目的:评价蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路在七氟烷减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍其中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只，4月龄，体重300~350 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(C组)、CPB组、CPB+七氟烷组(CS组)和CPB+七氟烷+PKA抑制剂H89组(CSH组)。CSH组侧脑室注射H89 5 μl后，CS组和CSH组大鼠暴露于2.4%七氟烷中1 h，然后CPB组、CS组和CSH组建立无血预充心脏不停跳CPB模型60 min。于CPB结束后2 d时采用旷场试验评估大鼠自主运动能力。于CPB结束后3 d时采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。水迷宫结束后断头取脑，分离海马组织，采用流式细胞术检测神经元凋亡率，Western blot法检测PKA、磷酸化CREB(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。 结果:4组旷场试验运动速度、路程及中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，其余3组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，原平台象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05)；与CPB组比较，CS组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，原平台象限停留时间延长，海马神经元凋亡率降低，PKA、p-CREB和BDNF表达上调( P<0.05)，CSH组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与CS组比较，CSH组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，原平台象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:七氟烷可通过激活PKA-CREB信号通路，减轻海马神经元凋亡，从而减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍。

3,5-环磷酸腺苷(cAMP)是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子.它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等.cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体[1].细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP.磷酸二酯酶是限制cAMP合成的关键因素,并且是各种特定反应动态微小区域的关键组成部分[2].研究显示,细胞内cAMP效应与蛋白激酶A(PKA)及环核苷酸-门控离子通道相关联.1998年,一种新的cAMP受体蛋白被发现,即环腺苷酸结合蛋白(EPAC).EPAC家族由作为小分子G蛋白Rap的特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)的EPAC1和EPAC2组成,其功能与PKA平行.EPAC可促使二磷酸鸟苷(GDP)转变为三磷酸鸟苷(GTP),从而激活小分子G蛋白Rap[3]相反,Rap-GTPase激活蛋白提高了内在GTP水解活性,使Rap转化为无活性的GTPase.Rap在有活性和无活性状态的转换形成其与效应蛋白结合的主要机制.EPAC的发现打破了关于cAMP与PKA的传统观点,并揭示cAMP信号在心血管系统中新的作用.这些cAMP敏感的GEF在不同亚细胞器及细胞内环境中的功能将逐步阐明,诸多研究表明,EPAC与cAMP的多种生理反应相关联,例如心肌肥大和血管炎症等[4].我们将对EPAC在心脏中的功能及相关心脏疾病中的作用进行综述,并探讨EPAC配体在相关心脏疾病中的治疗潜力.

目的 评价七氟醚对老龄大鼠海马环磷酸腺苷-蛋白激酶A-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-PKA-CREB)信号通路的影响.方法 健康老龄雄性SD大鼠60只,18月龄,体重600～750 g,采用随机数字表法分为2组(n=30):对照组(C组)和七氟醚组(Sev组).Sev组吸入2％七氟醚4h,C组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)4 h.于麻醉前1～6d(训练期)及麻醉结束后1d时(C组于相应时点)行Morris水迷宫实验.于麻醉结束后1、3和7d时(C组于相应时点)处死大鼠后取海马组织,采用ELISA法检测海马cAMP含量,Western blot法检测海马CREB、磷酸化CREB(p-CREB)及PKA表达,计算p-CREB/CREB比值.结果 与C组比较,Sev组麻醉结束后1d时逃避潜伏期和游泳距离延长,原平台穿越次数减少,原平台象限停留时间缩短,麻醉结束后1、3及7d时海马cAMP和PKA表达下调,麻醉结束后1d时CREB和p-CREB表达下调,p-CREB/CREB比值降低(P＜0.05).结论 七氟醚诱发老龄大鼠认知功能障碍的机制可能与抑制海马cAMP-PKA-CREB信号通路活性有关.

