目的 观察心康冲剂含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响,基于GAS5-miR-21探讨其抑制CFs增殖的作用机制.方法 取SD乳鼠心肌,差速贴壁法分离CFs,采用血管紧张素Ⅱ诱导CFs增殖,在转染微小RNA-21(miR-21)过表达慢病毒、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)沉默慢病毒后,分别用心康冲剂含药血清干预24 h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,RT-qPCR检测GAS5、miR-2l、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)mRNA表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低;miR-21过表达组和GAS5沉默组CFs细胞活力增强,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,α-SMA阳性表达升高,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达降低,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).与miR-21过表达组、GAS5沉默组比较,miR-21过表达+心康冲剂组、GAS5沉默+心康冲剂组CFs细胞活力减弱,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,α-SMA阳性表达降低,GAS5、PTEN mRNA及PTEN蛋白表达升高,miR-21 mRNA及Akt、Cyclin D1、CDK4蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 心康冲剂含药血清可抑制沉默GAS5所致miR-21、Akt表达升高,对抗过表达miR-21所致GAS5和PTEN表达降低,抑制CFs增殖周期,促进GAS5发挥"分子海绵"作用,改善血管紧张素Ⅱ诱导的CFs过度增殖.

子宫中肾样腺癌是一类新近报道的子宫恶性肿瘤，伴有卵黄囊瘤成分的病例较少报道。本文报道1例59岁女性患者，因“绝经后阴道流血7个月”就诊，盆腔磁共振成像（MRI）提示恶性肿瘤，子宫内膜癌可能，2022年9月23日行宫腔诊刮术。镜下肿瘤细胞由2种成分构成，一部分肿瘤呈腺管状、乳头状及实体状生长，腺腔内见嗜伊红分泌物，免疫组织化学细胞角蛋白（CK）7、GATA3、甲状腺转录因子1（TTF1）、CD10阳性；另一部分肿瘤呈网状、微囊状，间质呈黏液样，免疫组织化学CK7、甲胎蛋白、Glypican-3、SALL4阳性，突变扩增阻滞系统PCR（ARMS-PCR）检测显示KRAS基因第2号外显子G12D点突变，诊断为子宫中肾样腺癌合并卵黄囊瘤成分。2022年10月8日行根治性手术，术后病理见腹主动脉旁淋巴结、左右盆腔淋巴结和膀胱腹膜反折处肿瘤转移。子宫内膜癌分子分型结果为非特异性分子谱。术后行BEP（地塞米松5 mg+博来霉素15 mg+依托泊苷100 mg+顺铂56 mg）方案化疗。该肿瘤生物学行为高度恶性，治疗以手术+化疗为主。

