目的 基于网络药理学和动物实验探究王不留行黄酮苷(VAC)对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用机制.方法 通过Swiss Target Prediction数据库收集VAC的潜在作用靶点;利用GeneCards数据库检索肺脓毒症相关的疾病靶点;运用Draw Venn Diagram软件构建VAC和疾病的共同靶点;利用STRING 11.5数据库和Cytoscape 3.10.0软件构建共同靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Metascape数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析.采用ip给予脂多糖(LPS)构建脓毒症模型,造模同时给予VAC(1、5mg·kg-1)或地塞米松干预,取各组小鼠肺组织及血清,苏木精-伊红(HE)、Masson及TUNEL染色观察肺组织形态变化、纤维化及细胞凋亡情况,ELISA法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测血清和肺组织中炎症因子水平,免疫组织化学法和Western blotting法检测肺组织炎症通路相关蛋白表达.结果 VAC和肺脓毒症共同靶点有44个;GO富集分析涉及生物过程(BP)823个条目、细胞组分(CC)52个条目和分子功能(MF)49个条目;KEGG分析筛选出癌症通路、PI3K-Akt、JAK-STAT信号通路等20条信号通路.验证实验结果显示,与对照组相比,模型组小鼠肺组织损伤且纤维化严重,肺脏指数显著增加(P＜0.05),血清及肺组织中相关炎症因子表达升高(P＜0.01、0.001).与模型组相比,VAC及地塞米松组肺组织病理形态得到改善,纤维化程度减轻,肺脏指数显著降低(P＜0.05),血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平、肺组织炎症蛋白表达量及细胞凋亡数量降低,PI3K、Akt蛋白表达升高(P＜0.05、0.01、0.001).动物实验结果与网络药理学结果一致.结论 VAC对脓毒症小鼠急性肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能与调控PI3K-Akt、NLRP3/TNF-α等通路抑制炎症的发展有关,为VAC抗炎作用机制的深入研究提供了依据.

目的 建立消核糖浆的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并测定其中10个有效成分的含量.方法 以12批消核糖浆为对象,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,以Athena C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm.色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》建立消核糖浆指纹图谱并进行相似度评价.采用ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.01%甲酸乙腈-0.01%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,结合高分辨质谱仪,以电喷雾离子源进行正负离子扫描,测定12批消核糖浆中各主要成分的含量.结果 12批样品共标定33个共有峰,相似度均大于0.97;确认其中10个色谱峰,分别为王不留行黄酮苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮苷、迷迭香酸、新橙皮苷、丹酚酸B、延胡索乙素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D;含量测定结果显示,上述10个成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(R 2＞0.999),其含量分别为0.35～0.64、3.15～5.61、0.11～0.17、1.68～3.17、1.59～1.90、1.15～1.64、0.78～1.48、0.11～0.26、0.06～0.13、0.33～0.61 mg/mL.结论 12批消核糖浆的主要成分相似但含量有所差异;本研究建立的HPLC指纹图谱和UPLC-MS/MS含量测定方法可用于消核糖浆的全面质量评价.

目的 探讨建立阿米卡星(AKN)体外肾损伤模型的方法,研究在AKN体外肾损伤模型中王不留行黄酮苷(VA)的保护作用及机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),孵育不同浓度的 AKN或 VA,MTT法检测细胞活力,确定药物浓度;采用二氢乙锭(DHE)探针和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内氧化应激状态的变化;提取总RNA,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾损伤分子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)基因表达的变化;提取总蛋白,Western blot检测铁死亡相关的蛋白溶质载体蛋白家族47 成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)的水平.结果 高浓度AKN在体外可以显著引起 HK-2 细胞活力的下降,AKN对HK-2 细胞的半数抑制浓度(IC50)为(5.74±0.47)mmol/L.25～100 μmol/L的VA可以提高AKN刺激后的HK-2 细胞活力(P<0.05).AKN(4 mmol/L)处理后,KIM-1 和NGAL的mRNA表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P<0.001);VA(50 μmol/L)可以显著降低KIM-1(P<0.01)和NGAL(P<0.05)的mRNA表达水平.AKN处理 3h后DHE染色强度升高但差异无统计学意义,6～24 h后DHE染色强度显著大于0h组(P<0.01).此外,AKN处理6～24h后MDA水平显著上升,GSH水平显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05).AKN刺激6～24h后,铁死亡相关蛋白SLC7A11 和GPX4 表达均明显下降(P<0.001).VA同时孵育 24 h,显著逆转DHE染色、GSH和MDA水平的变化及SLC7A11 和GPX4 蛋白的下降(P<0.001).结论 该研究通过高浓度AKN体外刺激HK-2 细胞建立AKN体外肾损伤模型,并发现VA可能通过抑制过氧化应激相关的铁死亡途径减轻AKN导致的肾小管细胞损伤.