目的 评价环磷腺苷-蛋白激酶A-环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-PKA-CREB)信号通路在缺氧预处理减轻异丙酚诱导发育期大鼠中枢神经毒性中的作用.方法 SPF级雄性SD大鼠70只,7日龄,体重10～15 g,采用随机数字表法将其分为7组(n=10):生理盐水组(N组)腹腔注射等容量生理盐水;异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚50 mg/kg,待翻正反射恢复再后追加50 mg/kg;缺氧预处理+异丙酚组(HP组)缺氧预处理(氧浓度8％维持10 min,然后置于空气中10 min,循环5次)结束后2h时腹腔注射异丙酚(方法同P组);缺氧预处理+异丙酚+PKA抑制剂H89组(HPH组)侧脑室注射H89 5 μmol/5 μl,30 min后处理同HP组;异丙酚+PKA激动剂SP-CAMP组(PS组)侧脑室注射SP-CAMP 20 nmol/5μl,30 min后腹腔注射异丙酚(方法同P组);生理盐水侧脑室注射组(NI组)和5％二甲基亚砜侧脑室注射组(DI组)分别侧脑室注射5μl生理盐水和5％二甲基亚砜.待翻正反射恢复后立即处死,取海马组织,行HE染色,采用免疫组化法测定海马PKAc和磷酸化CREB (p-CREB)阳性细胞数,采用Western blot法测定海马活化caspase-3、Bcl-2、Bax、PKAc、CREB和p-CREB表达水平.结果 与N组比较,P组海马活化caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达下调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比降低(P＜0.05),海马细胞排列紊乱,细胞萎缩;与P组比较,HP组和PS组海马活化caspase-3表达下调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达上调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比升高,HP组Bax表达下调(P＜0.05),海马细胞排列整齐、胞浆丰富、胞核可见;与HP组比较,HPH组海马活化caspase-3表达上调,Bcl-2、PKAc和p-CREB表达下调,PKAc和p-CREB阳性细胞百分比降低(P＜0.05),细胞排列紊乱、细胞缩小、核固缩.结论 缺氧预处理减轻异丙酚诱导发育期大鼠中枢神经毒性的机制可能与激活cAMP-PKA-CREB信号通路有关.

目的 探讨cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)两种亚型PKG-工和PKG-Ⅱ、cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)、血管扩张刺激磷蛋白(VASP)及其两种磷酸化蛋白p-VASP Ser157和p-VASP Ser239在结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及临床意义.方法 收集云南省肿瘤医院结直肠外科2015年3-9月收治的20例有完整病理资料的CRC患者通过手术切除获得的癌组织及其同源的正常癌旁组织,用Western blot检测上述组织中的PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA、VASP、p-VASP Ser157和p-VASP Ser239的蛋白表达水平,进行统计分析.同时,分析这些蛋白表达与年龄、性别等病理数据的相关性.结果 CRC组织中的PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、VASP、p-VASP Ser157和p-VASP Ser239的蛋白表达均显著低于正常的癌旁组织(P＜0.05),而PKA差异无统计学意义(P＞0.05);并且所有蛋白因子和性别、年龄、肿瘤分化程度及TNM分期等一般病理数据无显著性相关.结论 PKG两种亚型与VASP及其两种磷酸化蛋白在CRC组织显著降低,可能会成为临床诊断治疗CRC的新靶点.

目的 探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂高脂高糖饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型后,再随机分为DM组、Met组、H-89组(腹腔注射PKA抑制剂H-89)和KN-93组(腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN-93),每组8只.用ELISA检测大鼠心房组织PKA活性,qRT-PCR检测CaMKⅡ mRNA表达,Western blot和免疫组织化学检测KCa2.2、KCa2.3和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)蛋白表达.结果 Con组、DM组、Met组和H-89组PKA活性分别为0.74±0.04、0.50±0.05、0.69±0.03和0.48±0.03.与DM组比较,Met组PKA活性明显提升(P＜0.01);与Met组比较,H-89组显著抑制PKA活性(P＜0.01).Con组、DM组及Met组CaMKⅡ mRNA分别为1.00±0.07、0.61±0.03和0.92±0.09.与Con组比较,DM组CaMKⅡ mRNA表达明显降低(P＜0.01);与DM组比较,Met组CaMKⅡmRNA表达明显增加(P＜0.01).与Con组比较,DM组心房组织p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达均明显降低,KCa2.3蛋白表达明显升高(P＜0.01).与DM组比较,Met组明显提升p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达,明显抑制KCa2.3蛋白表达(P＜0.01).与Met组比较,KN-93组和H-89组分别显著抑制p-CaMKⅡ蛋白表达和PKA活性,均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P＜0.01).免疫组织化学染色显示,与Met组比较,KN-93组和H-89组均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),与Western blot检测结果一致.结论 Met通过激活PKA/CaMKⅡ信号通路部分修复T2DM大鼠心房KCa2.2蛋白下调和KCa2.3蛋白上调.