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一个Ⅱ型糖尿病合并恶性肿瘤发生家系的基因变异分析
编辑人员丨1天前
目的:对一个Ⅱ型糖尿病(T2DM)合并恶性肿瘤复杂家系进行基因变异分析,筛选其候选致病/易感基因。方法:用全外显子组测序(WES)技术对T2DM合并恶性肿瘤复杂家系的11名成员进行DNA测序,用生物信息学方法筛选候选致病/易感突变,并用Sanger测序对候选突变进行验证。结果:该家系共21人,其中11人诊断为T2DM,7人诊断为乳腺癌、胃癌、胰腺癌或脑瘤。对11名家系成员(7人诊断为T2DM,两人诊断为乳腺癌)进行了WES测序分析,筛选出6个候选糖尿病相关突变,其中功能丢失型(TOF)突变1个为瞬时受体电位阳离子M亚家族成员1(TRPM1) c.G4240T p.E1414X;非LOF突变5个,涉及腺苷酸激酶7(AK7)、CROCC、溶质载体家族15成员1(SLC15A1)、丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)、Teashirt锌指同源异型盒2(TSHZ2)基因。同时还筛选得到4个肿瘤相关遗传位点(rs3184504、rs1053338、rs11894115和rs11552449)。结论:TRPM1 c.G4240T变异可能是导致该家系糖尿病合并肿瘤发生的关键候选变异;而rs3184504、rs1053338、rs11894115和rs11552449遗传位点可能为该家系乳腺癌易感性位点。
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编辑人员丨1天前
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miR-21在脓毒症大鼠肺损伤中的作用:与TRPM2表达的关系
编辑人员丨1天前
目的:评价miR-21在脓毒症大鼠肺损伤中的作用及其与瞬时受体电位M2(TRPM2)表达的关系。方法:清洁级健康Wistar大鼠48只,雌雄各半,体重250~300 g,采用随机数字表法分为4组( n=12):假手术组(SH组)、脓毒症组(S组)、miR-21抑制剂组(MI组)和miR-21抑制剂+TRPM2阻断剂Gd3 +组(MIG组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备大鼠脓毒症模型。于CLP前12 h,MI组和MIG组分别尾静脉注射miR-21抑制剂和miR-21抑制剂+TRPM2阻断剂组Gd3 +。于CLP后24 h时取颈动脉血样,行血气分析,记录PaO 2,计算氧合指数;随后处死大鼠取肺组织,光镜下行肺损伤评分,确定湿重/干重(W/D)比值,采用qRT-PCR法检测miR-21和TRPM2的mRNA表达,分光光度计比色法检测MDA和SOD水平,ELISA法检测血清IL-6、IL-8和TNF-α的浓度。 结果:与SH组比较,其余3组氧合指数和肺组织SOD活性降低,肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量、血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高,S组肺组织miR-21 mRNA表达上调,TRPM2 mRNA表达下调( P<0.05);与S组比较,MI组氧合指数、肺组织SOD活性和血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高,肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量降低,MI组和MIG组肺组织miR-21 mRNA表达下调,TRPM2 mRNA表达上调( P<0.05);与MI组比较,MIG组氧合指数和肺组织SOD活性降低,肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量和血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高,肺组织TRPM2 mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:miR-21表达上调,TRPM2表达下调参与了脓毒症大鼠肺损伤的过程。
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编辑人员丨1天前
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TRPM8对间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征小鼠疼痛症状及神经元增殖的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)对间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)小鼠疼痛症状及神经元增殖的影响。方法:将雌性野生型C57BL/6小鼠(8~10周龄)按随机数字表法分为对照组、IC/BPS模型组和IC/BPS模型+薄荷醇组(各6只);TRPM8基因敲除小鼠随机分为TRPM8基因敲除组和TRPM8基因敲除模型组(各6只)。IC/BPS模型组、IC/BPS模型+薄荷醇组和TRPM8基因敲除模型组小鼠皮下注射尿路斑块蛋白65-84氨基酸残基(UPK3A65-84)多肽;IC/BPS模型+薄荷醇组继续注射薄荷醇。建模成功后,通过机械敏感性评估各组疼痛阈值的差异;膀胱壁注射细胞膜红色荧光探针(Dil),10 d后采集背根神经节(DRG)组织,利用Western蛋白印迹法和实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测各组TRPM8和生长相关蛋白43(GAP43)的蛋白质和mRNA含量的差异;免疫荧光技术检测DRG组织中TRPM8表达与GAP43或Dil的分布情况。分析TRPM8与IC/BPS小鼠疼痛症状的关系及在神经元增殖中的作用。结果:模型均构建成功。与对照组相比,IC/BPS模型组和IC/BPS模型+薄荷醇组小鼠的疼痛阈值均降低[分别为(8.50±1.22)、(5.50±1.05)比(11.67±2.16),均 P<0.001]。与对照组相比,IC/BPS模型组和IC/BPS模型+薄荷醇组TRPM8的表达量均升高,而在TRPM8基因敲除组小鼠中TRPM8未表达[分别为(3.16±0.05)、(6.46±0.21)、0比(1.00±0.06),均 P<0.001]。各组小鼠TRPM8蛋白表达量与mRNA表达趋势相同( P<0.001)。与对照组相比,IC/BPS模型组和IC/BPS模型+薄荷醇组DRG中GAP43 mRNA的表达增加,而TRPM8基因敲除模型组的表达下降(均 P<0.001)。GAP43蛋白表达与mRNA表达趋势相同( P<0.001)。免疫荧光结果显示,与对照组相比,IC/BPS模型组和IC/BPS模型+薄荷醇组DRG中GAP43阳性神经元的数量增加,TRPM8基因敲除组下降(均 P<0.001)。与对照组相比,IC/BPS组和IC/BPS模型+薄荷醇组DRG Dil阳性感觉神经元数量增加,而TRPM8基因敲除组下降(均 P<0.001)。 结论:TRPM8可加剧IC/BPS小鼠的疼痛症状,其机制可能与诱导DRG水平的感觉神经增殖有关。
