目的:建立诺如病毒原型株诺瓦克病毒（Norwalk virus，NV）P蛋白细菌细胞表面展示体系，并对其进行功能评价。方法:构建pET28a-inaQn-TB-P(GI.1)重组质粒，并在大肠杆菌中进行诱导表达，建立升级版假NV。以猪胃粘膜提取物中已知NV受体组织血型抗原（human histo-blood group antigens，HBGAs）为对象，验证假病毒特异性识别、捕获HBGAs的能力；以生菜叶中类HBGAs为对象，验证升级版假NV捕获生菜叶中NV配体的特性，并对所捕获的配体进行初步分析。结果:获得可高效捕获NV受体/配体的假病毒体系，该体系可特异性识别并捕获猪胃粘膜提取物中A型HBGA和生菜中类HBGAs。另外，所捕获生菜中类HBGAs可以分别被A、H和Lewis a型HBGA单克隆抗体识别，且以H型HBGA抗原位点暴露最多。结论:本研究成功建立了NV的P蛋白细菌细胞表面展示体系，可以识别并捕获HBGAs及其类似物，为解析NV与配体互作机制提供技术平台。

目的:探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A（TRABD2A）单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法（cART）的人免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者储存库细胞的作用效果，建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法:2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名，接受cART的HIV-1感染者（cART组）41例，未接受cART的HIV-1感染者（no-cART组）8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体，分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞（PBMC）和CD4+T淋巴细胞，利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量，同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况，比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR（人类白细胞DR抗原）表达量的差异。结果:接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV-1产量，未处理组为0（0，440），使用负抗体所释放的病毒量为0（0，390），二者差异无统计学意义（ P>0.05），而使用正抗体所释放的病毒量为1 259（0，4 269）和3 142（1 292，5 060），与使用负抗体所释放的病毒量相比，差异均有统计学意义（ P<0.05）。利用健康对照者PBMC对感染者PBMC进行倍比稀释，经正抗体处理后病毒释放量等比例下降［未稀释、稀释5、25、125、625倍对应的HIV-1产量分别为4 670（3 339，7 697）、1 860（1 509，4 615）、1 550（1 150，2 680）、602（255，1 441）、2（0，37）］。且TRABD2A单抗处理后的细胞静息状态与未处理组差异无统计学意义（未处理组与正抗体-1处理组的CD25阳性细胞百分率分别为3.89±1.31、4.60±1.74，CD69阳性细胞百分率分别为2.50±1.27、2.18±0.51，HLA-DR阳性细胞百分率分别为7.66±3.78、8.79±3.42； P均>0.05），未处理与正抗体-1的病毒群抗原基因（Gag）表达量分别为1和0.82±0.55，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:人源化TRABD2A单克隆抗体能够有效阻断TRABD2A的蛋白活性，可在不改变细胞静息状态和全基因组转录水平的情况下，显著促进HIV-1感染者外周血中储存库细胞释放子代病毒，且通过此方式所引起的储存库病毒释放量与储存库细胞数量呈正相关。

材料科学的进步促进了疾病的诊断与治疗。近年来，利用细胞膜包被技术赋予目的材料生物活性为医用材料的发展提供了一个崭新的平台，在此基础上发展起来的细胞膜展示技术也得到更广泛的应用。细胞膜展示技术通过展示细胞膜表面特定成分，增强或赋予细胞膜特定功能，再将其与生物材料结合，精准地增强和赋予材料特定的生物功能。本文提出细胞膜展示技术的概念，对其定义、分类、理论基础及具体实施方式进行系统阐述，并分析该技术在医药领域的具体应用场景和未来发展趋势。

