目的:探究着丝粒蛋白-A（CENP-A）对卵巢癌（OC）细胞侵袭、迁移的影响，并探讨相关机制。方法:体外培养OC细胞系A2780细胞株，分为NG组（空白对照组）、pcDNA组（阴性转染组，转染pcDNA载体质粒）、pcDNA-CENP-A组（过表达CENP-A组，转染pcDNA-CENP-A载体质粒）、通路抑制剂组（转染pcDNA-CENP-A+PI3K通路抑制剂LY294002）。采用CCK-8法检测细胞增殖情况，划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力；免疫印迹法检测CENP-A蛋白、迁移、侵袭相关蛋白E-钙粘附蛋白（E-cadherin）、N-钙粘附蛋白（N-cadherin）及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核转录因子kappa B（PI3K/AKT/NF-κB）通路相关蛋白表达情况。结果:A2780细胞成功转染。24 h后，随着培养时间延长，与NG组[（0.50±0.07）、（0.72±0.11）、（0.99±0.14）]、pcDNA组[（0.55±0.08）、（0.78±0.12）、（1.02±0.15）]比较，pcDNA-CENP-A组[（0.78±0.12）、（1.03±0.15）、（1.67±0.25）]、通路抑制剂组[（0.63±0.09）、（0.87±0.13）、（1.39±0.20）]A2780细胞存活力显著增加（ P<0.05），与pcDNA-CENP-A组比较，通路抑制剂组A2780细胞存活力显著降低（ P<0.05），呈时间依赖性。与NG组[（15.83±1.46）%、（105.32±15.78）个]、pcDNA组[（16.79±1.46）%、（108.98±16.35）个]比较，pcDNA-CENP-A组、通路抑制剂组A2780细胞迁移率[（37.96±5.80）%、（25.15±2.19）%]、侵袭数[（327.87±49.18）个、206.53±30.97）个]、CENP-A、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB、白细胞介素（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达显著增加或升高（ P<0.05），E-cadherin蛋白表达显著降低（ P<0.05）；与pcDNA-CENP-A组比较，通路抑制剂组A2780细胞迁移率、侵袭数、CENP-A、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达显著减少或或降低（ P<0.05），E-cadherin蛋白表达显著升高（ P<0.05）。 结论:过表达CENP-A表达可促进卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移，可能是通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路实现的。

目的:观察线粒体辅酶Q（MitoQ）在脂多糖（LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞线粒体依赖性凋亡中的保护作用及分子机制。方法:体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞株A549，采用不同浓度LPS处理细胞，构建急性肺损伤（ALI）模型，根据半数抑制浓度（IC 50）得出LPS最佳刺激浓度；采用不同浓度MitoQ对细胞进行预处理，确定MitoQ最佳干预浓度。将细胞分为4组：空白对照组使用正常培养基；LPS组在正常培养基中加入10 mg/L的LPS刺激细胞24 h；MitoQ+LPS组用1 μmol/L的MitoQ预处理细胞60 min，然后用含10 mg/L LPS的培养基处理细胞24 h；MitoQ+磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）选择性抑制剂LY294002+LPS组用1 μmol/L的MitoQ和20 μmol/L的LY294002预处理细胞60 min，然后用含10 mg/L LPS的培养基处理细胞24 h。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用流式细胞仪和原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2及PI3K/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）通路蛋白PI3K的表达和Akt磷酸化水平。 结果:根据抑制率曲线计算得岀LPS对A549细胞的IC 50为11.06 mg/L，故选择10 mg/L作为LPS的刺激浓度。随着MitoQ预处理浓度增加，经10 mg/L的LPS刺激后，细胞活性呈先上升后下降趋势。根据细胞活性曲线计算得岀MitoQ对细胞的最适浓度为1 μmol/L。MitoQ预处理可减弱LPS诱导的线粒体依赖性凋亡，表现为细胞凋亡率较LPS组明显降低〔流式细胞仪：（8.73±0.25）%比（18.10±0.70）%，TUNEL：（12.30±0.82）%比（21.43±0.86）%，均 P<0.05〕，Bax表达显著下降（Bax/β-actin：0.58±0.03比1.06±0.10， P<0.05），Bcl-2表达显著上升（Bcl-2/β-actin：1.03±0.06比0.53±0.07， P<0.05），且PI3K表达及Akt磷酸化水平显著升高〔PI3K蛋白（PI3K/β-actin）：1.20±0.02比0.96±0.04，磷酸化Akt（p-Akt）蛋白（p-Akt/t-Akt）：1.22±0.08比0.92±0.04，均 P<0.05〕。LY294002预处理可抑制MitoQ对细胞的抗凋亡作用，表现为凋亡率较MitoQ+LPS组显著增加〔流式细胞仪：（14.50±0.57）%比（8.73±0.25）%，TUNEL：（16.50±0.53）%比（12.30±0.82）%，均 P<0.05〕，Bax表达显著上升（Bax/β-actin：0.95±0.03比0.58±0.03， P<0.05），Bcl-2显著下降（Bcl-2/β-actin：0.62±0.03比1.03±0.06， P<0.05），同时PI3K表达及Akt磷酸化水平均显著降低〔PI3K蛋白（PI3K/β-actin）：0.90±0.05比1.20±0.02，p-Akt蛋白（p-Akt/t-Akt）：0.89±0.02比1.22±0.08，均 P<0.05〕。 结论:MitoQ可通过激活PI3K/Akt通路改善LPS诱导的A549细胞线粒体依赖性凋亡，为治疗LPS诱导的ALI提供了新的思路。

