目的:开发一种针对水牛角的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别水牛角与其他混伪品.方法:通过比对水牛、黄牛、牦牛、山羊等动物的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因序列差异,筛选水牛的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计出相应的鉴别引物,并对影响PCR体系的相关条件进行优化,考察验证方法的耐受性和适用性.结果:PCR条件为扩增体系 20 μL、退火温度 60℃、循环次数 32 次、DNA模板量为 100 ng、10 μmol·L-1 正反引物对各 0.8 μL时,使用设计的鉴别引物SN1 对水牛角进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后出现约 358 bp的特异性条带,其他物种的样品均无条带出现.结论:该PCR鉴别方法特异性好,能迅速、准确地鉴别水牛角和其他常见动物角类样品,为水牛角的真伪鉴别提供参考.

目的:探讨褪黑素（melatonin，MEL）对氟暴露子代大鼠学习记忆能力的影响及肠道菌群在其中的作用。方法:选取12只8周龄SD大鼠（雌鼠8只、雄鼠4只），体质量为180 ~ 220 g，采用随机数字表法分为对照组1和染氟组1，每组6只（雌∶雄= 2 ∶ 1），分别自由饮用纯净水和含100 mg/L氟化钠的纯净水。2个月后雌雄大鼠合笼饲养，将子代大鼠出生后（postnatal day，PND）第1天记为PND0。于PND21，采用成组设计将染氟组1子代大鼠分为染氟组（F组， n = 6）和染氟+ MEL组（FM组， n = 6），并继续饮水氟暴露；对照组1子代大鼠分为对照组（C组， n = 6）和MEL组（ n = 6）。FM和MEL组给予20 mg/kg MEL灌胃，C和F组给予相同剂量生理盐水灌胃。于PND60，采用新事物识别实验和水迷宫实验观察子代大鼠学习记忆能力，蛋白质印迹法（Western blot，WB）检测子代大鼠海马组织脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）蛋白表达水平；并采用16S rDNA测序技术检测粪便样本中肠道菌群结构和组成变化情况。 结果:新事物识别实验结果显示，4组子代大鼠鉴别指数（discrimination index，DI）比较，差异有统计学意义（ F = 3.95， P = 0.024），C、FM组DI均高于F组（均 P < 0.05）。水迷宫实验结果显示，与C组比较，F组子代大鼠穿越平台次数较少，首次到达平台时间较长（均 P < 0.05）；与F组比较，FM组子代大鼠穿越平台次数较多，首次到达平台时间较短（均 P < 0.05）。WB结果显示，与C组（1.00 ± 0.07）比较，F组BDNF蛋白表达水平（0.68 ± 0.26）较低（ P < 0.05）；与F组比较，FM组BDNF蛋白表达水平（0.99 ± 0.14）较高（ P < 0.05）。Anosim相似性分析显示，4组子代大鼠肠道菌群结构和组成存在显著差异（ R = 0.395 062， P = 0.002）。肠道菌群物种分布特征结果显示，门水平上，与C组比较，F组拟杆菌门相对丰度从14.26%升至37.00%，厚壁菌门相对丰度从68.78%降至45.95%；与F组比较，FM组厚壁菌门相对丰度从45.95%升至65.26%，拟杆菌门相对丰度从37.00%降至23.00%。属水平上，与C组比较，F组乳杆菌属、杜氏菌属、HT002、UCG-005的相对丰度均较低，未分类的 Muribaculaceae属相对丰度较高；与F组比较，FM组乳杆菌属、杜氏菌属、HT002、UCG-005的相对丰度均较高，未分类的 Muribaculaceae属相对丰度较低。线性判别分析结果显示，候选单胞生糖菌属、毛螺菌属显著富集于C组，未分类的 Muribaculaceae属、 Muribaculum属显著富集于F组，异根瘤菌-新根瘤菌-副根瘤菌-根瘤菌属显著富集于FM组。 结论:MEL可以改善氟暴露所致的子代大鼠学习记忆能力损伤，可能与改变肠道菌群结构和组成有关。