目的:采用基于体素形态学和基于球谐函数点分布模型技术，比较分析内侧颞叶癫痫（mTLE）海马体积和表面局部形态的改变特征。方法:回顾性收集2009年7月至2019年2月东部战区总医院66例mTLE患者［男31例，女35例，年龄17~48（28±8）岁］，以及80名年龄性别匹配的健康对照者［男38名，女42名，年龄19~46（27±7）岁］，采集全脑结构磁共振高分辨率T 1加权成像（3DT1）数据。分别采用基于体素的形态学分析方法测量海马体积，基于球谐函数形状技术测量海马表面形态改变，比较分析mTLE患者相对于健康对照海马萎缩模式；使用Pearson相关分析观察mTLE海马形态学变化与病程的关系。 结果:与健康对照组相比，mTLE组病侧海马体积明显减小（ Z值：-1.55±0.57比0.38±0.58， P<0.001），并与病程呈负相关（ r=-0.297， P=0.016）。表面形态学分析精细地显示，mTLE患者病侧海马萎缩主要发生在海马的头部、中部外侧和后尾部，其位移值与病程呈明显负相关（ r =-0.336， P=0.006），并与海马灰质体积呈正相关（ r=0.336， P=0.006）。 结论:基于体素形态学分析展示海马体积整体减小，而基于表面形状的形态学测量可描绘海马萎缩的局部形态学变化。

蛇毒已被证明具有抗炎活性,其中包含许多免疫原性弱、活性强的短肽小分子.蛇毒腺是分泌毒液的器官,含有毒素成分及调控其分泌过程的大量生物活性成分.缓激肽2型受体(B2R)参与重要的细胞内信号通路,作为炎症的调节因子成为潜在的抗炎药物开发的靶点.为了获得特异性的B2R结合肽,利用尖吻蝮蛇Deinagkistro-don acutus毒腺T7噬菌体文库对靶点B2R进行3轮生物淘选,测序获得了多个具有潜在结合能力的序列.通过序列长度、溶解性预测、稳定性预测和分子对接等一系列生物信息学分析,最终确定1个含25个氨基酸的肽段,命名为DAvp-4.合成该肽段,通过表面等离子体共振技术验证了DAvp-4和B2R的结合能力,在脂多糖诱导的巨噬细胞模型及糖尿病视网膜病变小鼠模型中肯定了其抗炎作用.此研究不但获得了一个具有成药潜力的毒腺多肽,还显示了噬菌体展示技术在筛选天然产物成分研究中的有效性.

丝状真菌表面展示技术是将表达的目的蛋白固定在丝状真菌细胞表面的一项新兴基因工程技术.丝状真菌具有极强的蛋白质分泌能力和良好的蛋白质翻译后加工能力,因而越来越多的丝状真菌表面展示技术得到开发和应用.本文就丝状真菌表面展示系统的研发和应用进展进行综述,并介绍与该系统构建密切相关的丝状真菌的细胞壁组成、锚定蛋白和遗传转化方法等技术.

目的 建立淋巴细胞激活基因3(LAG-3)免疫噬菌体纳米抗体文库,获得高特异性和亲和力的抗LAG-3纳米抗体,并鉴定其功能活性.方法 采用人LAG-3蛋白免疫羊驼,获取外周血cDNA;通过巢式PCR获得纳米抗体基因,构建至pComb3XSS质粒,电转至大肠杆菌XL1-Blue中构建纳米抗体噬菌体免疫文库,并对文库进行质量分析.通过噬菌体展示技术筛选抗LAG-3特异性纳米抗体,通过第二代基因测序技术获得纳米抗体的基因序列.将目的序列构建到大肠杆菌BL21(DE3)周质表达载体pET-22b(+)中进行抗体表达,Prism A柱进行纯化,通过高效液相色谱-质谱分析(HPLC-MS)、ELISA、Western blot法和表面等离子共振技术(SPR)进行抗体性质和功能分析.结果 构建的纳米抗体噬菌体免疫文库的库容为7.20 ×108菌落形成单位(CFU),序列分析文库多样性良好,经过4轮淘筛后获得3条具有不同氨基酸序列的抗LAG-3纳米抗体,分别为重链抗体重链可变区结构域-L1-3(VHH-L1-3)、VHH-L3-2和VHH-L13-2,纳米抗体表达纯化后纯度在95％以上,三种抗体均可以与重组人LAG-3蛋白进行特异性结合;其中VHH-L13-2抗体的亲和力指数KD值为3.971 × 10 mol/L,且对于LAG-3和纤维蛋白原样蛋白1(FGL-1)的结合具有抑制作用,半数抑制浓度(IC50)值为15.58 nmol/L.结论 成功构建了 LAG-3纳米抗体噬菌体免疫文库,筛选获得了特异性好、亲和力高的LAG-3纳米抗体,且对于LAG-3与其配体的结合具有一定的抑制作用.