目的:通过生物信息学方法挖掘与卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药相关的可作为竞争性内源RNA（ceRNA）的长链非编码RNA（lncRNA），并进行临床验证。方法:（1）挖掘与卵巢癌相关的lncRNA并构建ceRNA调控网络：综合应用文本挖掘、数据预测和网络构建等生物信息学方法，建立与卵巢癌耐药相关的潜在ceRNA调控网络，即lncRNA-微小RNA（miRNA）-mRNA调控网络。（2）临床验证：收集2008年6月至2016年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行肿瘤细胞减灭术的卵巢癌患者共95例，其中铂类药物耐药患者54例（耐药组），铂类药物敏感患者41例（敏感组），采用实时荧光定量PCR技术检测两组卵巢癌组织中lncRNA的表达，分析lncRNA表达对卵巢癌患者预后的影响，并分析lncRNA表达对卵巢癌耐药的诊断效能。结果:（1）文本挖掘初步筛选出25个与卵巢癌发生、发展相关的差异表达lncRNA；亚细胞定位分析发现，有8个lncRNA存在于细胞质中；通过进一步数据挖掘、共线文献分析，预测其中的两个lncRNA分子［即生长阻滞特异性转录因子5（GAS5）和HOXC基因座转录因子（HOTAIR）］可作为关键ceRNA分子；构建ceRNA调控网络，GAS5与miRNA（即miR139-5p、miR-24-3p）及mRNA［即乳腺癌易感基因1（BRCA1）、肿瘤蛋白p53（TP53）、表皮生长因子受体（EGFR）、B细胞淋巴瘤2基因（BCL-2）、细胞癌基因（FOS）、H-Ras蛋白（HRAS）］组成ceRNA调控网络，HOTAIR与miRNA（即miR-30a-5p）及mRNA［即磷酸肌醇3激酶调控亚基2（PIK3R2）、TP53、丝蛋白（VIM）］组成ceRNA调控网络。（2）实时荧光定量PCR技术检测显示，与敏感组（设为1.0）比较，耐药组卵巢癌组织中GAS5的表达水平为2.1±1.6，HOTAIR的表达水平为3.5±1.9，两组分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.011， P<0.01）；Cox回归模型多因素分析显示，GAS5、HOTAIR表达为影响卵巢癌患者无病进展生存率和总生存率的独立危险因素（ P<0.05）。GAS5与HOTAIR联合检测诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.871，显著高于GAS5单独检测和HOTAIR单独检测（AUC分别为0.678、0.863），分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:GAS5与HOTAIR高表达与卵巢癌耐药密切相关，可作为卵巢癌化疗反应的潜在预测指标；GAS5与HOTAIR联合检测对卵巢癌患者具有一定的诊断效能。这种利用ceRNA调控网络预测关键分子的方法，为卵巢癌的诊断和治疗提供了新的思路。

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制.方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等.通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测 miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的 RNA表达水平;Western blot 检测 Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT 和磷酸化 AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度.结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及p-AKT表达水平降低(P＜0.05),GAS5、PTEN、Bax及 Cleaved caspase-3 表达均升高(P＜0.05).PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著.GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路.下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P＜0.05).结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡.

目的 基于GAS5/miR-21探讨心康冲剂抗心力衰竭大鼠心肌纤维化的作用机制.方法 46只SD大鼠选取6只作为正常组,剩余40只通过腹腔注射阿霉素(2 mg/mL)诱导慢性心力衰竭并分为模型组、缬沙坦组及心康冲剂组.心康冲剂组予心康冲剂0.5 g/kg灌胃,缬沙坦组予缬沙坦0.03 g/kg灌胃,正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续4周.心脏彩超检测大鼠心功能,ELISA检测血清Ⅰ型胶原(ColⅠ)和基质金属蛋白酶9(MMP9)含量,HE和Masson染色观察左心室病理变化,免疫荧光染色检测左心室α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,qRT-PCR检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)、生长阻滞特异性转录本5(GAS5)、miR-21基因表达,Western blot检测PTEN、Akt、周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)降低(P<0.05),血清MMP9、ColⅠ含量增加(P<0.05),心肌细胞肿胀变性、胞浆溶解,细胞排列紊乱,可见大量蓝色胶原纤维,胶原容积分数增加(P<0.05),左心室α-SMA表达升高(P<0.05),PTEN、GAS5基因表达降低(P<0.05),miR-21表达升高(P<0.05),Akt、CDK4、CyclinD1蛋白表达升高(P<0.05),PTEN蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,心康冲剂组和缬沙坦组大鼠LVEF、LVFS升高(P<0.05),血清MMP9、ColⅠ含量减少(P<0.05),心肌细胞肿胀、胞浆溶解程度相对较轻,蓝色胶原纤维较少,胶原容积分数减少(P<0.05),左心室α-SMA表达降低(P<0.05),PTEN、GAS5基因表达升高(P<0.05),miR-21表达降低(P<0.05),Akt、CDK4、CyclinD1蛋白表达降低(P<0.05),PTEN蛋白表达升高(P<0.05).结论 心康冲剂可能通过调节GAS5/miR-21、PTEN/Akt及细胞周期相关蛋白表达抑制细胞增殖,降低心力衰竭大鼠心肌纤维化程度.

