目的:探究甲氨蝶呤载药囊泡对小鼠实验性牙周炎的治疗作用。方法:分离人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）的细胞外囊泡（EVs）。构建甲氨蝶呤（MTX）载药囊泡（MTX-EVs）并通过扫描电镜及动态光散射仪（DLS）对构建的载药囊泡进行形态大小分析，通过蛋白质印迹法对其表面特异性蛋白进行鉴定。选取4~5周C57BL/6J雄性小鼠40只，通过盲抓法随机抽取其中8只不做处理，正常饲养作为对照组（由第四军医大学实验动物中心提供），其余小鼠利用脂多糖（LPS）（2 g/L，5 μl）牙周局部注射诱导小鼠牙周炎模型，间隔1天注射1次，诱导2周。将成功诱导牙周炎模型小鼠通过盲抓法随机分为4组，每组8只。分别为LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组。牙周局部治疗2周后，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测牙龈组织炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的质量浓度。通过显微CT（micro-CT）、HE染色评估对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠的牙槽骨吸收情况。流式细胞仪分析牙龈组织中γ干扰素（IFN-γ）阳性细胞的占比。结果:扫描电镜结果显示EVs和MTX-EVs呈圆形或椭圆形，DLS粒径分析证明EVs粒径在200 nm左右，MTX-EVs粒径在300 nm左右。ELISA结果显示，对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度分别为（28.86±2.76）、（51.50±2.04）、（35.26±2.40）、（45.49±2.04）、（35.77±3.49）ng/L；LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度均显著低于LPS组（均 P<0.05）；LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度显著低于LPS+EVs组（ P<0.05）。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度分别为（125.44±4.12）、（221.64±10.59）、（178.16±16.90）、（181.09±18.22）、（170.15±9.04）ng/L；LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度均显著低于LPS组（均 P<0.05）；LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度显著低于LPS+EVs组和LPS+MTX组（均 P<0.05）。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度分别为（320.27±38.68）、（479.62±40.94）、（342.18±25.89）、（415.88±12.01）、（325.75±30.83）ng/L；LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度均显著低于LPS组（均 P<0.05）；LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度显著低于LPS+EVs组及LPS+MTX组（均 P<0.05）。micro-CT扫描结果显示，对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠右上颌第一磨牙第一牙根处釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离分别为（0.11±0.03）、（0.28±0.02）、（0.23±0.03）、（0.20±0.04）、（0.18±0.03）mm，与LPS组相比，LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组骨吸收均得到不同程度的抑制，差异均有统计学意义（均 P<0.05），其中LPS+MTX-EVs组与LPS+MTX组及LPS+EVs组相比，骨吸收抑制效果最好，且差异均有统计学意义（均 P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示，LPS组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IFN-γ阳性细胞占比分别为（11.77±1.02）%、（6.87±0.65）%及（4.15±0.92）%，LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比均显著低于LPS组（均 P<0.05），LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比显著低于LPS+EVs组（ P<0.05）。 结论:MTX-EVs可有效改善牙周炎模型小鼠牙周局部炎症环境，减少小鼠牙槽骨骨吸收。

目的:研究槲皮素对人牙龈间充质干细胞（GMSCs）的细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、表面标志物表达和成骨分化能力的影响。方法:以不使用槲皮素处理GMSCs为对照组，CCK-8法检测2.5、5、10、20 μmol/L槲皮素对GMSCs细胞增殖的影响。10 μmol/L、20 μmol/L槲皮素处理GMSCs细胞96 h后，流式细胞术检测细胞凋亡及表面标志物的表达，免疫印迹法检测GMSCs细胞Cleaved PARP、p-BCL-2、Bax和Cleaved Caspase 3蛋白表达。10 μmol/L槲皮素处理4周后，茜素红染色检测槲皮素对GMSCs成骨分化能力的影响。结果:与对照组相比，不同浓度的槲皮素干预GMSCs后细胞存活率明显下降；2.5、5、10、20 μmol/L槲皮素处理96 h后GMSCs的存活率分别为78.93%、66.81%、56.35%、39.22%（ P<0.05）。不同浓度槲皮素处理96 h后流式细胞术检测显示GMSCs的早期凋亡和晚期凋亡细胞数量均明显增加，对照组、10 μmol/L槲皮素组、20 μmol/L槲皮素组的细胞凋亡率分别为8.30%、17.88%、20.77%（ P<0.05）；免疫印迹法检测显示，与对照组比较，10 μmol/L槲皮素组和20 μmol/L槲皮素组GMSCs的促凋亡蛋白Cleaved PARP、Bax和Cleaved Caspase 3表达增加，抑制凋亡蛋白p-BCL-2表达减少（均 P<0.05）；流式细胞术检测显示，与对照组相比，10 μmol/L槲皮素干预GMSCs后CD90阳性率从88.4%降低至15.3%；20 μmol/L槲皮素干预GMSCs后CD45阳性率从3.18%上升至9.77%，CD34阳性率从1.08%上升至5.70%（均 P<0.05）。茜素红染色显示，10 μmol/L槲皮素组处理4周后GMSCs未见矿化结节形成。 结论:槲皮素能显著抑制GMSCs细胞功能，提示在进行GMSCs培养或者治疗时应避免槲皮素等黄酮类物质的干扰作用。