目的:获得不同方案培养海南岛东北部沿岸表层海水中快速生长型细菌的多样性和丰度，从而为海水来源的细菌样本分离以及海洋源病原菌感染预防提供参考。方法:基于分类设计原则，在2021年3月、6月、10月和12月对海南岛东北部沿岸6个地点的表层海水进行收集采样。然后，使用传统沙门菌、弧菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、放线菌以及通用海洋细菌培养方案进行细菌的富集培养。之后，使用16S rDNA一代测序和宏基因组测序鉴定细菌物种分类。结果:5种方案共培养到了1 151株快速生长型可培养细菌，可鉴定为66个属，213个种。在不同培养方案中，芽孢杆菌（ Bacillus）和克雷伯菌（ Klebsiella）具有广泛的鉴别优势，并且数量排名前列。方案1的优势属为埃希菌（ Escherichia）、克雷伯菌（ Klebsiella）以及柠檬酸杆菌（ Citrobacter）。在实验已论证的病原菌中，方案1的优势检出菌为肺炎克雷伯菌（ Klebsiella pneumoniae）和大肠杆菌（ Escherichia coli），数量分别为37株和29株，独特检出菌为肠道沙门菌（ Salmonella enterica），数量为7株。方案2的优势属为变形杆菌（ Proteus）、肠球菌（ Enterococcus）和普罗威登斯菌（ Providencia）。方案2的优势检出病原菌为奇异变形杆菌（ Proteus mirabilis），数量为66株，丰度较高的独特检出菌为霍乱弧菌（ Vibrio cholerae），数量为6株。方案3的优势菌属为克雷伯菌 、埃希菌和不动杆菌（ Acinetobacter）。方案3的优势检出病原菌为肺炎克雷伯菌，数量为53株。丰度较高的独特检出菌是医院不动杆菌（ Acinetobacter nosocomialis），共培养到7株。方案4的优势属为弧菌（ Vibrio）和假交替单胞菌（ Pseudoalteromonas），在分离培养海洋性弧菌上具有优势。方案5的优势属为微小杆菌（ Exiguobacterium） 、葡萄球菌（ Staphylococcus）和芽孢杆菌（ Bacillus）。优势检出病原菌为蜡样芽孢杆菌（ Bacillus cereus）和乳酸乳球菌（ Lactococcus lactis），数量为20株和15株，丰度较高的独特检出菌也是乳酸乳球菌。宏基因组测序发现，肺炎克雷伯菌具有显著优势，基因丰度达到51.11%，其次为 Alcanivorax sp.，占比12.57%。 结论:海南岛东北部沿岸表层海水中的细菌具有丰富的多样性，肺炎克雷伯菌在该区域海水中丰度很高。不同培养方案对不同菌属和病原菌的选择性优势不同，个别海洋细菌需要进一步优化培养条件。

目的:探索病原宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)在HPV感染、宫颈癌等宫颈相关疾病研究中的潜在价值。方法:从6例宫颈癌或癌前病变患者中采集宫颈拭子标本；提取DNA后，分别进行病原mNGS和ⅡB型限制性内切酶相关DNA位点(2bRAD)测序，比较2种方法的微生物物种定量注释结果、高丰度物种检测能力及14种高危型HPV的检测能力，从而评估病原mNGS的宫颈微生态评价能力。对病原mNGS的宿主基因组数据进行染色体拷贝数变异(copy number variation, CNV)分析，比较临床病理结果与mNGS-CNV结果的一致性。为进一步探究病原mNGS的检测能力，在23例无宫颈疾病和存在不同等级宫颈病变的患者样本中进行初步验证。结果:微生物定量注释结果显示，mNGS和2bRAD对于高丰度细菌物种的检出基本一致。对与宫颈癌高度相关的14种高危型HPV的分析结果显示，mNGS获得了与临床微生物实验室常规检测完全一致的结果。对mNGS的人源核酸数据进行CNV分析显示，3例宫颈癌中有1例存在CNV异常。此外，利用病原mNGS对存在宫颈病变和无宫颈病变患者的宫颈拭子进行分析显示，卷曲乳杆菌丰度、CNV阳性率和高危型HPV阳性率在两组患者之间存在差异，普雷沃菌属的某些物种可能与发生高级别病变和宫颈癌的高风险相关。结论:病原mNGS作为一种无创且高效的病原微生物检测技术，能通过一次检查同时得到菌群微生态、HPV感染状态及宿主染色体稳定性3方面的信息，从而对健康和宫颈疾病患者进行鉴别，因此有望为HPV感染和宫颈癌筛查和诊断开辟新途径。