目的:探究王不留行黄酮苷(VAC)对2型糖尿病(T2DM)内皮功能障碍的治疗作用及机制研究.方法:(1)通过腹腔注射链脲佐菌素和喂饲高脂饲料(21.8 kJ/kg,60%能量为脂肪)构建T2DM小鼠模型.将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、T2DM组和T2DM+VAC组,每组10只.T2DM+VAC组小鼠给予1 mg/kg VAC灌胃6周,对照组和T2DM组小鼠均给予等体积PBS.RT-qPCR和Western blot检测胸主动脉中BCL2相互作用蛋白3(BINIP3)、PTEN诱导激酶1(PINK1)和parkin的mRNA和蛋白表达.(2)在体外通过高糖(HG)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用JC-1染色检测线粒体膜电位变化,吖啶橙(AO)染色检测自噬溶酶体变化,MitoSOX染色检测线粒体超氧化物的积累.结果:与对照组相比,T2DM小鼠胸主动脉BNIP3、PINK1和parkin的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与T2DM组相比,T2DM+VAC组小鼠胸主动脉中BNIP3、PINK1和parkin的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05).JC-1、AO和MitoSOX染色结果显示,VAC可抑制HG诱导的HUVECs线粒体膜电位降低、自噬溶酶体增多和线粒体超氧化物水平升高.VAC也可减轻BNIP3过表达后HG诱导的HUVECs线粒体损伤.微小RNA-570-3p(miR-570-3p)mimic与VAC有相似的减轻线粒体损伤作用.RT-qPCR和Western blot结果显示,miR-570-3p mimic和VAC都使BNIP3、PINK1和parkin的mRNA和蛋白水平显著降低.使用miR-570-3p抑制剂后,VAC的上述作用均被抑制.结论:VAC通过miR-570-3p/BNIP3减轻HG诱导的线粒体损伤,从而缓解T2DM内皮功能障碍.

[目的]探讨王不留行黄酮苷对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及作用机制.[方法]以 ox-LDL(100 μg·mL-1)刺激 HUVECs 建立模型.采用细胞增殖活性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测1～10 μmol·L-1王不留行黄酮苷对ox-LDL诱导的HUVECs的保护作用;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测LDH的释放;采用Annexin V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)凋亡试剂盒检测细胞凋亡;使用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFD-A)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattracctant protein-1,MCP-1)、人血管内皮细胞黏附分子-1(human vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的mRNA表达;采用免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 x蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、胱天蛋白 酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、裂解的胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)、IL-1β和IL-18的蛋白表达.[结果]1～10 μg·mL-1王不留行黄酮苷减轻100 μg·mL-1的ox-LDL诱导的HUVECs损伤(P＜0.05,P＜0.01).王不留行黄酮苷减轻ox-LDL诱导的LDH释放,减少细胞凋亡,同时促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达(P＜0.01).王不留行黄酮苷显著减少了ox-LDL诱导的ROS生成,抑制ox-LDL诱导的炎症因子IL-6、MCP-1和VCAM-1的水平(P＜0.01).王不留行黄酮苷抑制了ox-LDL诱导的NLRP3炎症小体介导的焦亡相关蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).[结论]王不留行黄酮苷能够减轻ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,缓解炎症反应,其机制可能与NLRP3介导的焦亡有关.

