目的:比较浅部、深部感染来源的氟康唑耐药白念珠菌体外对8种抗真菌药物的敏感性及耐药基因突变。方法:26株深部感染来源白念珠菌耐药株、33株浅部感染来源白念珠菌耐药株，参照CLSI酵母菌检测方案M27-A4测定上述菌株对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶、特比萘芬、米卡芬净8种药物单独或联合的体外敏感性。提取所有耐药菌株DNA，通过PCR检测ERG3、ERG11、FUR1 3种耐药基因的突变情况。满足正态分布和方差齐性检验的定量资料两组间比较采用独立样本 t检验，不满足者组间比较采用Mann-Whitney U检验，定性资料组间比较采用卡方检验。 结果:氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟胞嘧啶的最小抑菌浓度（MIC）在浅部感染组和深部感染组间差异均有统计学意义（均 P<0.05），而两性霉素B、米卡芬净的MIC两组间差异无统计学意义（均 P > 0.05）。96.6%的菌株特比萘芬MIC值>64 μg/ml，无法进行组间对比。15株白念珠菌（7株深部感染来源、8株浅部感染来源）特比萘芬+唑类（氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑）联合药敏试验均显示为协同效应，部分抑菌浓度（FIC）指数0.033~0.187；氟胞嘧啶+唑类、氟胞嘧啶+两性霉素B、两性霉素B +氟康唑组合均无明显协同作用，FIC指数0.56~1.125。浅部感染来源白念珠菌ERG3基因突变包括错义突变V351A（33株，100%），深部感染来源白念珠菌包括错义突变V351A（13株，50%）、A353T（4株，15%）；浅部感染来源白念珠菌ERG11基因突变包括错义突变I437V（32株，97%）、Y132H（23株，70%）、T123I（16株，48%）、K128T（6株，18%）、D116E（5株，15%）、A114S（4株，12%）、E266D（2株，6%）、G448E（2株，6%）、G465S（2株，6%），深部感染来源白念珠菌包括I437V（23株，88%）、E266D（13株，50%）、E260G（5株，19%）、V488I（4株，15%）；浅部感染来源白念珠菌FUR1基因突变包括错义突变R101C（11株，33%），深部感染来源白念珠菌未检出错义突变。 结论:浅部与深部感染来源白念珠菌氟康唑耐药株对药物的敏感性及基因突变位点均有所差别。

近年来,已有多国报道发现印度毛癣菌感染引起难治性复发性皮肤癣菌病,该菌常对特比萘芬或多种抗真菌药耐药.现对印度毛癣菌感染现状进行阐述,旨在引起有关学者和相关部门重视.

目的 测定白念珠菌的菌丝相和酵母相对特比萘芬、咪康唑和制霉菌素的敏感性.方法 参照美国临床实验室标准化研究所制定的M27-A3方案,测定特比萘芬、咪康唑和制霉菌素对从临床获得的14株白念珠菌的菌丝相和酵母相MIC值.结果 ①特比萘芬对白念珠菌的菌丝相及酵母相MIC结果差异无统计学意义,且其对白念珠菌敏感株和耐药株间MIC结果差异亦无统计学意义;②咪康唑对白念珠菌的菌丝相及酵母相MIC结果差异有统计学意义,后者明显较低;该药对白念珠菌敏感株和耐药株间MIC结果的差异亦有统计学意义,后者明显较高;③制霉菌素对白念珠菌敏感株和耐药株间MIC结果差异无统计学意义,但制霉菌素对白念珠菌菌丝相及酵母相MIC结果差异有统计学意义,后者明显较高.结论 特比萘芬对白念珠菌菌丝相无抑制效果,且与氟康唑间无交叉耐药.咪康唑与氟康唑对白念珠菌存在交叉耐药,且咪康唑对白念珠菌酵母相抑制效果优于菌丝相.制霉菌素对白念珠菌菌丝相有抑制效果,且与氟康唑间无交叉耐药.

酿酒酵母中ScCsc1是一个最近鉴定的钙离子通透性压力门控阳离子通道蛋白,参与调控胞内离子稳态.ScSpo75是ScCsc1的一个同源蛋白,可能参与孢子壁的装配过程.在白念珠菌中存在一个与ScSPO75同源的基因CaSPO75,其功能尚不清楚,因此采用SAT1-flipper方法敲除CaSPO75的两个等位基因以研究其功能.通过表型筛选,发现该基因的缺失导致白念珠菌对特比萘芬(Teb)、荧光增白剂(CFW)、氯化锰和氯化锌耐受,对酮康唑(KCZ)敏感.因此,CaSPO75基因可能参与白念珠菌耐药性和细胞壁压力反应的调控,以及胞内锰离子和锌离子稳态的调控.

目的 探讨2007至2016年真菌性角膜炎的病原学、药物敏感性特征及变迁.方法 回顾性系列病例研究.收集北京同仁眼科中心门诊2007年1月至2016年12月疑为真菌性角膜炎并送检真菌培养的标本5654份.标本接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基,培养3～10 d分离阳性标本菌落.丝状真菌依据形态学进行种属鉴定,酵母样真菌采用API 20 C Aux鉴定菌种.药物敏感性试验采用Rosco纸片扩散法,药物包括那他霉素、特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B、伏立康唑.计数资料的组间差异应用卡方检验,阳性率及构成比的比较采用Spearman相关分析.结果 真菌培养阳性率为26.1％(1475/5654).标本真菌培养阳性的患者中,男女比例为1.77:1,年龄为(49.0±16.9)岁.成年患者(>20岁且≤60岁)最多、阳性率最高,占总阳性标本数的77.7％(1146/1475).培养阳性的真菌中,镰刀菌属最多,占53.5％(789/1475),其次为曲霉属17.5％(259/1475)、链隔孢属13.8％(203/1475).那他霉素敏感率最高,为92.3％(410/1475),其次为特比萘芬78.5％(1093/1475)、伏立康唑41.0％(338/1475)、两性霉素B 40.7％(553/1475).结论 成年、男性患者为真菌性角膜炎的主要患者群.镰刀菌属、曲霉属、链隔孢属为北方地区3大常见种属,且存在季节性菌谱变化.那他霉素应为经验性治疗的首选药物,对曲霉属感染首选特比萘芬.氟康唑耐药率高,不宜单独使用.