目的 研究长链非编码RNA-生长阻滞特异转录物5(GAS5)对肾脏纤维化的作用及机制.方法 收集临床肾穿刺患者的组织标本,用原位免疫荧光方法检测GAS5在组织上的定位和表达情况;构建小鼠单侧输尿管梗阻肾脏纤维化模型,用原位免疫荧光方法检测GAS5在肾组织上的定位以及表达情况;用转化生长因子-β(TGF-β)刺激肾小管上皮细胞后,用Real-time PCR方法检测GAS5的表达水平;在肾小管上皮细胞中转染GAS5过表达质粒后,用Western印迹法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白3(Co13)、纤连蛋白1(FN1)、铜转运蛋白1(CTR1)和铜离子转运ATP酶α肽(ATP7a)的表达水平,用Real-time PCR方法检测miR-21、miR-29、CTR1和ATP7a的表达.在肾小管上皮细胞中过表达miR-29后,用Western印迹法检测CTR1的表达;在肾小管上皮细胞中过表达miR-21后,用Western印迹法检测ATP7a的表达.结果 在不同肾脏纤维化模型中,GAS5均较对照组表达下调.在肾小管上皮细胞中,过表达GAS5抑制Co13和FN1的合成(P＜0.05);过表达GAS5可上调miR-29的表达,并下调miR-21的表达(P＜0.05).miR-29在转录后水平抑制CTR1的蛋白表达(P＜0.05),且过表达GAS5能够降低CTR1的蛋白表达(P＜0.05);miR-21在转录后水平抑制ATP7a的蛋白表达(P＜0.05),但过表达GAS5不影响ATP7a的表达.结论 长链非编码RNA-GAS5通过上调miR-29,在转录后水平抑制铜转运蛋白CTR1,进而抑制肾脏纤维化.

背景 近年来,枢经推拿在治疗神经病理性疼痛方面展现出较好的疗效,但其具体作用机制尚未充分阐明.目的 以L5 脊神经结扎而成的神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据各项研究指标观察枢经推拿对大鼠的镇痛作用,探讨其是否通过影响长链非编码RNA-生长阻滞特异性转录因子 5(LncRNA-GAS5)进而调控脊髓背角神经元凋亡达到镇痛效果.方法 实验于 2021 年 1-6 月在广西中医药大学、广西大学动物医学实验中心完成.选取健康雌性SD大鼠 120 只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组,每组 24 只;模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组通过结扎L5 脊神经来制备神经病理性疼痛大鼠模型.造模 24 h后,假手术组暴露L5 脊神经几分钟,不予结扎,逐层缝合关闭伤口;假推拿组轻抚大鼠双后肢 18 min;枢经推拿组用自备按摩仪循序刺激两侧足少阳胆经上的环跳、阳陵泉、悬钟三穴,刺激力量为 5 N,频率 2 Hz,每穴、每法干预 1 min,双侧 6 个穴位,3 种手法,共计 18 min;正常组、模型组正常喂养及观察,不施加任何干预.于造模前及造模后 1、3、7、14 d分别进行行为学检测(机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期);分别于干预 7、14 d,随机抽取 12 只进行取材检测脊髓组织中介导TLR8/ERK信号通路相关蛋白表达情况〔脊髓组织B淋巴细胞瘤 2(Bcl-2)、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Toll样受体8(TLR8)蛋白表达水平,LncRNA-GAS5、miR-21基因表达水平)〕.结果 (1)行为学方面,模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠造模后 1、3、7、14 d机械缩足反射阈值均低于正常组(P＜0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组的机械缩足反射阈值在造模后 14 d均高于模型组(P＜0.05);假手术组、枢经推拿组造模后 7、14 d机械缩足反射阈值高于假推拿组(P＜0.05).假手术组、枢经推拿组在造模后 1、3、7 d热缩足反射潜伏期均低于正常组(P＜0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组在造模后 7、14 d热缩足反射潜伏期均长于模型组(P＜0.05);假手术组、枢经推拿组在造模后 14 d热缩足反射潜伏期长于假推拿组(P＜0.05).(2)信号通路相关蛋白以及基因表达水平方面,造模后 7 d,正常组Bcl-2 蛋白表达水平低于其余各组(P＜0.05);枢经推拿组的Bcl-2 蛋白表达水平高于模型组,Caspase-3、ERK、TLR8 蛋白表达水平均低于模型组(P＜0.05);枢经推拿组的Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8 蛋白表达水平低于假手术组、假推拿组(P＜0.05);造模后 14 d,枢经推拿组的Bcl-2 蛋白表达水平仍高于模型组,Caspase-3、TLR8蛋白表达水平仍低于模型组,而ERK蛋白表达水平高于模型组(P＜0.05).造模后 7d,假推拿组和枢经推拿组LncRNA-GAS5 基因表达水平均高于模型组,miR-21 基因表达水平均低于模型组(P＜0.05);枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平高于假推拿组,miR-21基因表达水平低于假推拿组(P＜0.05);造模后14 d,模型组LncRNA-GAS5基因表达水平低于正常组,枢经推拿组与假推拿组lncRNA-GAS5基因表达水平高于模型组(P＜0.05);枢经推拿组与假推拿组miR-21 基因表达水平高于模型组(P＜0.05).结论 枢经推拿手法对神经病理性疼痛大鼠起到一定的镇痛效果,初步推测镇痛作用机制可能是通过升高LncRNA-GAS5 的表达来吸附miR-21 介导TLR8/ERK通路相关蛋白抑制神经元凋亡,虽然其具体机制未明确证实,但LncRNA-GAS5 有望成为以后治疗神经病理性疼痛的新靶点.