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编辑人员丨1天前
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原发性低镁血症伴继发性低钙血症的临诊应对
编辑人员丨1天前
原发性低镁血症伴继发性低钙血症(HSH)是甲状旁腺功能减退的罕见病因之一。现报道近期本科诊治的1例原发性HSH患者,并在此基础上探讨该病的诊治策略。患者为26岁男性,以反复四肢麻木、抽搐为主要表现,生化检测提示存在低镁血症、低钙血症、低钾血症及甲状旁腺功能减退,后经基因检测证实存在瞬时受体电位阳离子通道-M亚家族-成员6(TRPM6)基因突变。经规律口服补镁治疗后,患者症状明显缓解。随访患者症状无再发,血电解质正常。原发性HSH多呈常染色体隐性遗传,因TRPM6基因突变导致肠道及肾脏的镁吸收障碍,进而引起系列临床表现,经补镁治疗通常可明显缓解相关症状。
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编辑人员丨1天前
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下调TRPM2表达抑制NLRP3炎症小体激活减轻氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞损伤
编辑人员丨1天前
目的:探讨下调瞬时受体电位通道M2(TRPM2)表达对氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞损伤的影响。方法:将TRPM2小干扰RNA(siRNA-TRPM2)及其阴性对照(siRNA-NC)转染至体外培养的人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)中,并用氯胺酮处理,记为si-TRPM2+氯胺酮组(si-TRPM2+Ketamine组)和si-NC+氯胺酮组(si-NC+Ketamine组),另设氯胺酮组和对照组。采用qRT-PCR法检测SV-HUC-1细胞中的TRPM2表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞中的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等炎症因子水平,Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,氯胺酮组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著降低(均 P<0.05),TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著升高(均 P<0.05);si-NC+Ketamine组的上述指标与氯胺酮组比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05);与si-NC+Ketamine组比较,si-TRPM2+Ketamine组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著升高(均 P<0.05),TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著降低(均 P<0.05)。 结论:下调TRPM2表达可抑制氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激,进而减轻膀胱上皮细胞损伤,其可能是通过抑制NLRP3炎症小体激活发挥作用。
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编辑人员丨1天前
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MicroRNA-26a-5p通过抑制TRPC6表达减轻糖尿病肾脏病足细胞损伤
编辑人员丨1天前
目的:探讨microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:(1)体内实验:4周龄db/db小鼠按数字表法被分为db/db组、db/db+agomir-NC组、db/db+miR-26a-5p agomir组,每组10只,设同周龄db/m小鼠10只作为正常对照组。饲养至10周龄时观察各组小鼠肾组织病理改变,检测肾脏肥大指数(kidney weight/body weight,KW/BW)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)和尿白蛋白肌酐比(urinary albumin to creatinine ratio,ACR)等指标;采用荧光原位杂交法观察miR-26a-5p的定位,实时荧光定量PCR法测定肾组织miR-26a-5p水平,免疫组化及Western印迹法测定瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel-6,TRPC6)和Nephrin表达。(2)体外实验:小鼠足细胞(MPC5)被分为正常糖组、高渗组、高糖组、高糖+miR-26a-5p mimic组和高糖+mimic-NC组共5组,测定各组足细胞miR-26a-5p及TRPC6和Nephrin蛋白的表达水平,通过荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p和TRPC6 mRNA的靶向结合关系。