目的:探讨着丝粒蛋白K（CENPK）在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达与上皮间质转化（EMT）的关系及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测2015年1月至2018年12月山东第一医科大学附属滨州市人民医院69例TNBC患者肿瘤组织和相应癌旁组织中CENPK及EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin、N-cadherin）的表达，分析CENPK表达与患者临床病理特征及EMT相关蛋白表达的相关性。结果:CENPK在TNBC及癌旁组织中的阳性表达率分别为72.46%（50/69）、14.49%（10/69），差异有统计学意义（ χ2=47.18， P<0.001）。CENPK在TNBC中的表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移均相关（均 P<0.05）。CENPK在TNBC中的表达与E-cadherin表达呈负相关（ r=-0.447， P<0.01），与Vimentin、N-cadherin表达均呈正相关（ r值分别为0.503、0.415，均 P<0.01）。CENPK高表达组中位总生存时间为24个月（95% CI 10~39个月），低表达组为42个月（95% CI 19~50个月），两组总生存差异有统计学意义（ χ2=7.36， P=0.016）。 结论:CENPK可能通过EMT参与TNBC的发生、发展，且CENPK表达可能与患者预后有关。

目的:分析染色体结构维持蛋白4( SMC4)基因在脑胶质瘤中的表达情况及其临床意义。 方法:(1)下载中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库中749例胶质瘤组织的 SMC4 mRNA表达数据及其患者的临床资料。采用单因素和多因素Cox回归分析明确胶质瘤患者预后不良的独立影响因素。绘制并比较 SMC4 mRNA高表达组、 SMC4 mRNA低表达组患者的生存曲线。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析 SMC4 mRNA对患者1、3、5年生存率的预测效能。(2)使用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)评价癌症基因组图谱(TCGA)数据库中胶质瘤组织的 SMC4 mRNA表达水平与其患者总生存率的关系。通过人类蛋白质图谱(HPA)在线数据库测定高级别胶质瘤(胶质母细胞瘤)、低级别胶质瘤中SMC4蛋白的表达。(3)基因组富集分析比较 SMC4 mRNA高表达组、 SMC4 mRNA低表达组胶质瘤间基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路的差异。采用基因共表达分析与 SMC4 mRNA存在相关关系的基因。 结果:(1)多因素Cox回归分析显示 SMC4 mRNA( HR=1.314， 95%CI：1.209~1.428， P=0.000)、原发-复发-继发(PRS)类型、WHO分级、年龄、化疗、异柠檬酸脱氢酶( IDH)突变和染色体1p/19q缺失是胶质瘤患者预后不良的独立影响因素。生存分析显示 SMC4 mRNA低表达组患者的总生存率高于 SMC4 mRNA高表达组，差异有统计学意义( P<0.05)。