目的 建立一种快速、准确、灵敏的多重PCR检测方法,用于同时鉴别6种常见食用肉类(牛、羊、鸡、猪、鹅、鸭),并评估其在肉类食品掺假鉴定中的应用价值.方法 基于GenBank数据库中6个物种的线粒体全基因组序列,筛选具有种内保守性、种间特异性的DNA序列(牛16S rRNA、羊COX-1、鸡Cytb、猪COX-1、鹅NADH2、鸭16S rRNA),并设计物种特异性引物,以此构建一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系.对该体系进行种属特异性、灵敏度和重复性研究,并进行模拟混合样品检测.结果 成功构建了一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系,该体系在非目标物种的DNA中均未有效扩增;在DNA模板量为0.0625～2 ng/μL时,6个物种的扩增产物均能检见.在鸭肉和牛肉混合比例低至0.5%时,仍能检测到鸭肉成分.结论 本研究构建了一个特异性强、灵敏度高、重复性好的多重PCR检测体系,可准确鉴别6种常见食用肉类食品中的动物源性成分,为我国常见食用肉类及肉制品的掺假鉴定提供了一种简单、实用的检测技术.

目的:利用MLPA技术结合熔解曲线法建立一种能鉴别山药及其常见混伪品的新方法.方法:以山药、参薯、木薯、番薯为研究对象,针对四个物种的matK序列分别设计MLPA特异性探针,通过DNA变性、杂交、连接、扩增及熔解反应等步骤,建立MLPA-熔解曲线鉴别体系,利用各样品熔解曲线中特异性峰(Tm值)的差异实现不同物种的鉴定.结果:27份样品中,山药Tm值为78.3 ℃,参薯Tm值为79.9℃,木薯Tm值为81.2℃,番薯Tm值为82.9℃,且相互之间没有交叉干扰.该法对山药、参薯、木薯、番薯各自单独的最低检测限为0.1 ng/μL;对相互混淆掺伪的最低有效检出率为5％.27份样品的检测结果均与测序结果一致.结论:MLPA技术结合熔解曲线法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,具有进一步推广应用的潜力.

采用田间农艺观察、单因素方差分析、相关性分析和分子鉴定等方法对我国梭梭属2个物种梭梭和白梭梭的主要生物学性状以及肉苁蓉寄生情况进行比较分析.结果表明梭梭和白梭梭在形态特征、农艺性状及花粉结构方面均存在显著差异,其中成熟的梭梭种子果翅长度和千粒重显著低于白梭梭,但发芽率和发芽势显著高于白梭梭;梭梭花粉网眼较深,网脊颗粒结构的数量显著少于白梭梭,且花粉体积小于白梭梭.相关分析表明梭梭和白梭梭农艺指标与气温和相对湿度等气候因子显著相关,其中梭梭对水分及光照等环境因子变化适宜能力较强,分布较广;而白梭梭受水分等因子限制,仅在新疆准噶尔盆地长势较好.核基因内转录间隔区(ITS,internal transcribed spacer)分子鉴定技术可以有效鉴别梭梭和白梭梭,并且证明二者均可被肉苁蓉寄生,但二者寄生的肉苁蓉持续成活率存在差异.根据梭梭和白梭梭生物学性状特征和肉苁蓉寄生情况,适宜推广梭梭作为寄主植物生产肉苁蓉药材.本研究为我国梭梭属植物的分类鉴定、引种栽培以及肉苁蓉优良寄主种质筛选提供科学依据.