结果:(1)体内实验:与db/m小鼠相比,db/db小鼠肾组织光镜下见肾小球体积增大,电镜下见基底膜增厚,足突融合率增加,ACR、FBG和血脂升高(均 P<0.01),miR-26a-5p及Nephrin表达减少(均 P<0.05),而TRPC6表达增多( P<0.05);与db/db+agomir-NC组相比,db/db+miR-26a-5p agomir组小鼠肾脏病理改变减轻,肾组织TRPC6表达和ACR降低(均 P<0.05),Nephrin表达增多( P<0.05)。(2)体外实验:与正常糖组比较,高糖组足细胞miR-26a-5p表达减少( P<0.01),Nephrin表达减少而TRPC6表达增多(均 P<0.05);与高糖+mimic-NC组比较,高糖+miR-26a-5p mimic组足细胞TRPC6表达减少( P<0.05),Nephrin表达增加( P<0.05);荧光素酶实验提示miR-26a-5p靶向调节TRPC6表达。 结论:DKD足细胞中miR-26a-5p表达减少,miR-26a-5p可以通过抑制TRPC6表达减轻DKD足细胞损伤。
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编辑人员丨1天前
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原发性低镁血症继发低钙血症的 TRPM6基因复合杂合突变1例
编辑人员丨1天前
回顾性分析浙江大学医学院附属儿童医院收治的1例原发性低镁血症继发低钙血症患儿的临床资料及随访资料。患儿为8月龄男童,临床表现为婴儿期出现的惊厥、生长发育迟缓、精神发育迟滞。通过补镁等对症治疗后患儿临床症状缓解。最终通过亚全外显子测序,检测到患儿 TRPM6基因的复合杂合突变,分别为c.5386A>T(p.K1796X)和c.453_454del(p.M151fs)。提示基因检测是确诊该病的金标准,本研究发现 TRPM6基因的2种新的突变。
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编辑人员丨1天前
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TRPM2-CnA-Drp1通路在丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤中的作用
编辑人员丨1天前
目的:评价瞬时受体电位M2(TRPM2)-钙调磷酸酶A(CnA)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)通路在丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤中的作用。方法:SPF级雄性C57BL6小鼠24只,8周龄,体重20~23 g,采用随机数字表法分为4组( n=6):假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组)和TRPM2激动剂腺苷二磷酸核糖(ADPR)+丙泊酚组(AP组)。采用夹闭肝左、中叶门静脉和肝动脉60 min恢复灌注的方法制备肝缺血再灌注损伤模型。P组于造模前1 h时腹腔注射生理盐水0.2 ml,造模前30 min时腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg;AP组于造模前1 h时腹腔注射ADPR 10 mg/kg(溶于0.2 ml生理盐水中),造模前30 min腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg;S组和IR组分别于造模前1 h和30 min时腹腔注射等体积生理盐水。于再灌注6 h时摘眼球采血检测血清BUN、Cr、ALT和AST水平,然后处死小鼠取肾组织,透射电镜下观察线粒体超微结构,并计算线粒体长径,采用Western blot法检测TRPM2、CnA、磷酸化Drp1(p-Drp1) Ser637和cleaved caspase-3的表达。 结果:与S组比较,IR组、P组和AP组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调,p-Drp1 Ser637表达下调,线粒体长径缩短( P<0.05);与IR组比较,P组血清BUN和Cr浓度降低,肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达下调,p-Drp1 Ser637表达上调,线粒体长径延长( P<0.05),线粒体损伤减轻,血清ALT和AST浓度差异无统计学意义,AP组血清BUN和Cr浓度差异无统计学意义( P>0.05);与P组比较,AP组血清BUN和Cr浓度升高,肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调,p-Drp1 Ser637表达下调,线粒体长径缩短( P<0.05),线粒体损伤加重。 结论:丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤的机制与其抑制肾组织TRPM2的表达,降低胞内CnA的水平,抑制Drp1 Ser637去磷酸化有关。
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编辑人员丨1天前
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星形胶质细胞源性外泌体miR-193b-3p靶向TRPM2改善脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/再氧合损伤的机制研究
编辑人员丨1天前