目的 鉴定犬真菌微生物群(真菌区系),并进行药敏分析,为犬致病性真菌防控提供科学依据.方法 在中国的北京地区,共有55只没有疾病史的犬被取样.用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术,进行犬的真菌检测和鉴定.对所有真菌分离株进行药敏分析.结果 分离获得29株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为黄曲霉、杂色曲霉、日本曲霉、卷枝毛霉、总状毛霉、多变根毛霉、壳青霉、产黄青霉、厚皮马拉塞霉菌、球毛壳霉、黄色蠕形霉、多喙茎点霉、尖孢镰刀菌、枝状枝孢菌、尖孢枝孢、极细枝孢霉、类星形毛孢子菌、阿萨希毛孢子菌、光滑念珠菌、库德里阿兹威毕赤酵母和东方伊萨酵母.结果表明,犬真菌种类比较丰富,获得真菌12属21种,曲霉属、毛霉属和枝孢菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位.药敏分析结果显示:这些真菌对制霉菌素、咪康唑、沃尔康唑、特比萘芬和氟胞嘧啶等已经产生了耐药性.结论 联合使用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术能有效分析犬真菌.犬的真菌大多为人兽共患病病原体.研究结果为我国犬真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防制提供有效工具.

目的:了解猴真菌携带情况,为猴致病性真菌感染防控提供科学依据.方法:用真菌培养、TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术,进行猴的真菌监测分析.对所有真菌分离株进行抗真菌药敏试验.结果:从全国几个不同厂家122只猴中分离获得71株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为阿萨希毛孢子菌、圆形毛孢子菌、白色念珠菌、黄曲霉、烟曲霉、黑曲霉、焦曲霉、杂色曲霉、聚多曲霉、匿名曲霉、产黄青霉、草酸青霉、变幻青霉、宛氏拟青霉、小刺青霉、绳状青霉、卷枝毛霉、多变根毛霉、伞枝犁头霉、球毛壳霉、热带头梗霉、节菱孢霉菌、暗孢节菱孢菌、链格孢、松色二孢菌.结果表明,猴真菌种类比较丰富,获得真菌11属25种,毛孢子菌属、曲霉属、青霉属、毛霉属、念珠菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位.抗真菌药敏试验分析结果显示:这些真菌分离株对制霉菌素、两性霉素B、氟康唑、咪康唑、酮康唑、氟胞嘧啶、特比萘芬已产生了耐药性.结论:联合使用真菌培养、TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术能有效分析猴真菌.猴的真菌大多为人兽共患病病原体.研究结果为我国猴真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防治提供科学依据.

白念珠菌是一种机会致病菌,又称白假丝酵母菌. 所致疾病一般为黏膜念珠菌病,主要以呼吸道感染为主,随生物膜的形成,最小抑菌浓度和耐药性都明显增加. 因此,从抑制白念珠菌生物膜形成方面入手,探究其与耐药性形成的相关性,成为针对耐药菌株研究新药的突破口,为临床使用抗真菌药物提供参考. 但白念珠菌病也常继发于慢性消耗性疾病,呈现内脏念珠菌病. 有研究显示院内感染的主要病原菌之一便是白念珠菌,占已统计的侵袭性真菌感染病例的66. 19％ [1]. 而近年来由于抗生素的滥用以及抗真菌药物的单一,常用药物的耐药率均偏高,如咪康唑47 . 0％、特比萘芬42 . 6％、氟康唑14. 6％ [2]. 临床致病率与耐药率的双高促使找寻新药的脚步不断加快,而中药以其毒副作用小、价格低廉、来源广泛等优点吸引了众多学者的目光.

本文建立了用于抗白念珠菌药物快速筛选的浓度梯度微流控芯片平台,通过荧光示踪剂荧光素钠在芯片上的分布定性考察浓度梯度生成情况,采用HPLC法对芯片内模型药物氟康唑的浓度梯度分布进行定量分析,进一步比较不同流速条件对浓度梯度形成的影响,最终确定两水相流速1:1的比例用于后续药物筛选研究.以阿尔玛蓝为细胞活力指示剂,通过该平台分别进行了两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、特比萘芬、5-氟胞嘧啶、卡泊芬净的药敏实验,快速高效地获得了药物的MIC范围,且与CLSI建议的白念珠菌敏感株的MIC值相一致,表明该平台可以通过一次实验快速筛选得到抗菌药物的MIC值范围.此外,该批次白念珠菌对特比萘芬呈现耐药,与96孔板法验证结果一致,表明该方法还可以用于耐药菌株的快速筛选.

特比萘芬对皮肤癣菌具有强大的杀真菌活性,研发上市应用至今近30年,在皮肤癣菌相关感染中被大量用作一线治疗用药.但近年来,出现了少量皮肤癣菌特比萘芬耐药株的报道,研究发现绝大多数耐药菌株存在角鲨烯环氧化酶(squalene epoxidase,SQLE)基因的突变.皮肤癣菌的特比萘芬耐药现象多数为个案报告,但印度等地的局部病例增多并有向全球播散输出的倾向,应引起临床警惕和关注.