目的 探讨结直肠癌(CRC)组织中热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(CHIP)、脂肪非典型钙黏蛋白4(FAT4)表达及临床意义.方法 选取2018年5月至2020年5月在该院诊治的92例CRC患者作为研究对象.免疫组化检测CRC组织和癌旁组织中CHIP、FAT4表达.Spearman秩相关分析CRC组织中CHIP与FAT4表达的相关性.Kaplan-Meier曲线分析CHIP、FAT4表达与CRC患者生存预后的关系.Cox比例风险模型分析CRC患者预后影响因素.结果 相比于癌旁组织,CRC组织中CHIP阳性率较高[65.22％(60/92)vs.10.87％(8/92)],FAT4 阳性率较低[28.26％(26/92)vs.89.13％(82/92)],差异有统计学意义(x2=63.075、70.300,P＜0.001).CRC 组织中 CHIP 与 FAT4 表达呈负相关(r=-0.781,P＜0.001).与TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移的CRC组织中CHIP、FAT4阳性率比较,TNM分期Ⅲ期、低分化程度及有淋巴结转移的CRC组织中CHIP阳性率较高,FAT4阳性率较低,差异有统计学意义(P＜0.05).CHIP阳性和CHIP阴性患者3年生存率分别为48.33％(29/60),78.13％(25/32),差异有统计学意义(Log-rank x2=6.709,P=0.010).FAT4 阳性和 FAT4 阴性患者 3 年生存率分别为 81.25％(13/16),53.95％(41/76),差异有统计学意义(Log-rank x2=5.124,P=0.032).TNM分期Ⅲ期、低分化程度、有淋巴结转移、CHIP阳性是影响CRC患者预后的危险因素,FAT4阳性是预后的保护因素.结论 CRC组织中CHIP表达升高,FAT4表达降低,两者表达与CRC不良临床病理特征有关,有助于评估CRC患者的生存预后.

目的:探究替普瑞酮又称香叶基香叶基丙酮,GGA)对脂多糖(LPS)诱导的心功能障碍的治疗作用及机制.方法:(1)取8周龄C57BL/6雄性野生型小鼠和热休克蛋白70(HSP70)羧基末端相互作用蛋白(CHIP)基因敲除小鼠,随机分为对照组、LPS组、LPS+GGA组和GGA组,每组8只.用腹腔注射LPS(25 mg/kg)的方法建立模型,于LPS刺激后1 h给予小鼠腹腔注射GGA(100 mg/kg).利用小动物超声系统评估小鼠心脏功能;采集各组小鼠血清,检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;HE染色观察病理学改变;ELISA检测心脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平;Western blot检测各组心脏组织HSP70、CHIP、核转运蛋白α2(KPNA2)、髓过氧化物酶(MPO)、血管细胞黏附分子(VCAM)和细胞间黏附分子(ICAM)的蛋白表达以及细胞核NF-κB的水平.(2)利用小鼠心肌细胞HL-1,建立LPS刺激的离体细胞炎症模型.ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-6的水平;Western blot检测心肌细胞中HSP70、CHIP和KPNA2蛋白表达;免疫荧光染色观察细胞核NF-κB的表达.结果:(1)GGA有效改善LPS刺激小鼠的心脏功能,显著提高射血分数和左室短轴缩短率(P<0.01),减少血清CK-MB和LDH含量(P<0.01),减轻心肌损伤.(2)GGA显著减少LPS引起的TNF-α和IL-6炎症因子的释放(P<0.01),以及NF-κB的入核,降低心肌组织中KPNA2、MPO、VCAM和ICAM蛋白表达,增加心肌组织和细胞HSP70的水平(P<0.01).(3)在CHIP基因敲除的心肌细胞和小鼠中,GGA不能抑制LPS引起的炎症反应,失去了改善LPS刺激小鼠心脏功能的作用.结论:GGA能够减轻LPS引起的心功能障碍,其作用机制与升高HSP70的表达,促进CHIP的活化,减少NF-κB的入核,抑制炎症因子的释放有关.CHIP的敲除使GGA丧失了减轻LPS诱导的炎症反应和心肌损伤的作用.

