目的 探讨金雀异黄酮对膜性肾病大鼠肾损伤及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 从45 只SD大鼠中随机取8 只作为正常组,剩余大鼠采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法构建膜性肾病模型.将 32 只成模大鼠随机分为模型组、金雀异黄酮组、瑞沙托维组和金雀异黄酮+瑞沙托维组,每组8 只.金雀异黄酮组给予金雀异黄酮30 mg/kg腹腔注射,瑞沙托维组给予瑞沙托维10 mg/kg腹腔注射,金雀异黄酮+瑞沙托维组分别给予金雀异黄酮30 mg/kg和瑞沙托维10 mg/kg腹腔注射,均1 次/d,干预4 周.检测肾功能指标[24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、血浆白蛋白];HE染色、Masson染色和透射电子显微镜观察肾组织病理学形态、胶原沉积情况及细胞超微结构;免疫荧光染色法观察肾组织中免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;ELISA法检测肾组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;RT-PCR法检测肾组织中TLR4、NF-κB p65、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况,Western blot法检测肾组织中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠24h 尿蛋白、BUN、SCr水平均明显升高(P均＜0.05),血浆白蛋白水平明显降低(P均＜0.05);肾小球体积增大,肾小管细胞空泡样变,间质区炎性细胞浸润,间质区和肾小球大量胶原沉积,胶原容积分数明显升高(P＜0.05);肾小球细胞肿胀,足突融合或消失,基底膜不规则增厚,上皮细胞下可见大量电子致密物沉积,IgG大量沉积;肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65、TGF-β1 mRNA相对表达量和TLR4、NF-κB p65、TGF-β1、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05),肾组织中Smad7 蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05).与模型组比较,各药物组大鼠24h 尿蛋白、BUN、SCr水平均明显降低(P 均＜0.05),血浆白蛋白水平均明显升高(P 均＜0.05);肾组织病理学改变、细胞超微结构改变均明显减轻,胶原容积分数明显降低(P均＜0.05),IgG沉积量明显减少;肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TLR4、NF-κB p65、TGF-β1 mRNA相对表达量和TLR4、NF-κB p65、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均明显降低(P均＜0.05),Smad7 蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05).与金雀异黄酮组和瑞沙托维组比较,金雀异黄酮+瑞沙托维组肾损伤更轻,各检测指标改善情况更明显(P均＜0.05).结论 金雀异黄酮可明显改善膜性肾病大鼠肾功能,减轻肾损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎症反应和肾纤维化有关.