鱼明胶次优的凝胶特性限制了其商业应用,酶催化改性鱼明胶有着绿色环保、安全高效等巨大优势,然而,目前报道的明胶改性酶较少,且多为蛋白质共价交联酶,易使明胶形成热不可逆凝胶.克隆出了两种增加胶原蛋白的非共价作用的脯氨酸羟化酶,对其进行原核表达.纯化后,分别对鱼明胶进行催化,结果表明两种酶具有改善鱼明胶胶强度和质构特性的效果.研究了钝齿棒杆菌的表面展示技术,将两种酶分别展示在钝齿棒杆菌表面,制备了一种以钝齿棒杆菌为载体的固定化酶体系,研究两种固定化酶体系对鱼明胶的改性效果.丰富了鱼明胶的催化酶体系,为鱼明胶的催化改性提供新思路.

目的:通过基因工程技术制备表面展示具有促进膜融合作用的水泡性口炎病毒糖蛋白G(vesicular stomatitis virus glycoprotein,VSVG)的外泌体 VSVG-Exos,利用核酸探针介导 DNA 杂交链式反应在其膜表面修饰靶向树突状细胞间黏附分子-3-结合非整合素DC-SIGN的核酸适配体,构建功能化外泌体,通过重编程肿瘤细胞与树突细胞之间的靶向识别过程增强相互作用.方法:以小鼠乳腺癌细胞4T1和小鼠树突状细胞DC2.4为研究对象,通过共聚焦成像和流式细胞术等实验证明VSVG-Exos以膜融合方式特异性结合4T1细胞,以及DC-SIGN适配体具有特异性靶向DC2.4细胞的能力.结果:功能化外泌体可以重编程修饰4T1细胞,增强与DC2.4细胞之间的靶向识别效应.结论:功能化外泌体有效地输送具有特定功能的分子到肿瘤细胞表面,对其进行重编程修饰,提高免疫细胞精准定位和高效攻击肿瘤细胞的能力,为靶向清除肿瘤细胞提供了新的思路和策略.

背景与目的:三维(3D)可视化技术借助计算机对CT和(或)MRI的检查图像进行3D立体重建,可直观、清晰地将肝脏、胰腺、胆道、血管及肿瘤的形态和空间分布等进行展示,这对于明确肝脏脉管系统的解剖变异、准确计算残余肝体积以及手术规划具有重要的意义.本研究探讨术前肝脏3D可视化评估在中国肝癌分期(CNLC)Ⅱ～Ⅲa期患者外科治疗中的临床价值.方法:回顾性分析2015年—2017年在复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科接受手术治疗的CNLC Ⅱ～Ⅲa期肝细胞癌(HCC)患者的临床资料.根据术前接受的评估方式,将患者分为常规影像学评估组和3D可视化评估组.采用Kaplan-Meier法比较两组患者的术后无复发生存期(RFS)和总生存期(OS),并通过单因素和多因素Cox回归分析确定影响患者预后的相关风险因素.结果:共有110例接受手术治疗的CNLC Ⅱ～Ⅲa期HCC患者被纳入研究,其中常规影像学评估组74例,3D可视化评估组36例.两组患者在性别、年龄、乙肝表面抗原、甲胎蛋白、肝功能Child-Pugh分级、肿瘤直径、肿瘤数量、大血管侵犯情况、CNLC分期、预防性介入治疗和辅助靶向治疗方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).常规影像学评估组和3D可视化评估组的90 d病死率分别为2.8％(1/36)和4.1％(3/74),差异无统计学意义(P＞0.05).Kaplan-Meier生存分析结果显示,3D可视化评估组的OS率和RFS率均明显优于常规影像学评估组(P=0.024;P=0.014).多因素Cox回归分析结果显示,术前3D可视化评估是OS和RFS的独立保护因素(P=0.015;P=0.010).结论:术前3D可视化评估可显著改善中晚期HCC患者手术治疗的预后,在中晚期HCC外科治疗中具有良好的应用价值,值得进一步探索和推广.