目的 建立HPLC法同时测定行智前列敷脐散中王不留行黄酮苷和虎杖苷2种成分的含量.方法 采用HPLC法,Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-水(含0.3％磷酸,B)为流动相梯度洗脱:0～10 min 5％～35％A;10～25 min 35％A.流速1.0 ml/min,检测波长260 nm,柱温30℃.结果 在优选色谱条件下,行智前列敷脐散中王不留行黄酮苷和虎杖苷分离良好,2种成分在选定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 2),精密度、重复性和稳定性良好(RSD≤2.65％),加样回收率分别为99.71％和99.31％,并对10个批号的行智前列敷脐散中的2种指标成分进行了含量测定.研究建立的方法精密度、稳定性和加样回收率均符合含量测定要求.结论 建立了行智前列敷脐散HPLC质量控制方法,此法简便快速,稳定可靠.

目的:对2015年版《中国药典》收载的中药王不留行的对照品王不留行黄酮苷的化学结构进行修正.方法:采用大孔吸附树脂及硅胶柱色谱对王不留行药材进行化学成分分离,得到化合物1,运用化学方法、高效液相色谱法及紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、质谱等波谱方法进行结构鉴定.并且将该化合物与王不留行黄酮苷对照品(购于中国食品药品检定研究院)进行薄层、高效液相、核磁(一维及二维)和红外等方法进行数据比对分析,结果两者均一致.结果:原王不留行黄酮苷的黄酮母核4'位上连接的葡萄糖,正确连接位置应该在7位上,王不留行黄酮苷的化学结构应该是芹菜素-6-C-[α-L-阿拉伯糖-(1'''→2'')--β-D-葡萄糖]-7-O-β-D-葡萄糖苷.结论:王不留行黄酮苷的化学结构应修改为芹菜素-6-C-[α-L-阿拉伯糖-(1'''→2'')β-D-葡萄糖]-7-O-β-D-葡萄糖苷.该化合物鉴定的关键是4'-OH的信号,在核磁共振氢谱和HMBC谱中是较难得到的,如果要得到明显信号,需要在实验中选择较低的样品浓度,并且以DMSO-d6为溶剂.根据2015年版《中国药典》,王不留行黄酮苷是王不留行药材质量标准的定量成分,所以它的化学结构准确性对于国家法典的权威性而言有较大意义.

综述高血压血管重构发生的主要机制及中医药干预的研究进展.血管重构是高血压损伤靶器官的重要病理环节,异常血流动力学、血管活性物质、细胞外基质、非编码RNA等机制均可导致血管重构.中药复方(清眩降压汤、四妙勇安汤等)及中药提取物(王不留行黄酮苷、葛根素等)在干预高血压血管重构方面具有积极作用.

目的 建立颈复康片HPLC指纹图谱,从而实现对颈复康片产品质量的整体控制.方法 采用HPLC技术对颈复康片制剂中的药物成分进行研究,并确立该制剂的指纹图谱.结果 建立了颈复康片HPLC指纹图谱,在共有模式下选择并标定共有峰22个,鉴定出了3-羟基葛根素、染料木苷、芍药苷、葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆苷、王不留行黄酮苷、龙胆苦苷8个色谱峰,分析了12批次颈复康片样品,生成了对照指纹图谱,以相似度为评价指标,12批次样品的相似度值均在0.99以上.结论 建立HPLC指纹图谱鉴别方法,可操作性强,质控性好,专属性高,为有效地评价、控制颈复康片质量以及进一步深入研究提供了有效的数据支持.

目的:提高乳康舒胶囊的质量标准.方法:建立乳康舒胶囊中淫羊藿、王不留行的薄层鉴别方法;建立淫羊藿苷、王不留行黄酮苷和芍药苷的高效液相色谱法含量测定的方法.结果:薄层色谱斑点清晰,分离度良好,阴性对照制剂无干扰,耐用性和适用性良好;高效液相色谱法测定淫羊藿苷、 王不留行黄酮苷和芍药苷的线性范围分别为1.93～193.19μg·mL-1、1.87～187.39μg·mL-1和1.95～194.69μg·mL-1,r分别为0.9999、0.9999和0.9999,线性关系良好,平均加样回收率分别为104.90％(RSD=0.53％)、100.90％(RSD=0.72％)和102.00％(RSD=0.69％).结论:本文建立的方法准确、可靠,可提高乳康舒胶囊的质量控制水平.