目的 研究银杏二萜内酯对糖尿病(diabetic mellitus,DM)大鼠肾脏病变的影响,并基于Toll样受体 4(toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路探讨其可能的作用机制.方法 采用高糖高脂饮食 4周后腹腔注射 30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DM大鼠模型,设模型组、银杏二萜内酯组、瑞沙托维(TLR4抑制剂)组、银杏二萜内酯+瑞沙托维组,另设正常对照组.各组分别 1次/d腹腔注射给药治疗 14d后,测定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和 24h尿蛋白定量(24 h urine protein,24 h-UTP)水平,通过苏木精-伊红染色和马松染色观察肾脏病变,透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构病变,末端标记法观察细胞凋亡状况,酶联免疫吸附法检测肾组织炎症因子[白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]含量,蛋白质印迹法检测 TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NF-κB抑制因子(inhibitor α of NF-κB,IκBα)、p-IκBα、B淋巴细胞瘤 2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白(bcl-2 assaciated X protein,Bax)表达.结果 与模型组相比,银杏二萜内酯组、瑞沙托维组和银杏二萜内酯+瑞沙托维组 FBG[(9.51±1.13)mmol/L、(12.17±1.42)mmol/L、(8.09±1.05)mmol/L比(21.08±3.49)mmol/L]、Scr[(45.69±5.78)μmol/L、(51.02±6.91)μmol/L、(38.57±4.28)μmol/L比(91.44±12.50)μmol/L]、BUN[(9.28±1.54)mmol/L、(10.96±1.80)mmol/L、(7.01±0.78)mmol/L比(16.13±1.72)mmol/L]、24 h-UTP[(17.69±2.03)mg、(19.75±2.16)mg、(13.54±1.39)mg比(45.28±4.71)mg]水平明显降低(P均＜0.05);肾小球萎缩、系膜扩张、胶原沉积、炎性浸润等肾脏病变明显改善;足细胞足突融合变宽,基底膜弥漫性增厚,线粒体肿胀、嵴断裂等超微结构病变明显改善;细胞凋亡指数[(16.75±2.06)%、(20.19±2.50)%、(8.07±1.14)%比(38.45±4.61)%]明显降低(P＜0.05);IL-1β[(37.42±4.81)ng/L、(40.95±5.27)ng/L、(32.17±4.30)ng/L比(54.16±7.03)ng/L]、IL-6[(49.37±6.02)ng/L、(54.83±6.53)ng/L、(43.26±5.51)ng/L比(74.22±9.48)ng/L]、IL-8[(28.04±3.53)ng/L、(32.11±3.98)ng/L、(20.47±2.45)ng/L比(41.86±5.12)ng/L]、TNF-α[(461.57±62.85)ng/L、(510.83±69.21)ng/L、(351.29±43.08)ng/L比(772.63±120.92)ng/L]含量明显降低(P均＜0.05);TLR4[(0.19±0.04)、(0.28±0.05)、(0.13±0.03)比(0.43±0.06)]、p-NF-κB p65[(0.22±0.04)、(0.56±0.11)、(0.14±0.03)比(0.94±0.17)]、p-IκBα[(0.17±0.04)、(0.26±0.05)、(0.12±0.03)比(0.45±0.07)]、Bax[(0.18±0.04)、(0.32±0.07)、(0.14±0.03)比(1.14±0.19)]表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65[(0.27±0.06)、(0.69±0.14)、(0.17±0.04)比(1.22±0.24)]、p-IκBα/IκBα[(0.81±0.17)、(1.36±0.22)、(0.54±0.10)比(2.25±0.41)]、Bax/Bcl-2[(0.82±0.17)、(1.59±0.24)、(0.29±0.06)比(22.78±3.64)]比值明显降低,Bcl-2[(0.22±0.05)、(0.20±0.04)、(0.48±0.10)比(0.05±0.01)]表达量明显升高(P均＜0.05).银杏二萜内酯+瑞沙托维组对DM大鼠上述指标的影响明显优于银杏二萜内酯组和瑞沙托维组(P均＜0.05).结论 银杏二萜内酯可减轻DM大鼠肾脏病变和足细胞超微结构病变,改善肾功能,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路活化,降低炎症反应和细胞凋亡有关.

目的:探讨异鼠李素对高氧诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其可能机制.方法:32只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异鼠李素组、异鼠李素+瑞沙托维组[瑞沙托维(TAK-242)为TLR4特异性抑制剂],每组8只,除正常对照组正常饲养外,其余各组大鼠均置于自制高氧箱中3 d构建ALI模型,模型构建成功后,按照各组给药剂量进行腹腔注射.模型组及正常对照组腹腔注射等体积生理盐水.各组注射用药均为1次/d,连续7 d.采集大鼠腹主动脉血、肺泡灌洗液、肺组织,血气分析仪测定大鼠氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2),烘箱法测定大鼠肺组织湿重/干重(W/D),HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,并对其进行肺组织损伤评分,免疫荧光染色法观察各组大鼠肺组织中TLR4表达水平,ELISA检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平,Western blot测定大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路相关蛋白表达情况.结果:与正常对照组相比,模型组大鼠PaO2值显著降低,PaCO2、W/D值显著升高,肺组织损伤严重,肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著升高;与模型组相比,异鼠李素组及异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到缓解,PaO2值显著升高,PaCO2、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低;与异鼠李素组相比,异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到改善,PaO2值显著升高,PaCO2、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低.结论:异鼠李素能缓解高氧诱导的大鼠ALI,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关.

