目的:探讨Maresin 1（MaR1）在肝缺血再灌注损伤（HIRI）中的作用。方法:建立HIRI模型，随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）、MaR1缺血再灌注组（MaR1+IR组）。在麻醉前0.5 h尾静脉注射MaR1 80 ng/只，打开腹腔夹闭左、中肝叶动脉和门静脉，缺血1h后恢复供血，再灌注6 h后处死小鼠收集血液、肝组织，Sham组仅打开、关闭腹腔。RAW267.4巨噬细胞在缺氧前0.5 h给予MaR1 50 ng/ml，行缺氧8 h复氧2 h，分为对照组（Con组）、缺氧复氧组（HR组）、MaR1缺氧复氧组（MaR1+HR组）、Z-DEVD-FMK缺氧复氧组（HR+Z组）、MaR1+Z-DEVD-FMK缺氧复氧组（MaR1+HR+Z组），Con组未做任何处理，收集细胞和上清液。组间比较采用单因素方差分析，其中两两比较采用LSD- t检验。 结果:与Sham组相比，IR组丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平明显升高（ P<0.05），病理改变明显；MaR1+IR组水平较前降低（ P<0.05）、病理改变减轻。与Con组比较，HR组IL-1β和IL-18水平升高（ P<0.05），MaR1+HR组IL-1β和IL-18水平较前降低（ P<0.05）。蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶（caspase）-3、焦孔素（GSDM）E、GSDME-N蛋白的表达，HR组和IR组明显高于其他组，经MaR1预处理后表达降低。为了探究MaR1在HIRI中的机制，用Z-DEVD-FMK抑制caspase-3的表达。与HR组比较，HR+Z组IL-1β和IL-18水平降低（ P<0.05），caspase-3、GSDME、GSDME-N表达减少、核因子κB表达增加，经MaR1预处理后核因子κB表达降低。MaR1+HR组与MaR1+HR+Z组比较，结果差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:MaR1通过抑制核因子κB活化、caspase-3/GSDME介导的炎性反应，减轻HIRI。

焦孔素E蛋白与肿瘤关系密切。焦孔素E通过基因甲基化、基因突变或其他方式参与肿瘤的发生发展。焦孔素E介导的焦亡参与多种肿瘤的药物治疗过程，为肿瘤的药物治疗提供了全新的理论基础。深入研究焦孔素E将为肿瘤的认识、诊治提供一种全新的视角。

目的:探讨双氢青蒿素（DHA）、焦孔素E（GSDME）对喉癌细胞增殖、转移及焦亡的影响及相关机制。方法:取人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞，将其分为空白组（未干预的Hep-2细胞）、DHA组（采用50 μmol/L DHA处理的Hep-2细胞）、GSDME-siRNA组（转染GSDME-siRNA的Hep-2细胞）、DHA+GSDME-siRNA组（采用50 μmol/L DHA培养并转染GSDME-siRNA的Hep-2细胞）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测DHA对Hep-2细胞增殖能力的影响，计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度（ IC50）；流式细胞术检测细胞焦亡率；Transwell法检测细胞侵袭能力；蛋白质印迹法检测焦亡相关蛋白GSDME、caspase-3及己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）、亲环素D、电压依赖性阴离子通路（VDAC）蛋白的相对表达水平。 结果:10、20、40、80、160 μmol/L DHA作用Hep-2细胞48 h的细胞增殖抑制率均高于相应浓度作用24 h的细胞增殖抑制率（均 P<0.05）；DHA作用Hep-2细胞24、48 h的 IC50值分别为57.20、43.50 μmol/L，故选择50 μmol/L DHA进行后续实验。空白组、DHA组、GSDME-siRNA组及DHA+GSDME-siRNA组细胞焦亡率分别为（6.5±0.8）%、（22.7±2.5）%、（3.1±0.6）%及（7.0±1.0）%，差异有统计学意义（ F=221.20， P<0.05）；细胞侵袭数分别为（153±14）个、（95±10）个、（205±16）个及（148±16）个，差异有统计学意义（ F=56.89， P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，DHA组GSDME、caspase-3相对表达水平均高于空白组（均 P<0.05）；GSDME-siRNA组GSDME、caspase-3相对表达水平均低于DHA组（均 P<0.05）；DHA+GSDME-siRNA组GSDME、caspase-3相对表达水平均高于GSDME-siRNA组（均 P<0.05）；DHA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均低于空白组（均 P<0.05）；GSDME-siRNA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均高于DHA组（均 P<0.05）；DHA+GSDME-siRNA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均低于GSDME-siRNA组（均 P<0.05）。 结论:双氢青蒿素可增加喉癌细胞焦亡，降低细胞增殖及转移能力，可能与抑制线粒体HK-Ⅱ表达相关。