长链非编码RNA(lncRNA)在细胞生理活动中发挥着重要的调节性作用,其异常表达与肿瘤的发生发展关系密切.生长阻滞特异性转录本5(GAS5)是一个全长651个核苷酸的lncRNA,在多种肿瘤中低表达,且其表达水平与肿瘤的临床病理特征及患者预后关系密切.近年来的研究逐步揭示了GAS5发挥肿瘤抑制功能的部分分子机制,这些发现将有助于开发新的肿瘤诊断标记物,并有可能为肿瘤的治疗提供新的靶点.

目的 探讨肺非终末呼吸单元(non?TRU)型腺癌的临床病理特征.方法 收集南京医科大学附属苏州医院/苏州肿瘤诊疗中心病理科和解放军南京总医院病理科2005年1月至2016年12月72例手术切除的肺non?TRU型腺癌的病例资料,光镜下观察组织学和细胞学特征及其前驱病变,免疫组织化学检测谱系特异性标志物和肿瘤干细胞标志物的表达.应用扩增阻滞突变系统(ARMS)或直接基因测序法检测表皮生长因子受体(EGFR)、KRAS、BRAF、EML4?ALK和ROS1基因.结果 non?TRU型腺癌常见于男性(65.3％,47/72)、有吸烟史(68.1％,49/72)、年龄较大(平均61岁)、中央型腺癌(75.0％,54/72)、有肿瘤性坏死(61.1％,44/72)和高级别(73.6％,53/72)腺癌.光镜下,non?TRU型腺癌具有复杂多变的组织学结构,通常表现为大而不规则的、裂隙状腺样或囊泡状结构,腔内充满黏液、坏死的肿瘤细胞碎屑及中性粒细胞,或表现为伴有显著黏液产生的浸润性腺癌.肿瘤细胞具有支气管表面上皮细胞、黏液柱状细胞、多角形细胞或杯状细胞特征.25.0％(18/72)、31.9％(23/72)和38.9％(28/72)的病例伴有纤毛柱状细胞化生(CCCM)、黏液柱状细胞变(MCCC)和细支气管上皮异型增生(BCCD).免疫组织化学表达细胞角蛋白(CK)7(100％,72/72)、甲状腺转录因子1(TTF1;12.5％,9/72)、Napsin A(5.6％,4/72)、MUC5AC(81.9％,59/72)、MUC5B(87.5％,63/72)、p53(66.7％,48/72)、CK5/6(12.5％,9/72)、p63(18.1％,13/72)、CK20(19.4％,14/72)和CDX2(16.7％,12/72),肿瘤干细胞标志物表达CD44(43.1％,31/72)、CD133(31.9％,23/72)、β?catenin(58.3％,42/72)、ALDH1(36.1％,26/72)、GATA6(12.5％、9/72)、SOX2(20.8％,15/72)和OCT4(29.2％,21/72).驱动基因中19例(26.4％,19/72)KRAS突变,2例(2.8％,2/72)EGFR基因突变,1例(1.4％,1/72)EML4?ALK融合基因,未检测到BRAF和ROS1改变.结论non?TRU型腺癌具有显著的临床病理特征、组织形态学表现、免疫学表型和驱动基因改变,是肺腺癌独立的少见类型.

