，运用蛋白免疫印迹法对组织细胞内的自噬相关因子轻链蛋白3B(LC3B)、P62、Beclin的变化进行分析。 结果:与VH组比较，TAC组大鼠的饮水量增加，尿量提高，而体重明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK组大鼠的体重大于TAC组( P<0.05)。TAC组大鼠的Scr、BUN、UPRO大于VH组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。TAC+PK治疗组的Scr、BUN和UPRO均较TAC组明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。VH+PK组大鼠在电子显微镜下的各项变化和VH组无差异，而TAC组不仅出现了肾小管基膜增厚，还伴有肾小管萎缩，肾小管间质炎性细胞增多以及肾间质胶原纤维明显增生，同时出现了上皮细胞空泡变形，大量自噬体形成。相较于VH组，TAC组大鼠组织细胞中的LC3B-Ⅱ表达下降，而P62和Beclin表达显著增强(均 P<0.05)；TAC+PK组大鼠的LC3B-Ⅱ表达大于TAC组，而P62、Beclin表达低于TAC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:自噬可参与免疫抑制剂诱导肾损伤的发生发展，TAC诱导肾脏损伤大鼠在采用PK给药治疗后的肾脏损伤程度有所下降，其原因可能源于PK对肾脏细胞自噬功能的调节作用。

组织激肽释放酶(tissue kallikrein-related peptidase,KLK)家族是丝氨酸蛋白酶家族中一种具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶性质的蛋白水解酶亚群,有15个家族蛋白,分别为KLK1～KLK15.近年来,越来越多的研究表明,KLK家族可通过切割病毒和细菌关键蛋白、激活多种宿主受体、调控激肽系统等方式参与机体的多种生理活动,影响着病毒、细菌和真菌中多种病原微生物感染的进程,作用机制复杂且广泛.本文通过对近年来KLK家族蛋白在微生物感染中的作用和机制进行综述,以更好地探究KLK在微生物感染中的重要作用,特别是为其在结核分枝杆菌感染中的研究提供思路,也为KLK家族蛋白作为抗结核治疗靶点提供理论基础.

目的 研究激肽释放酶-激肽系统在ED大鼠模型中的表达变化,探讨其生物学意义.方法 具有正常性功能的雄性SD大鼠120只,其中正常对照组(N组)20只,余100只为造模组(M组),采用环境雌激素样饮食联合冷应激干预条件建立复合应激大鼠模型,通过性行为学实验和阿朴吗啡(APO)阴茎勃起实验筛选出ED模型(ED组),未成ED者为复合应激组(S组).从ED组和S组中分别抽取20只大鼠分为ED用药组(ED-Y组)和应激用药组(S-Y组),用药组以伊木萨克片干预,每日1次,每次250mg/kg,2周后取材,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western-blot技术和免疫组化方法检测大鼠阴茎组织中激肽释放酶1、T-激肽原mRNA及蛋白表达水平.结果 激肽释放酶1在S组与ED组均显著低于N组,经药物分别干预后,S-Y组与ED-Y组均较S组与ED组组显著升高,P<0.05;T-激肽原在S组与ED组显著高于N组,分别经药物干预后均显著高于S组与ED组,P<0.05.结论(1)激肽系统改变参与了ED的发生发展,并可能在ED产生中发挥着重要作用;(2)伊木萨克片治疗ED的机制与调控激肽系统有关.

目的 探讨组织激肽释放酶1(KLK1)对心脏缺血/再灌注损伤大鼠线粒体功能的影响及其机制.方法 通过KLK1重组腺病毒感染实现大鼠心脏KLK1过表达,然后采用冠状动脉左前降支结扎和再灌注的方法建立大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型,检测梗死区面积和心脏缺血危险区细胞凋亡情况;分离大鼠心脏缺血危险区心肌组织线粒体,检测线粒体功能(线粒体过氧化物生成量、线粒体膜电位、线粒体ATP生成量).分离新生大鼠心肌细胞,通过KLK1重组腺病毒感染实现KLK1过表达,然后建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,对心肌细胞缺氧/复氧损伤模型应用缓激肽1型受体(B1R)阻断剂R715或缓激肽2型受体(B2R)阻断剂HOE140处理,利用MTT法检测细胞活力,并观察线粒体功能的变化.结果 在大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型中,KLK1过表达能减轻心肌缺血/再灌注损伤,使心肌梗死区面积减小、缺血危险区细胞凋亡减少(P均<0.01);改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,降低过氧化物生成量、增加线粒体膜电位和线粒体ATP生成量(P均<0.01).在离体大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型中,KLK1过表达能减轻心肌细胞损伤(P<0.05)、改善线粒体功能障碍(P<0.05,P<0.01),并且其作用可被B2R阻断剂HOE140抑制.结论 KLK1能改善心脏缺血/再灌注损伤后线粒体功能障碍,这可能是其具有心脏保护作用的重要机制.

目的 探索激肽释放酶6(kallikrein6,KLK6)在成人型复发性呼吸道乳头状瘤病(adult-onset recurrent respiratory papillomatosis,AORRP)发病中的作用,明确其对上皮细胞增殖、侵袭的影响.方法 在前期基因芯片分析结果 提示喉乳头瘤组织KLK6高表达的基础上,构建KLK6基因干扰慢病毒载体感染鼻咽上皮细胞,CCK8法检测细胞增殖能力,RT-PCR检测基质金属蛋白酶12 (matrix metalloproteinase 12,MMP12)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,扫描电镜观察细胞形态.结果 实验组细胞增殖能力较空白组、对照组减弱(F24h=983.543,F48h=3382.532, F72h= 250.484,P均＜0.05).MMP12 mRNA在空白组表达量为0.984±0.038,对照组为3.816±0.091,均高于实验组0.649±0.036,差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF在实验组的表达量为0.527±0.052,较空白组(0.975±0.055)和对照组(1.211±0.130)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).电镜下观察实验组细胞紧密连接数量较空白组增多.结论 KLK6可能通过同向调控MMP12、VEGF增强上皮细胞的增殖和侵袭能力,促进AORRP的发生.