焦孔素(GSDM)E是GSDM家族成员之一,可被激活的Caspase-3特异性切割,形成具有成孔活性的GSDME-N片段,从而介导细胞焦亡的发生.GSDME介导的细胞焦亡与肿瘤发生、抗肿瘤免疫及放化疗敏感性等密切相关,且可用于肿瘤的筛查和预测等.本文对GSDME介导的细胞焦亡作用机制及其在肿瘤诊治中的研究进展进行综述.

目的 研究小檗碱对肿瘤干细胞增殖的体外抑制作用机制,并评价其体内安全性.方法 采用流式细胞术从小鼠皮肤黑色素瘤B16F10细胞中分选肿瘤干细胞;以CD44、CD133、Nanog同源盒蛋白(NANOG)、八聚体结合转录因子4(OCT4)为指标对肿瘤干细胞进行表征.将肿瘤干细胞分为对照组、全反式维甲酸(ATRA)组和小檗碱组,采用CCK-8法检测小檗碱对肿瘤干细胞活力的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、CD44+/CD133+细胞比例和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)阳性细胞率;记录小檗碱处理后肿瘤球的形态变化;记录各组细胞焦亡形态图并检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,采用Western blot法检测焦亡相关蛋白消皮素E(GSDME)、消皮素E氮端(GSDME-N)、胱天蛋白酶3(caspase-3)和裂解胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达水平.采用斑马鱼胚胎毒性实验对小檗碱的体内安全性进行初步评价.结果 与B16F10细胞比较,肿瘤干细胞中CD44+/CD133+细胞比例和NANOG、OCT4荧光强度均显著升高(P＜0.000 1).小檗碱对肿瘤干细胞的半数抑制浓度为50.98 μmol/L;与对照组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著升高,CD44+/CD133+细胞比例和SOX2阳性细胞率均显著降低(P＜0.000 1),肿瘤干细胞球皱缩,部分细胞死亡.小檗碱处理后的肿瘤干细胞,其最外层细胞膜肿胀,LDH释放率显著增加,且随剂量增大而升高(P＜0.05);小檗碱20、40 μmol/L组的GSDME-N、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著上升,GSDME、caspase-3蛋白表达水平显著下降(小檗碱20 μmol/L组除外,P＜0.05).经小檗碱处理的斑马鱼胚胎发育几乎未受影响,胚胎存活率达到100%,未观察到明显畸形.结论 小檗碱具有较好的抗肿瘤干细胞增殖活性,其作用机制可能与激活GSDME、促进细胞焦亡有关;且小檗碱体内安全性良好.

目的 探讨阿司匹林诱发焦孔素E(GSDME)依赖性细胞焦亡对结肠癌细胞增殖的影响及其相关机制.方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2;运用MTT法检测不同浓度(1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 mmol/L)阿司匹林干预对结肠癌细胞增殖活性的影响;显微镜下观察阿司匹林干预对结肠癌细胞形态学的影响;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验观察阿司匹林干预对结肠癌细胞膜完整性的影响;Western blot实验检测阿司匹林对结肠癌细胞中焦亡相关通路基因NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、焦孔素E-N(GSDME-N)的蛋白表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定Caco-2细胞上清中白介素-1 β(IL-1 β)和白介素-18(IL-18)的水平;沉默GSDME后在显微镜下观察细胞形态学变化情况;LDH释放实验观察细胞细胞膜完整性情况;ELISA法测定GSDME沉默后细胞上清中IL-1β和IL-18的水平.结果MTT结果显示,阿司匹林能够降低结肠癌细胞Caco-2的增殖活性,且呈浓度依赖性(P＜0.01);形态学观察结果与LDH实验显示阿司匹林能够促进细胞焦亡的发生(P＜0.01);Western blot结果显示阿司匹林能够升高焦亡相关通路基因 NLRP3、Caspase-1、GSDME-N 的蛋 白表达(P＜0.05);ELISA检测显示阿司匹林能够提高细胞上清中IL-1β和IL-18的含量(P＜0.01);结肠癌细胞Caco-2细胞在沉默GSDME后,细胞焦亡受到抑制(P＜0.05),IL-1 β和IL-18表达下降(P＜0.01).结论 阿司匹林能够诱发GSDME依赖性细胞焦亡,抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,从而发挥抑癌作用.