ROC曲线分析显示， SMC4 mRNA预测患者1年、3年和5年生存率的曲线下面积(AUC)分别为0.712、0.784、0.791。(2)低级别、高级别胶质瘤中 SMC4 mRNA表达水平均高于正常对照脑组织，差异均有统计学意义( P<0.05)。低级别胶质瘤中 SMC4 mRNA低表达组患者的总生存率高于 SMC4 mRNA高表达组，差异有统计学意义( P<0.05)。高级别胶质瘤中 SMC4 mRNA低表达组与 SMC4 mRNA高表达组患者的总生存率差异无统计学意义( P>0.05)。低级别胶质瘤组织中SMC4蛋白表达显著低于高级别胶质瘤。(3)基因组富集分析显示 SMC4 mRNA高表达组胶质瘤中富集的GO是凝聚核染色体、驱动蛋白复合体、减数分裂细胞周期、减数分裂细胞周期过程；富集的KEGG通路包括细胞周期、DNA复制、错配修复、P53信号通路、胰腺癌等相关通路。基因共表达分析显示与SMC4 mRNA表达呈正相关关系的前5个基因为苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(WEE1)、着丝粒蛋白L(CENPL)、驱动蛋白超家族23(KIF23)、Shugoshin样蛋白2(SGOL2)，与 SMC4 mRNA表达呈负相关关系的前5个基因为F框/WD40域蛋白4(FBXW4)、副肿瘤样抗原-L2(PNMAL2)、成熟酶蛋白K(MATK)、PASL10A、长链编码基因CTD-2210P24.4。 结论:SMC4 mRNA表达水平较高的胶质瘤患者预后较差， SMC4 mRNA为高危因素，可作为胶质瘤患者的独立预后指标，其生物学功能与胶质瘤的DNA复制相关。

目的 探讨着丝粒蛋白K(CENPK)、干扰素诱导核蛋白16(IFI16)表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系.方法 选取行同步放化疗的106例中晚期宫颈癌患者宫颈癌组织,以同期40例因子宫脱垂或子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织为对照.免疫组织化学检测组织中CENPK、IFI16蛋白表达.比较不同临床病理特征中晚期宫颈癌患者CENPK、IFI16蛋白表达差异.Kaplan-Meier方法分析CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌预后的关系.Cox回归分析影响中晚期宫颈癌患者预后的影响因素.结果 宫颈癌组织中CENPK、IFI16蛋白阳性表达率分别为70.75%(75/106)、67.92%(72/106),高于正常宫颈组织的10.00%(4/40)、15.00%(6/40),差异有统计学意义(P均<0.05).不同肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移中晚期宫颈癌患者癌组织中CENPK、IFI16表达比较差异有统计学意义(P均<0.05).CENPK阳性者5年累积生存率低于CENPK阴性者(P<0.05),IFI16阳性者5年累积生存率亦低于CENPK阴性者(P<0.05).FIGO分期Ⅲ～Ⅳ、淋巴结转移、CENPK阳性表达、IFI16阳性表达是影响中晚期宫颈癌患者预后的独立因素(P均<0.05).结论 中晚期宫颈癌组织中CENPK、IFI16表达升高,二者表达与肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移有关,是影响患者不良预后的独立因素.