目的 观察E3泛素连接酶CHIP(Hsc70羧基末端相互作用蛋白)过表达质粒对脑胶质瘤细胞系U251周期及凋亡的影响.方法 用pcDNA3.1空载质粒、pcDNA3.1-CHIP质粒转染脑胶质瘤细系U251,Western blot检测CHIP蛋白的表达,流式细胞仪检测CHIP蛋白过表达对U251细胞系周期及凋亡的影响.结果 与对照组相比,CHIP组U251细胞CHIP蛋白表达量增加;与对照组相比,CHIP组U251细胞G0/G1期所占比例增加(P＜0.01),S期(P＜0.001)、G2/M期所占比例减少(P＜0.05),与对照组相比,CHIP组U251细胞凋亡率增加(P＜0.001).结论 CHIP质粒的过表达可干扰CHIP蛋白的表达,CHIP作为肿瘤抑癌因子抑制胶质瘤细胞U251 G0/G1期进展,促进胶质瘤细胞U251凋亡.

目的:探讨热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(CHIP)在高糖(HG)介导的血管内皮细胞损伤中的作用.方法:培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用RNA干扰技术下调CHIP表达,再以5.5 mmol/L正常浓度葡萄糖(NG)或25.5 mmol/L高浓度葡萄糖(HG)处理24 h,实验前用甘露醇排除渗透压对实验的干扰,接着将细胞分成NG+siRNA NC组、NG+siRNA CHIP组、HG+siRNA NC组和HG+siRNA CHIP组.MTT法和TUNEL染色法分别检测细胞活力和凋亡率;ELISA试剂盒检测内皮素1(ET-1)的表达水平;二氢乙啶荧光染料法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;一氧化氮(NO)、超氧化物岐化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)试剂盒分别检测细胞内NO水平及SOD、iNOS活性;RT-qPCR检测白细胞介素8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达量;Western blot检测CHIP、NADPH氧化酶(NOX)2、NOX4、p38、p65、p-p38、p-p65、Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果:与NG+siRNA NC组相比,HG+siRNA NC组HUVECs死亡率、凋亡率及IL-8和MCP-1 mRNA表达水平均升高(P<0.05),细胞内ROS水平升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),ET-1、NO水平及iNOS活性升高(P<0.05),p-p38、p-p65和Bax蛋白水平升高(P<0.05).与HG+siRNA NC组相比,HG+siRNA CHIP组HUVECs炎症反应和氧化应激反应明显增强,凋亡率显著升高(P<0.05),p-p38和p-p65蛋白水平升高(P<0.05).结论:下调CHIP表达可加重HG介导的血管内皮细胞损伤.

目的 探讨热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(Carboxylterminus of Hsp70 interacting pro-tein,CHIP)过表达对缺氧(Hypoxia,H)/复氧(Reoxygenation,R)诱导下受体相互作用蛋白激酶3(Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)介导的神经细胞程序性死亡的影响.方法 将体外培养的小鼠脑神经瘤(Mouse neuroblastoma N2a cells,Neuro-2a)细胞分为正常组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R+空载体组(转染pcDNA 3.1空载体质粒后构建H/R模型)和H/R+CHIP过表达组(转染pcDNA 3.1-CHIP过表达质粒后构建H/R模型);采用实时荧光量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测细胞中CHIP mRNA相对表达水平;免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中CHIP,RIPK3和混合系列蛋白激酶样结构域(Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)蛋白相对表达水平;细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)漏出量和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-Di-chlorodi hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平.结果 与正常组比较,H/R组细胞中CHIP mRNA,CHIP蛋白表达水平和细胞存活率以及SOD水平均明显降低,而LDH漏出量和RIPK3,MLKL蛋白表达以及IL-6,TNF-α,ROS,MDA水平均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+空载体组中上述各指标水平均无明显变化(P>0.05);与H/R+空载体组比较,H/R+CHIP过表达组细胞中CHIP mRNA,CHIP蛋白表达水平和细胞存活率以及SOD水平均明显升高,而LDH漏出量和RIPK3,MLKL蛋白表达以及IL-6,TNF-α,ROS,MDA水平均明显降低(P<0.05).结论 CHIP过表达可通过抑制RIPK3介导的神经细胞程序性坏死来减轻H/R诱导的神经细胞损伤.