目的 探讨右美托咪定(DEX)对脑缺血再灌注( CIR)损伤大鼠神经的保护作用及机制.方法 40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、DEX组(100 μg/kg DEX,腹腔注射,术前30 min)、瑞沙托维(RES)组(3 mg/kg RES,腹腔注射,术前30 min),每组10只(最终成模8只).采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法进行CIR大鼠模型诱导. CIR术后2 h及24 h分别进行神经功能缺损评分;CIR术后24 h取大鼠脑组织,TCC染色法观察大脑梗死情况,TUNEL染色法检测海马CA1区组织细胞凋亡情况, Western印迹法检测脑组织中Toll样受体(TLR)-4、核因子(NF)-κB p65和p-IκB的蛋白表达水平.结果 CIR术后24 h,与模型组相比,DEX组大鼠的神经功能有了显著改善(P<0. 05),而与RES组之间差异无统计学意义(P>0. 05);与模型组相比,DEX组的脑梗死体积和海马CA1区凋亡细胞比例均显著减少(P<0. 05),而与RES组之间差异无统计学意义(均P>0. 05);DEX组大鼠脑组织中TLR-4、NF-κB p65和p-IκB蛋白表达水平均低于模型组(均P<0. 05),而与RES组之间差异无统计学意义(均P>0. 05).结论 右美托咪定对大鼠CIR损伤具有神经保护作用,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路有关.

目的 观察不同剂量TAK-242(瑞沙托维)对大鼠糖尿病周围神经痛(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的镇痛效果,探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)-Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)(HMGB 1-TLR4)轴在DPN致病过程中的作用.方法 链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射法制备DPN大鼠模型,采用随机数字表法分为模型组(DPN大鼠模型)、低剂量组(TAK-242,1 mg/kg)、中剂量组(TAK-242,3 mg/kg)、高剂量组(TAK-242,10 mg/kg)和曲马多组(曲马多,20 mg/kg),每组10只.设立空白对照组(10只).在造模前1 d(B1)及造模后第7、14天(A7、A14),对大鼠进行行为学分析以及刺激试验,比较热辐射刺激下后肢抬足潜伏期、冷刺激下大鼠足趾缩足反射潜伏期(plantar withdrawallatency,PWL)以及机械性触觉异位性疼痛阈值的变化.采用ELISA法检测各组大鼠外周血中IL-12、IL-6水平.结果 模型组大鼠热辐射下后肢抬足潜伏期、冷刺激下PWL以及机械性触觉异位性疼痛阈值均较空白对照组下降(P＜0.05).中剂量及高剂量TAK-242干预后,各刺激试验的潜伏期及疼痛阈值均较模型组、低剂量组升高(P＜0.05).ELISA检测显示中剂量及高剂量TAK-242治疗后,促炎因子IL-12及IL-6表达量较模型组、低剂量组、曲马多组下降(P＜0.05).结论 中剂量及高剂量TAK-242可提高DPN大鼠的疼痛阈值,在减少促炎因子(IL-12、IL-6)的表达量方面优于传统药物曲马多.TAK-242可能是治疗大鼠DPN的有效药物.

目的 探究瑞沙托维(TAK242)对心脏死亡大鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤的影响.方法 18只SD雄性大鼠随机数字法分为三组:对照组,心脏死亡组,心脏死亡给药组(每组6只),根据分组给或不给予瑞沙托维预处理;对照组无热缺血时间,另外两组热缺血时间30 min,所有肝脏经过冷保存24 h后进行常温携氧灌注1h,比较灌注液丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平、肝脏组织病理学变化、组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)以及下游炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、环氧化酶2(COX2)等的基因和蛋白水平.结果 与心脏死亡组相比,心脏死亡给药组的ALT、AST水平下降,差异有统计学意义(P值均＜0.05);心脏死亡给药组的组织Suzuki评分低于心脏死亡组(P值均＜0.05);心脏死亡给药组的TLR4以及下游炎症因子IL-1β、IL-6、COX2等的基因和蛋白水平也低于心脏死亡组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 瑞沙托维可以减轻心脏死亡大鼠肝组织损伤,降低ALT、AST水平,减少TLR4以及下游炎症因子基因和蛋白水平,改善心脏死亡大鼠肝脏的IR损伤.