目的:探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC）来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，Pg）诱导的促炎状态巨噬细胞的调控，为牙周炎治疗提供依据。 方法:使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素（staurosporine，STS）诱导的BMMSC的凋亡过程；使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征；使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯（5-carboxy-tetramethylrhodamine，succinimidyl ester，5-TAMRA-SE）标记的凋亡囊泡的吞噬作用；采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1（arginase-1，Arg-1）mRNA相对表达量；采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖（lipopolysaccharide from Pg，Pg-LPS）诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响；采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factro-α，TNF-α）的分泌情况。结果:0.5 μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩，周围有明显的凋亡囊泡产生；凋亡囊泡的粒径为100~1 000 nm，平均Zeta电势为-16.6 mV；RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡；小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4（interleukin4，IL-4）刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量（261.97±15.91）较单独IL-4刺激的 mRNA表达量（115.29±15.42）显著升高（ P<0.01）；凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下，RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（39.33±4.70）个］显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（95.33±4.70）个］（ P=0.007），RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量（5.84±1.05）显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量（14.91±3.87）（ P<0.01），RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（21 899.71±409.73） ng/L］显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（71 296.50±2 344.22） ng/L］（ P =0.003）。 结论:小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡可以调控巨噬细胞极化状态，并可减轻Pg-LPS诱导下巨噬细胞的促炎状态。

慢性牙周炎是由多种致病因素引起的牙周组织慢性炎症。目前认为，细菌是慢性牙周炎的始动因子，宿主免疫影响牙周炎的发展和结局，其调控机制尚未完全清楚。细胞外囊泡是一类细胞旁分泌产生的亚细胞成分，可携带多种遗传信息介导细胞通信。细胞外囊泡已在肿瘤、心脑血管及免疫性疾病的诊疗中取得重要研究成果，为一些难治性疾病的早期诊断、对因治疗、疫苗设计提供了研究途径。在牙周组织中，牙周膜干细胞、牙龈间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、成骨细胞、破骨细胞、免疫细胞及牙周致病菌均可释放不同成分的细胞外囊泡，进行细胞通信和调控，影响慢性牙周炎的疾病进程。本文介绍了牙周组织及牙周致病菌来源的细胞外囊泡特点，综述了细胞外囊泡参与调控慢性牙周炎的研究进展，并展望了细胞外囊泡在慢性牙周炎诊断和治疗中的潜在价值。

牙龈间充质干细胞（GMSC）是一种从牙龈固有层中分离得到的成体干细胞。相较于骨髓间充质干细胞（BMSC）、脂肪间充质干细胞（ADSC）和脐带间充质干细胞（UCMSC），GMSC来源更丰富、取材相对无创且稳定性较好。近年来大量研究发现GMSC在炎症性或免疫相关疾病的治疗和再生医学中有更广阔的应用前景。本文将GMSC生物学特性、对免疫细胞（T细胞、单核-巨噬细胞、B细胞、肥大细胞、树突状细胞）的调节和在疾病（糖尿病、神经损伤性疾病、动脉粥样硬化、移植物抗宿主病、炎症性肠病、类风湿性关节炎、接触性超敏反应、牙周炎、肿瘤、银屑病、新型冠状病毒肺炎）治疗中作用等方面的研究进展作一综述。