目的:观察夹脊电针对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能、脊髓组织形态、脊髓组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及活化的半胱氨酸蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)、焦孔素 D(GSDMD)-N表达的影响,探讨夹脊电针治疗SCI的作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、激动剂+电针组,每组分为3、7 d两个亚组,每个时间点6只大鼠.采用改良Allen's法制备急性SCI大鼠模型.电针组大鼠电针双侧胸(T)9、T11"夹脊"治疗,每次30 min,每日1次,分别治疗3、7 d.激动剂+电针组除电针外造模后腹腔注射单钠尿酸盐200 μg/kg.采用BBB评分对各组大鼠运动功能进行评价;HE染色法观察各组大鼠脊髓组织形态结构;免疫组织化学染色法检测各组大鼠脊髓组织焦亡相关因子NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N 阳性表达;Western blot法检测各组大鼠脊髓组织 NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N的蛋白表达水平;免疫荧光双标法检测各组大鼠离子钙接头蛋白1(Iba-1)与GSDMD-N在脊髓组织中的表达及定位情况.结果:与假手术组相比,模型组大鼠造模后及3、7 d时BBB评分降低(P<0.05);大鼠脊髓组织可见明显出血区,组织松散,出现炎性细胞浸润;脊髓组织NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N阳性表达及蛋白表达水平均升高(P<0.05);Iba-1、GSDMD-N荧光共表达强度升高(P<0.05).与模型组比较,电针组3、7 d BBB评分升高(P<0.05);脊髓组织出血、炎性细胞浸润减少,神经元形态结构基本恢复正常;脊髓组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD-N阳性表达及蛋白表达水平均降低(P<0.05);3、7 d时Iba-1与GSDMD-N荧光共表达强度降低(P<0.05).给予激动剂注射能够部分逆转上述电针作用.结论:夹脊电针能够改善SCI大鼠运动功能,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1信号通路介导的小胶质细胞焦亡有关.

目的 基于基因调控网络分析银屑病中细胞焦亡相关基因的表达模式,并探讨其在银屑病的发生和发展中的作用,以寻找可能的治疗方案.方法 使用NCBI基因表达Omnibus数据库获取银屑病患者皮损区和非皮损区样本的基因表达数据集.利用limma算法筛选出差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并运用WebGestalt对DEGs进行富集分析.收集与细胞焦亡和银屑病相关的共有基因,并利用GENIE3构建共有基因的上游转录调节网络.使用HERB和COREMINE数据库预测可能干预细胞焦亡和银屑病互作机制的中药和化学药.结果 在银屑病的发病过程中,包括半胱氨酸蛋白酶4/5/8(cysteinasparate protease 4/5/8,CASP4/5/8)在内的13个细胞焦亡基因参与了程序性细胞死亡的调节、蛋白酶活性的调控、内肽酶活性的调节以及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的产生等过程.通过识别共享基因,发现这些基因的转录过程受到包括信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在内的54个转录因子的调控,共涉及64个转录调控关系.其中,转录因子VDR、钙调蛋白结合转录激活因子 2(calmodulin binding transcription activator 2,CAMTA2)和锌指 E 盒结合同源盒蛋白 2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)可能直接调节CASP8的转录过程,而转录因子STAT3、碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子2(basic leucine zipper ATF-like transcription factor 2,BATF2)和催乳素调节元件结合蛋白(prolactin regulatory element binding,PREB)可能直接调节CASP4、CASP5的转录过程.此外,发现环孢素、甲氨蝶呤和异维A酸可能通过影响C4SP4和C4SP8基因的表达来逆转银屑病症状.基于银屑病细胞焦亡基因靶点预测得到99味核心中药,药味以苦、辛、甘为主,药性以寒、温、平为主,归经以肝、肺、脾经为主.结论 进一步丰富了以STAT3为中心的细胞焦亡调控银屑病发生机制的模型.发现VDR和ZEB2转录调节的STAT3-焦孔素E(gasdermin-E,GSDMEC)-CASP8通路以及STAT3-GSDMD-CASP4/5通路共同参与了细胞焦亡过程,并对角质形成细胞的分化和增殖产生影响.基于此通路寻找出作用于细胞焦亡过程的化学药和中药,为治疗银屑病提供新的解决方案.

