随着微生物快速鉴定技术日趋兴起，MALDI-TOF MS已成为临床鉴定真菌的重要工具。蛋白质提取方法的适用性及标准化等问题阻碍MALDI-TOF MS技术在真菌领域的发展。本文分析真菌细胞壁复杂结构，介绍MALDI-TOF MS商业质谱系统推荐的蛋白质提取方法，整理MALDI-TOF MS鉴定各种属酵母样真菌和丝状真菌的蛋白质提取方法，如直接涂抹法、甲酸乙腈萃取法、磁珠研磨法等，总结目前MALDI-TOF MS鉴定真菌时蛋白质提取方法应用现状及积弊，以期为后来相关研究者提供理论参考。

半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的一种多聚糖，GM试验的主要检测物质即为GM抗原。在血清或支气管肺泡灌洗液中检测GM含量，可应用于侵袭性曲霉病（IA）的辅助诊断和疗效评估。我国目前在临床中已较为广泛地开展GM试验检测，但由于GM试验假阳性率较高，对IA的诊断和疗效评估的准确性造成一定影响，从而导致误诊及抗真菌药物应用不规范。引起GM试验假阳性的原因较多，本文将通过合并用药、宿主基础疾病和其他原因分别阐述，旨在帮助临床医生正确评估GM试验的检测结果，指导临床实践。

目的 从30种常见非挥发性中药化学成分中筛选出对糠秕马拉色菌(Malassezia furfur,MF)抑制活性最强的两种化学成分,并对两者的协同抗菌作用及作用机制进行探究.方法 采用管碟琼脂扩散法对30种中药单体化合物的MF抑制活性进行初筛;采用96孔板培养联合固体培养基接种法,测定活性最强两种单体化合物、酮康唑(KTZ)及吡啶硫酮锌(ZPT)的最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)及其联合应用之后的联合最低杀菌浓度(combined minimum bactericidal concentration,CMBC),并计算联合杀 菌指数(fractional bactericidal concentration index,FBCI);采用结晶紫法测定活性成分对MF生物膜的影响;扫描电镜观察活性成分对MF外观形态的影响;CCK-8法检测活性成分对人永生角质形成细胞(HaCaT)的细胞毒性.结果 对MF抑制活性最强的两种化学成分分别为肉桂酸(CIN)和盐酸小檗碱(BER),在作用浓度为5.00 mg/mL时,两者抑菌圈直径分别为(15.17±2.37)mm和(11.21±1.03)mm.各样品的MBC大小顺序为:BER(2 500.00 μg/mL)＞CIN(156.25 μg/mL)＞ZPT(62.50 μg/mL)＞KTZ(7.81 μg/mL).FBCI试验结果表明:CIN和BER配伍,或者两者分别与KTZ或ZPT配伍,均具有协同杀菌的作用;CIN、BER、KTZ及ZPT相互配伍的CMBC分别为 39.06、625.00、1.95、15.62 μg/mL,FBCI 均为 0.5.各样品对 MF 生物膜抑制率的大小顺序为:CIN(93.08±1.15)％＞KTZ(65.10±4.23)％＞ZPT(43.00±2.81)％＞BER(10.55±1.21)％.扫描电镜结果显示,CIN组MF细胞结构完整,但是大部分菌体细胞壁出现不同程度的凹陷;BER、KTZ及ZPT组MF细胞结构完整,但是大部分菌体整体皱缩,细胞壁表面凹凸不平、粗糙.各样品对HaCaT细胞毒性的大小顺序为:ZPT(IC50＜10.00 μg/mL)＞BER[IC50=(27.83±0.66)μg/mL]＞KTZ[IC50=(28.22±0.14)μg/mL]＞CIN(IC50＞200.00 μg/mL).结论 CIN和BER具有协同抗MF的作用,它们分别与ZPT或KTZ联合应用也有协同抗MF作用;CIN的抗菌作用机制可能与抑制生物膜相关;两者均具有应用于祛头皮屑外用药品或日化产品中的潜质.

神经发育障碍(neurodevelopmental disorders,NDDs)是由于多种遗传性或者获得性病因导致的可影响认知、运动、社会适应能力、行为等的慢性发育性脑功能障碍性疾病.天然多糖是生物体合成的,位于细胞壁、细胞内、细胞间以及分泌至细胞外的生物大分子,是生命活动的必需成分.天然多糖在神经性疾病中发挥重要作用,主要通过抗氧化应激、抗神经细胞凋亡、抗神经炎症、抗兴奋性氨基酸毒性和调节脑-肠轴等途径,改善神经性疾病引起的行为异常和临床症状.该文综述17种来自植物和真菌的生物活性多糖在神经性疾病中的干预作用,旨在为NDDs疾病的研究及治疗提供新的思路.