目的:研究对比脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)对放射后成纤维细胞(Fibroblasts,Fb)修复的影响机制.方法:使用剂量为8 Gy的X线放射源,对大鼠的成纤维细胞进行单次X线照射,建立ADSCs与放射后成纤维细胞的共培养模型.分别设置单纯放射后成纤维细胞为Fb2组,ADSCs与放射后成纤维细胞共培养为Fb3组,VEGF+放射后成纤维细胞为VEGF组,GM-CSF+放射后成纤维细胞为GM-CSF组.通过VEGF、GM-CSF、ADSCs分别干预放射损伤的成纤维细胞,观察细胞凋亡、增殖、细胞周期及Western-Blot检测信号通路激活情况验证结果.结果:VEGF、GM-CSF、ADSCs分别作用于放射损伤的成纤维细胞,可以促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,加快细胞周期由G2/M向G1/S进展,与照射组相比差异有统计学意义(P＜0.05),其程度强弱依次为ADSCs、GM-CSF、VEGF.VEGF组和GM-CSF组p-Akt蛋白和p-Erk蛋白表达较照射组上调,差异有显著统计学意义(P＜0.01);相同浓度ADSCs、GM-CSF和VEGF促进p-Akt蛋白和p-Erk蛋白表达,作用程度强弱依次为ADSCs、GM-CSF、VEGF,差异有显著统计学意义(P＜0.01).磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K-Akt)通路和丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)通路可能发挥着重要作用,比如在VEGF和GM-CSF作用于ADSCs治疗放射损伤后成纤维细胞过程中.ADSCs修复放射损伤后成纤维细胞的效果明显好于VEGF和GM-CSF单独修复放射损伤后成纤维细胞,表明可能还有其他的潜在作用因子.结论:ADSCs、VEGF和GM-CSF干预的放射损伤后成纤维细胞主要通过增强细胞增殖、抑制细胞凋亡及加快细胞周期由G2/M向G1/S发展.

目的 近年来,随着蛋白质相互作用网络与分子对接技术等方法论的不断创新,为探索慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的发生发展机制及中药治疗CML的内在机制提供了新的研究思路.本研究在CML蛋白质相互作用网络构建与分子对接技术指导,并进行体外实验验证,探讨大黄干预CML的内在分子生物学机制.方法 使用人类孟德尔遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)筛选CML相关基因,导入Cyto-scape 3.2.1实现蛋白质相互作用网络的可视化,插件CentiScaPe 2.1实现网络拓扑分析.大黄活性小分子物质从第三方数据库获取,Chemoffice 8.0与SYBYL 8.1对其再构建、结构优化,得到大黄小分子配体结构库,再通过Surflex-Dock模块与受体靶点进行分子对接,打分后得到关键靶标丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen activated protein kinase 3,MAPK3).随后针对其进行实验验证,通过四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测对照组(无药血清)与实验组(1.2、6、12 g/kg的大黄含药血清)在24、48、72、96 h对K562细胞的增殖抑制率,蛋白质印迹法检测MAPK3蛋白的表达情况.结果 构建了由705个节点(蛋白质)和2058条边(相互作用)组成的蛋白质相互作用网络,分析得出关键靶标MAPK3.MTT法结果表明大黄能显著抑制K562细胞的增殖,且抑制率与动物给药剂量(所获含药血清)高低与作用时间成正相关.各实验组48、72、96 h抑制作用优于24 h,P<0.05;各实验组与对照组比较,差异均有统计学意义,P<0.05.蛋白质印迹法结果显示,大黄能显著降低MAPK3蛋白的表达.结论 CML是一个受多基因、多功能蛋白调控的复杂疾病,MAPK3很可能是CML的关键节点,而大黄可通过降低MAPK3蛋白的表达干预K562细胞增殖.