川金丝猴湖北亚种(Rhinopithecus roxellana hubeiensis)是种群数量最少的川金丝猴(R.roxellana)亚种,评估其食物组成及季节变化有助于了解其觅食策略和同域分布物种间的竞争关系,对物种保护及栖息地恢复等具有重要意义.分别于2023年冬季(2月)、春季(5月)和秋季(10月)在神农架国家公园采集金丝猴新鲜粪便样品,利用DNA宏条形码技术分析了粪便中的食源植物及其季节变化.研究共鉴别出127种金丝猴食源植物,分属于110个属62个科,科水平上相对序列丰度最高的为蔷薇科(Rosaceae),属水平上相对序列丰度最高的为花楸属(Sorbus),种水平上相对序列丰度最高的是地海椒(Archiphysalis sinensis).在不同季节食物组成中,冬季有56种,春季有76种,秋季有70种,其中春季偏好的食物为花楸属植物(Sorbus sp.)(27.34％)植物和藤山柳(Clematoclethra scandens)(16.56％);秋季偏好的食物为委陵菜(Potentilla chinensis)(22.12％)和花楸属植物(16.52％);冬季偏好的食物为地海椒(33.49％)和花楸属植物(28.13％).,3个季节的共有食物有20种,冬季的特有食物有16种,春季有29种,秋季有27种.冬季特有食物有地海椒等,春季特有食物有菱叶茴芹(Pimpinella rhomboidea)等,秋季特有食物有构树(Broussonetia papyrifera)等.春季和秋季之间的重叠食物种类最多有35种,春季和冬季的重叠食物种类有32种而冬季和秋季重叠食物种类最少仅有28种.不同季节食物多样性指数存在差异,冬季食物多样性指数最低,秋季较高,春季最高.食物多样性的季节变化与神农架植被物候特性一致.研究结果揭示了神农架川金丝猴的食物组成和季节变化,以及DNA条形码技术在食性研究中的优势和存在的问题,为川金丝猴的种群繁育和保护管理等提供了重要参考价值.

[目的]2022年先后在海南省万宁市兴隆镇的番石榴、琼中黎族苗族自治县黎母山蒲桃上发现 1种蚧虫为害,对其进行报道,以期为该物种的检疫鉴定和监测防控工作提供参考.[方法]通过形态学方法,确定该蚧虫的种类;参阅国内外相关文献资料,梳理该蚧虫的基本信息及形态鉴别特征,并参照国内外有害生物风险性分析指标体系进行风险性评价.[结果]经鉴定该蚧虫为检疫性害虫七角星蜡蚧,在海南省首次发现,为外来入侵害虫,危害多种果树及观赏性植物.本研究介绍了七角星蜡蚧的分类地位、分布与寄主、形态特征、生物学和危害等;编制了中国蜡蚧属物种的检索表;七角星蜡蚧的综合风险值为1.72.[结论]七角星蜡蚧在我国属于中风险有害外来入侵生物,在我国热带地区扩散趋势明显,应加以警惕,加强其调查监测和检疫工作,以防其进一步扩散.

目的 提高黄檀属的物种鉴别成功率,并将机器学习方法与传统的基于距离/系统发育树的方法进行比较,筛选最优的ITS条形码分析方法.方法 所使用的黄檀属物种ITS序列来自实验获得的3条以及从NCBI下载的399条共96个物种.以条形码ITS作为分子标记,对比距离法、系统发育树法及机器学习方法在黄檀属物种的鉴别成功率.结果 在基于机器学习方法的分析中,黄檀属物种的平均鉴别成功率为39.59％,其中BLOG能识别出42个黄檀属物种,其正确序列分类占比为 95.75％.另外,SMO、Na?ve Bayes、JRip、J48 能够识别出 34 个物种,分别获得了 79.10％、58.71％、72.64％、76.37％的正确序列分类占比.基于系统发育树法与距离法的分析分别获得28.13％和36.46％的鉴别成功率.结论 基于机器学习的黄檀属ITS条形码基原识别比距离法/系统发育树法拥有更高的鉴别成功率和社会经济效率.建议优先利用基于ITS条形码的机器学习方法对黄檀属物种进行基原识别.