植物免疫受体感知病原信号分子并迅速激活自身免疫反应,对植物抵御病原微生物入侵至关重要.但在未受到病原侵染时,这些免疫受体的活性需受到严密控制,以保证植物的正常生长.水稻(Oryzasativa)受体激酶OsCERK1是重要的免疫受体或共受体,可感知病原真菌细胞壁组分几丁质.同时,OsCERK1还对感知丛枝菌根真菌的共生信号菌根因子不可或缺.最近的一项研究发现OsCERK1的一个精密调控机制,既能在植株正常生长时有效抑制OsCERK1活性,又能保证病原入侵时OsCERK1充分激活免疫反应.他们发现,正常情况下,水稻E3泛素连接酶OsCIE1通过泛素化修饰OsCERK1的激酶结构域,抑制后者的激酶活性,从而抑制免疫过度激活以保持稳态;被几丁质激活后,OsCERK1又能通过特异磷酸化OsCIE1的关键位点,阻断后者的E3连接酶活性,进而解除OsCIE1对OsCERK1的抑制.该发现对利用免疫受体进行水稻抗病改良具有重要意义.

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,其主要病因是高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染.早期宫颈癌可以通过手术及术后辅助放化疗来治疗,但晚期及复发转移性宫颈癌尚无有效方法.肿瘤免疫治疗是继手术及放化疗后新兴的辅助治疗方法.β-葡聚糖是来源于真菌、细菌和植物体细胞壁中的葡萄糖聚合物,主要影响固有免疫和适应性免疫,被视为天然的生物免疫调节剂而应用于肿瘤免疫治疗中.β-葡聚糖缺乏蛋白质和肽类成分,具有低免疫原性和低毒性.因此,β-葡聚糖的研究及应用为宫颈癌的预防和治疗提供了更多选择.本文对β-葡聚糖的抗肿瘤作用机制及其免疫治疗宫颈癌的研究进展进行综述.

芽胞杆菌是土壤和植物微生态的优势微生物种群,具有很强的抗逆能力和抗菌防病作用,是目前研究和应用较多的一类生防菌.芽胞杆菌可产生醇、酮和酸等多种挥发性物质,能够有效抑制多种病原菌的生长.此外,芽胞杆菌还能合成多种非挥发性抑菌物质如脂肽类化合物、聚酮类化合物和环二肽等抑制某些细菌和真菌的生长.芽胞杆菌的有效抑菌物质主要通过破坏病原菌的细胞壁、细胞膜及影响病原菌的代谢通路发挥其抑菌活性.本文主要总结了芽胞杆菌发酵液中的挥发性、非挥发性抑菌物质及其抑菌机制,为芽胞杆菌作为生防菌的深度开发与应用提供参考.

烟曲霉(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)是最普遍的空气传播真菌病原体,可导致免疫功能低下患者发生致命的侵袭性曲霉病.对病原体与宿主免疫系统的相互作用过程的了解是理解其致病性的关键.通过保守的跨膜或可溶性的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)识别病原体表面上的保守分子结构,称为病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs).C型凝集素受体(C-type lectin receptors,CLRs)是PRRs中主要受体家族之一,CLRs可以通过C型凝集素样结构域(C-type lectin-like domains,CTLDs)来识别β-葡聚糖、甘露糖、几丁质等真菌细胞壁成分,从而诱导固有免疫和获得性免疫来清除病原体.目前烟曲霉中所涉及的CLRs主要为Dectin-1、Dectin-2、MelLec、DC-SIGN等,这些CLRs在宿主细胞识别烟曲霉中起着至关重要的作用,并且针对Dectin-1及Dectin-2已开发出新型抗烟曲霉药物.因此为了进一步了解与烟曲霉相关的各类CLRs的作用机制及其相关信号通路,为开发新型抗真菌药物提供一种新思路,文章对与烟曲霉相关的CLRs最新研究进展进行了综述.

为了解彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius,Pt)和褐环乳牛肝菌(Suillus luteus,Sl)的耐镉(Cd)机制和Cd积累特征,本研究分析了 Pt和Sl在3个Cd2+浓度(0.1、1.0和10.0 mg·L-1)下细胞形态、胞外分泌物和抗氧化物质等的生理生态变化.结果表明:Sl细胞发生质壁分离且细胞壁明显增厚,而Pt细胞变形严重且内含物大量流出;Pt和Sl均可分泌异羟肟酸型铁载体;不同有机酸的分泌量因菌株不同而表现出多样性,其中琥珀酸是Pt和Sl主要分泌的有机酸;此外,Pt和Sl抗氧化酶活性及非酶抗氧化物质含量的变化也因菌株不同而异;随Cd2+浓度的增加,Pt和Sl抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性和抗坏血酸(AsA)含量均有明显的增加趋势;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化不同,其中Pt GSH含量与GR活性呈现相反的变化趋势,低浓度Cd胁迫使Pt和Sl的SOD活性显著增强,Pt的CAT活性先降低后升高.综上所述,Pt和Sl对Cd2+胁迫在生理生态上有不同的应激模式,随Cd胁迫的增强,Pt和Sl均可通过增强SOD、CAT、APX活性、增加AsA含量、分泌有机酸和铁载体抵御Cd胁迫;此外,细胞壁增厚、GSH螯合作用也是Sl的重要抗Cd机制.

丝状真菌表面展示技术是将表达的目的蛋白固定在丝状真菌细胞表面的一项新兴基因工程技术.丝状真菌具有极强的蛋白质分泌能力和良好的蛋白质翻译后加工能力,因而越来越多的丝状真菌表面展示技术得到开发和应用.本文就丝状真菌表面展示系统的研发和应用进展进行综述,并介绍与该系统构建密切相关的丝状真菌的细胞壁组成、锚定蛋白和遗传转化方法等技术.