目的 观察着丝粒蛋白F(CENPF)mRNA在肺腺癌细胞系中的表达变化,分析CENPF mRNA在肺腺癌组织中的表达变化并探讨其相关调控信号通路.方法 ①采用实时定量PCR法检测肺正常上皮细胞系BEAS-2B、肺腺癌细胞系(A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975)CENPF mRNA.②采用癌症基因组图谱(TCGA)的肺腺癌数据集分析CENPF mRNA表达与肺腺癌临床病理参数、预后的关系,Cox回归模型分析肺腺癌患者预后的影响因素.③采用基因集富集分析(GSEA)法分析受CENPF调控的肺腺癌相关信号通路.结果 ①A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975、BEAS-2B细胞CENPF mRNA相对表达量分别为4.333±0.271、3.193±0.188、2.770±0.091、5.491±0.249、1.006±0.071,A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975细胞CENPF mRNA相对表达量均高于BEAS-2B(P均<0.05).②肺腺癌、癌旁正常组织CENPF mRNA的相对表达量分别为9.632±0.059、6.472±0.093,二者比较,P<0.001.CENPF mRNA表达与肺腺癌患者的性别、年龄、T分期、N分期及TNM分期相关(P均<0.05).生存分析结果显示,与CENPF mRNA低表达患者比较,CENPF mRNA高表达的肺腺癌患者的预后差(P=0.001).CENPF mRNA表达、临床TNM分期(HR分别为1.667,1.414;P均<0.01)是影响肺腺癌患者预后的因素.③与CENPF mRNA高表达有关的肺腺癌调控信号通路有G2M检查点(P<0.001,FDR<0.001)、有丝分裂纺锤体(P<0.001,FDR<0.001)、E2F靶基因(P<0.001,FDR<0.001)、MYC靶基因(P<0.001,FDR=0.001)、mTOR信号通路(P=0.002,FDR=0.005)、精子形成(P=0.002,FDR=0.009)、未折叠蛋白反应(P=0.002,FDR=0.020)及PI3K/Akt/mTOR信号通路(P=0.015,FDR=0.117)等.结论 肺腺癌组织及细胞系中存在CENPF高表达,CEN-PF高表达与肺腺癌患者的恶性病理特征及不良预后密切相关.CENPF mRNA高表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素.CENPF可能通过调节G2 M检查点、有丝分裂纺锤体、E2F靶基因、MYC靶基因、mTOR信号通路、精子形成、未折叠蛋白反应及PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺腺癌的发生、发展中起重要作用.

目的 观察着丝粒蛋白K(CENPK)小干扰RNA(si-CENPK)转染对人肺癌细胞系A549增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外传代培养A549细胞及正常人支气管上皮细胞系HBE,采用q-RTPCR法检测CENPK mRNA.取生长状态良好的A549细胞,随机分为3组,实验组转染si-CENPK,阴性对照组转染si-Negative Control,空白对照组不做转染;转染48 h后,收集三组细胞,采用q-RTPCR法检测细胞CENPK mRNA,CCK-8法检测转染后24、48、72、96 h OD值,细胞划痕实验检测转染后48 h细胞间距离,Transwell侵袭实验检测转染后48 h穿膜细胞数.结果 A549细胞、HBE细胞中CENPK mRNA相对表达量分别为2.710±0.153、1.000,两者比较,P均<0.05.si-CENPK实验组、si-NC阴性对照组、空白对照组CENPK mRNA相对表达量分别为0.28±0.06、1.12±0.10、1.000,si-CENPK实验组与其他两组比较,P<0.05.si-CENPK实验组培养24、48、72、96 h OD值分别为0.317±0.003、0.512±0.030、0.711±0.052、1.012±0.090,si-NC阴性对照组分别为0.324±0.004、0.602±0.022、0.920±0.043、1.370±0.103,空白对照组分别为0.322±0.005、0.610±0.040、0.918±0.054、1.320±0.110,si-CENPK实验组与其余两组比较,P均<0.05.si-CENPK实验组、si-NC阴性对照组、空白对照组转染48 h细胞间距离分别为(0.70±0.02)、(0.34±0.03)、(0.37±0.06)cm,si-CENPK实验组、si-NC阴性对照组比较,P<0.05.si-CENPK实验组、si-NC阴性对照组、空白对照组转染48 h穿膜细胞数分别为(89±10)、(163±12)、(168±11)个,si-CENPK实验组与其他两组比较,P均<0.05.结论 si-CENPK转染能够抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力.

本文综述了引起硬皮病的各种可能内、外因素。前者有副蛋白沉积、糖尿病等,后者包括接触硅、氯化乙烯及某些药物(争光霉素、青霉胺、镇痛新及维生素K)。描述了乳房整形后出现的硬皮病、色氨酸诱发的嗜酸性肌痛综合征、中毒性油综合征及螺旋体感染与硬皮病之间的关系。认为血清特异性抗体-Scl-70及抗着丝粒抗体检查是诊断或识别各型不典型硬皮病的重要方法。