目的 探究长链非编码RNA生长阻滞特异转录物5/微小RNA 200c-3p/血管紧张素转换酶2(lncRNA GAS5/miR-200c-3 p/ACE2)信号轴是否参与呼吸窘迫综合征(ARDS)肺上皮细胞的凋亡.方法 构建ARDS大鼠模型,实验分为对照组(Control组)、LPS处理组(ARDS组)、LPS+pcDNA处理组(ARDS+ pcDNA组)和LPS+ pcDNA-GAS5处理组(ARDS+ pcDNA-GAS5组).ARDS大鼠构建6h后收集4组大鼠动脉血及肺组织,血气分析仪进行测定氧分压(PaO2)和二氧化碳分压(PaCO2),并观察GAS5的表达变化.随后,用LPS处理人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分为未处理、LPS、LPS+ pcDNA、LPS+ pcDNA-GAS5、LPS+ pcDNA-GAS5+ pre-NC和LPS+ pcDNA-GAS5+ miR-200c-3pmimic组.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA GAS5、ACE2和miR-200c-3p的表达水平;RNA免疫沉淀和RNA下拉(pull-down)实验用于检测GAS5与miR-200c-3p的结合与调控;Western blotting法检测ACE2的蛋白表达;流式细胞术用于检测A549细胞的凋亡.组间数据比较采用t检验.结果 ARDS大鼠实验表明与ARDS+ pcDNA组相比,ARDS+ pcDNA-GAS5组PO2值显著升高[(81.5±3.3)比(57.5±5.1)mmHg,f=4.850,P＜0.05],PCO2值显著降低[(50.6±1.9)比(64.0±1.9) mmHg,t=5.940,P＜0.05].细胞实验中,与Control组相比,LPS组A549细胞中lncRNAGAS5的表达显著下降(0.43±0.01比1.01±0.01,t=0.242,P＜0.05).与LPS+ pcDNA组相比,LPS+ pcDNA-GAS5组ACE2的表达水平显著升高(0.85±0.04比0.34±0.02,t=1.800,P＜0.05);与LPS+ pcDNA-GAS5+ pre-NC组相比,LPS+ pcDNA-GAS5+ miR-200c-3p mimic组ACE2的表达水平显著降低(0.62±0.01比0.84±0.02,t=9.440,P＜0.05).与未处理组相比,LPS组A549细胞凋亡百分比明显升高(25.90±0.61比7.90±0.22,t=0.257,P＜0.05);与LPS+ pcDNA组相比,LPS+pcDNA-GAS5组凋亡百分比明显降低(10.50±0.37比26.37±0.45,t=1.760,P＜0.05);与LPS+pcDNA-GAS5+ pre-NC组相比,LPS+ pcDNA-GAS5+ miR-200c-3p mimic组细胞凋亡百分比显著升高(19.07±0.56比10.87±0.26,=0.643,P＜0.05).结论 ARDS模型中,lncRNA GAS5下调促进miR-200c-3p表达,使ACE2表达下降,从而使肺上皮细胞凋亡增加,促进ARDS进展.