目的 探讨热补针法治疗类风湿关节炎(RA)寒证的抗炎机制.方法 采用卵蛋白干粉、弗氏完全佐剂联合低温冷冻法制备RA寒证家兔模型.按随机数字表法将50只家兔(雌雄各半)随机分为正常组、模型组、瑞沙托维(TAK-242)组、热补针法组及脂多糖(LPS)联合热补针法组,每组10只.TAK-242组腹腔注射Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242(0.75 mg/kg),热补针法组于"足三里"行热补针法针刺,LP S联合热补针法组行热补针法针刺合腹腔注射TLR4激动剂LP S(0.25 mg/kg).连续治疗14 d后,比较各组家兔膝关节周径、皮肤温度;HE染色法观察家兔膝关节滑膜组织形态学;免疫组化法检测各组家兔膝关节滑膜组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;Western blotting法检测各组家兔膝关节滑膜组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(ERK1/2)的蛋白表达水平;实时荧光PCR检测各组家兔哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)mRNA的表达.结果 与模型组比较,各干预组家兔膝关节周径缩小、皮肤温度升高(P<0.01);HE染色法示,TAK-242组及热补针法组家兔膝关节关节囊内侧黏膜基本平整,血管翳增殖减轻,存在少量炎性细胞浸润,而LP S联合热补针法组关节囊内侧黏膜粗糙,血管翳增殖,炎性细胞浸润聚集明显;滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6平均光密度均降低(P<0.01);TLR4、MyD88、ERK1/2蛋白表达水平及mTOR、p70S6K mRNA表达水平均降低(P<0.01).与LPS联合热补针法组比较,热补针法组及TAK-242组家兔膝关节周径缩小、皮肤温度升高(P<0.01);滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6平均光密度均降低(P<0.01);TLR4、MyD88、ERK1/2蛋白表达水平及mTOR、p70S6K mRNA表达水平均降低(P<0.01).结论 热补针法可以有效改善RA寒证家兔模型膝关节肿胀,缓解炎症反应,其机制可能与抑制滑膜组织TLR4-MyD88-ERK1/2通路,拮抗细胞增殖活性,减少炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌有关.

目的:探讨西红花苷对糖尿病大鼠视网膜病变的影响,并基于 Toll 样受体 4(TLR4)/髓样分化因子 88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探索其机制.方法:采用高糖高脂饲料喂养+腹腔注射(IP)链脲佐菌素的方法制备糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型,设模型组、西红花苷组、瑞沙托维(TLR4 抑制剂)组和西红花苷+瑞沙托维组,每组 20 只.另取 20 只大鼠设为正常组.西红花苷组 IP 给药 30 mg/kg,瑞沙托维组 IP 给药 3 mg/kg,西红花苷+瑞沙托维组 IP给药 30 mg/kg+3 mg/kg,1 次/d.12 周后,通过光学相干断层扫描检测视网膜厚度,伊文思蓝渗透实验检测视网膜血管通透性,HE染色行视网膜病理学检查,透射电子显微镜观察视网膜细胞超微结构改变,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测视网膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 1β(IL-1β)、IL-8、可溶性细胞间黏附分子 1(sICAM-1)含量,Western blot法检测TLR4、MyD88、总 NF-κB p65、胞核 NF-κB p65、高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)蛋白表达.结果:与模型组比较,西红花苷组、瑞沙托维组和西红花苷+瑞沙托维组视网膜厚度升高、血管通透性降低(均P＜0.05);视网膜组织病变明显减轻,视网膜感受器内外节层及内外核层细胞超微结构病变明显改善;视网膜TNF-α、IL-1β、IL-8、sICAM-1 含量显著降低,TLR4、MyD88、胞核 NF-κB p65、HMGB1 相对表达量和胞核NF-κB p65/总NF-κB p65 比值降低(均P＜0.05).西红花苷+瑞沙托维组对DR大鼠各指标的影响明显优于西红花苷组和瑞沙托维组(均P＜0.05).结论:西红花苷可降低DR大鼠视网膜血管通透性,减轻视网膜组织病变和细胞超微结构病变,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路和 NF-κB核转位,减少促炎因子释放有关.