目的:通过构建体外氧糖剥夺/再氧合(OGD/R)模型,探讨脑缺血再灌注过程中星形胶质细胞(AS)源性外泌体对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:(1)通过双荧光素酶报告基因检测确定miR-193b-3p对抑制瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)的调控作用。采用miR-193b-3p模拟物/阴性序列转染bEnd.3细胞后进行OGD/R造模(分别为OGD/R+miR-193b-3p模拟物组及OGD/R+miR-193b-3p阴性序列组),通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-193b-3p表达、Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。(2)从C57BL/6乳鼠大脑皮层提取AS并鉴定。通过CCK-8法确定AS造模时间并通过超高速离心法提取AS培养基中的外泌体,采用电镜、粒径和标志蛋白进行鉴定,采用RT-qPCR法检测AS及其外泌体中miR-193b-3p含量。随后采用miR-193b-3p抑制序列转染AS后提取低表达miR-193b-3p的外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组);采用miR-193b-3p阴性序列转染AS后提取外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组);正常外泌体与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育为OGD/R+AS外泌体组。通过RT-qPCR法检测各组细胞miR-193b-3p表达,通过Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果:(1)双荧光素酶报告基因检测显示miR-193b-3p可结合 TRPM2 mRNA,且转染miR-193b-3p模拟物后TRPM2蛋白表达明显减少,与OGD/R组比较差异有统计学意义( P<0.05)。与OGD/R组相比,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达明显升高,差异有统计学意义( P<0.05)。提示miR-193b-3p可改善OGD/R过程中由TRPM2介导的bEnd.3细胞凋亡和紧密连接减少。流式细胞术进一步验证了上述结论,表现为与OGD/R组(21.34%)比较,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞凋亡率(13.93%)明显下降,差异有统计学意义( P<0.05)。(2)研究中提取的外泌体呈脂质双层杯状、粒径主要在126.5 nm左右,外泌体标志蛋白Cal为阴性、CD81和SG101为阳性,提示外泌体提取成功。造模后,AS及其外泌体中miR-193b-3p含量均降低,与Control组比较差异均有统计学意义( P<0.05)。进一步研究发现,与OGD/R组比较,OGD/R+AS外泌体组及OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组中miR-193b-3p表达明显升高,TRPM2、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达明显降低,ZO-1、Claudin-5和Bcl-2表达明显升高,差异有统计学意义( P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞上述蛋白表达无明显改变,组间差异无统计学意义( P>0.05)。流式细胞术凋亡检测结果与之一致,表现为与OGD/R组(18.22%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞组细胞凋亡率(14.09%、13.79%)明显降低,差异有统计均意义( P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞凋亡率(18.41%)无明显改变,差异无统计学意义( P>0.05)。细胞划痕实验显示,与OGD/R组(13.55%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞迁移能力(43.01%、40.59%)明显增强,差异均有统计学意义( P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞迁移能力无明显改变(16.26%),差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:AS源性外泌体可通过miR-193b-3p远距离抑制脑微血管内皮细胞上的TRPM2蛋白表达,改善OGD/R造成的脑微血管内皮细胞损伤,进而改善OGD/R损伤。
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编辑人员丨1天前
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TRPM2离子通道在颞叶癫痫相关神经炎症中的作用研究
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨小胶质细胞及星形胶质细胞中的瞬时受体电位M2 型(TRPM2)离子通道在颞叶癫痫(TLE)相关神经炎症中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和癫痫组,癫痫组采用氯化锂-毛果芸香碱(匹罗卡品)制作癫痫模型,对照组给予等剂量的生理盐水代替,根据造模后观察的时间将TLE大鼠随机分为 7 个亚组(n = 5):急性期(3 h组、6 h组、1 d组、2 d组)、潜伏期(14 d组)、慢性期(30 d组、90 d组).检测TRPM2 在不同亚组TLE大鼠海马中的表达及TRPM2 在大鼠海马中的细胞定位情况.采用过氧化氢(H2O2)诱导小胶质细胞BV2 及星形胶质细胞C8 细胞系,检测细胞释放IL-1β、IL-6 和TNF-α的水平,检测H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)、糖原合成酶激酶 3β(GSK-3β)、磷酸化核因子κB p65 蛋白(p-NF-κB p65)的表达变化,同时检测H2O2 诱导BV2 细胞中钙调神经磷酸酶(CaN)的活性变化.结果 急性期TLE大鼠海马中的TRPM2 表达升高(P<0.05).H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2 的表达升高、炎症因子释放增加(P均<0.05),H2O2 可促进BV2 细胞中PARP-1、p-NF-κB p65 的表达并提高CaN、GSK-3β的活性(P均<0.05).结论 氧化应激可促进小胶质细胞及星形胶质细胞TRPM2 及促炎细胞因子的表达,癫痫反复发作引起的氧化应激可能在小胶质细胞中通过TRPM2/CaN/p-NF-κB p65 通路介导TLE相关神经炎症的发生.
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编辑人员丨2024/4/27