目的 探讨益肾十七味丸对阿霉素诱导肾病模型小鼠焦孔素E(GSDME)、胱天蛋白酶3(caspase3)表达的影响,及其保护机制.方法 将50只BALB/c小鼠按照随机分组法分为正常组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组10只.模型组和低、中、高剂量实验组采取尾静脉注射方式一次性注射10.5 mg·kg-1阿霉素,同时低、中、高剂量实验组分别灌胃给予150、240、330 mg·kg-1·d-1益肾十七味丸;正常组和模型组均灌胃给予等体积0.9％NaCl.5组小鼠均持续给药28 d.用酶联免疫吸附试验法检测血清白蛋白(ALB)及血清肌酸酐(SCr)水平,用免疫组织化学染色法检测GSDME介导的细胞焦亡通路关键分子的表达特征,用蛋白质印迹法检测GSDME和caspase 3蛋白的表达水平.结果 中、高剂量实验组和模型组、正常组的血清ALB分别为(23.31±2.80)、(24.95±1.55)、(17.44±2.25)和(30.49±2.27)mg·mL-1,SCr 分别 为(27.16±1.37)、(25.52±1.20)、(34.41±2.12)和(23.04±2.78)μmol·L-1,caspase 3 蛋白相对表达水平分别为 0.81±0.17、0.47±0.21、1.25±0.14 和0.43±0.11,caspase 3活化形式(caspase 3 17 kDa)蛋白相对表达水平分别为0.60±0.33、0.41±0.19、0.97±0.02和 0.43±0.13,GSDME 蛋白相对表达水平分别为 0.69±0.11、0.39±0.07、1.17±0.12 和 0.41±0.03,N 末端片段裂解形成焦孔素E氮端(GSDME-N)蛋白相对表达水平分别为0.82±0.17、0.41±0.05、1.30±0.02和0.76±0.11.中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 益肾十七味丸通过调控caspase 3-GSDME焦亡通路,从而改善阿霉素肾病.

目的 观察多柔比星(Dox)对心肌细胞焦亡及Caspase-3/焦孔素E(GSDME)信号通路的影响.方法 将大鼠心肌细胞H9c2分为4组,空白对照组加入培养基;Dox组加入4μmol/L Dox处理8 h;GSDME转染对照组转染GSDME siRNA对照无干扰序列,GSDME干扰组转染GSDME siRNA,24 h后加入Dox培养8 h.采用碘化丙啶(PI)染色法观察细胞焦亡情况(PI阳性细胞率),分别用比色法、ELISA法检测细胞损伤后释放入上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18,Western blotting法检测Caspase-3/GSDME信号通路相关蛋白Cleaved Caspase-3、GSDME-N(GSDME被Cleaved Caspase-3剪切形成具有细胞成孔作用的片段)及炎症相关蛋白IL-1β、IL-18.结果 与空白对照组比较,Dox组、GSDME转染对照组PI阳性细胞率增高,细胞中LDH、IL-1β、IL-18释放量增高,细胞Cleaved Caspase-3、GSDME-N、IL-1β、IL-18蛋白表达增高(P均<0.05).与Dox组比较,GSDME干扰组PI阳性细胞率及细胞中LDH、IL-1β、IL-18释放量和GSDME-N蛋白表达降低(P均<0.05),GSDME转染对照组各指标差异无统计学意义.结论 Dox可以通过激活Caspase-3/GSDME信号通路诱导心肌细胞焦亡,导致心肌损伤.