目的:探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)移植能否抑制辐射诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)衰老，及其在预防放射性肺纤维化(RIPF)中的作用。方法:采用6 Gy照射小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(MLE12)诱导细胞衰老，照后即刻与GMSCs共培养，通过细胞形态、β半乳糖苷酶(β-Gal)染色、衰老分泌相关表型(SASP)检测以评估细胞衰老程度；C57BL/6小鼠单侧右肺17 Gy照射构建RIPF模型，照后1 d移植GMSCs，照后180 d取材，期间记录小鼠生存率，采用肺脏器比、HE染色、Masson染色评估肺内结构及肺间质胶原沉积状况，应用β-Gal免疫组织化学法与AECⅡ免疫荧光共定位评估肺内细胞衰老程度，qRT-PCR检测肺组织SASP表达变化；采用Western blot检测P53-P21、P16通路关键蛋白表达水平，免疫荧光共定位检测AECⅡ中P21表达情况。结果:GMSCs共培养能够有效抑制辐射诱导的MLE12细胞衰老，使照射后升高的β-Gal阳染率降低11.8%( t＝6.72， P<0.05)，并使SASP(IL-6、IL-8、IL-1β)的表达有效降低( t＝28.43、28.43、4.82， P<0.05)；GMSCs移植提高了受照小鼠的生存率，改善了照射诱导的肺泡结构塌陷增厚及胶原蛋白沉积情况，照射后肺组织中衰老细胞数目降低23.9%( t＝21.83， P<0.05)，SASP的表达水平下降( t＝8.86、20.63， P<0.05)；抑制照射后MLE12及RIPF小鼠肺组织中P53-P21、P16相关蛋白的上调。 结论:GMSCs通过下调衰老相关的P53-P21及P16通路蛋白，从而抑制辐射诱导的AECⅡ衰老，达到预防放射性肺纤维化发生发展的目的。

牙源性干细胞具有间充质干细胞特性,通过与内皮细胞相互作用或分泌多种血管生成相关细胞因子促进血管再生.目前已分离并鉴定出的牙源性干细胞主要包括牙髓干细胞、脱落乳牙干细胞、牙周膜干细胞、根尖牙乳头干细胞、牙龈间充质干细胞和牙囊干细胞.本文通过整理分析近年文献资料,对上述牙源性干细胞促血管生成与组织再生的相关研究进展进行综述.

牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)是存在于牙龈组织固有层内的一群间充质干细胞,它不仅可以从健康的牙龈组织中分离出来,还可以从增生性甚至炎性牙龈组织中分离出来.GMSCs因来源丰富,易于获取,且具有独特的免疫调节特性及多向分化潜能,成为口腔疾病治疗的研究热点.目前已被应用于牙周炎、牙龈萎缩、口腔癌、颌骨缺损、神经修复等口腔疾病的治疗中,该文对近年来GMSCs在口腔疾病中相关应用的研究进展作一综述.

目的:探讨人牙源性干细胞（DSC）的数据独立采集（DIA）蛋白质组学的建立方法。方法:2021年8月至2022年9月于苏州口腔医院收集牙齿，培养来自不同个体的牙髓干细胞（DPSC）、牙龈间充质干细胞（GMSC）、牙周膜干细胞（PDLSC）、根尖乳头干细胞（SCAP）和人脱落乳牙来源的干细胞（SHED），每种细胞各3个样本，共计15个样本进行DIA蛋白组学测序。通过唯一肽段分布和蛋白质覆盖分布、蛋白质质量分布评估蛋白质鉴定结果，通过组内变异系数（CV）、主成分分析及样本定量相关性等方面来评估DIA数据的质量。结果:从细胞中提取的蛋白质样本合格，总样本中共鉴定出8 662个蛋白质。蛋白质鉴定的基本统计表明所鉴定的蛋白质是可靠的。差异蛋白分析显示，DSPC组与其他各组（GMSC、PDLSC、SCAP和SHED）比较，上调和下调的蛋白分别为125、168、100、102和106、107、94、107个。差异蛋白的热图显示，同DPSC比较，GMSC、PDLSC、SCAP和SHED均有不同高表达的蛋白图谱。京都基因和基因组百科全书数据库（KEGG）分析表明不同DSC的蛋白质富集在不同的信号通路。结论:本研究成功建立了不同DSC的DIA蛋白质组学分析方法，为后续研究奠定了基础。

目的 探究人牙龈间充质干细胞条件培养液(GMSCs-CM)对大鼠皮肤创面愈合的影响及作用机制方法 将20只大鼠随机分为GMSCs-CM组和PBS组.建立皮肤切割伤模型后于大鼠皮肤创伤周围4个部位共注射GMSCs-CM或PBS液200 μL(15 μg/mL),1次/d,连续3d.分别在注射第3、7、14天时观察创面愈合情况,计算创面愈合率.通过HE染色检测病理学改变,免疫组化检测CD31的表达,Western blot检测PCNA、TGF-b1和VEGF蛋白的表达.结果 第7、14天时GMSCs-CM组的创面愈合率明显高于PBS组.病理学显示GMSCs-CM组成纤维细胞、胶原纤维及血管增多,炎性细胞浸润增加.免疫组化显示GMSCs-CM组创面CD31染色阳性的细胞数量增多.Western blot 显示第 3、7、14 天创面 PCNA、TGF-b1和VEGF蛋白表达量均显著高于PBS组(P＜0.05).结论 注射GMSCs-CM可通过上调VEGF和TGF-b1的表达,促进成纤维细胞增殖、毛细血管和肉芽组织的形成,从而加快皮肤创面的愈合.