目的:评价miR-21在脓毒症大鼠肺损伤中的作用及其与瞬时受体电位M2(TRPM2)表达的关系。方法:清洁级健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，体重250～300 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(SH组)、脓毒症组(S组)、miR-21抑制剂组(MI组)和miR-21抑制剂＋TRPM2阻断剂Gd3 ＋组(MIG组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备大鼠脓毒症模型。于CLP前12 h，MI组和MIG组分别尾静脉注射miR-21抑制剂和miR-21抑制剂＋TRPM2阻断剂组Gd3 ＋。于CLP后24 h时取颈动脉血样，行血气分析，记录PaO 2，计算氧合指数；随后处死大鼠取肺组织，光镜下行肺损伤评分，确定湿重/干重(W/D)比值，采用qRT-PCR法检测miR-21和TRPM2的mRNA表达，分光光度计比色法检测MDA和SOD水平，ELISA法检测血清IL-6、IL-8和TNF-α的浓度。 结果:与SH组比较，其余3组氧合指数和肺组织SOD活性降低，肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量、血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高，S组肺组织miR-21 mRNA表达上调，TRPM2 mRNA表达下调( P<0.05)；与S组比较，MI组氧合指数、肺组织SOD活性和血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高，肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量降低，MI组和MIG组肺组织miR-21 mRNA表达下调，TRPM2 mRNA表达上调( P<0.05)；与MI组比较，MIG组氧合指数和肺组织SOD活性降低，肺组织W/D比值、肺损伤评分、MDA含量和血清IL-6、IL-8和TNF-α浓度升高，肺组织TRPM2 mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:miR-21表达上调，TRPM2表达下调参与了脓毒症大鼠肺损伤的过程。

目的:探讨下调瞬时受体电位通道M2(TRPM2)表达对氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞损伤的影响。方法:将TRPM2小干扰RNA(siRNA-TRPM2)及其阴性对照(siRNA-NC)转染至体外培养的人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)中，并用氯胺酮处理，记为si-TRPM2+氯胺酮组(si-TRPM2+Ketamine组)和si-NC+氯胺酮组(si-NC+Ketamine组)，另设氯胺酮组和对照组。采用qRT-PCR法检测SV-HUC-1细胞中的TRPM2表达，CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，ELISA法检测细胞中的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等炎症因子水平，Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较，氯胺酮组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著降低(均 P<0.05)，TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著升高(均 P<0.05)；si-NC+Ketamine组的上述指标与氯胺酮组比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)；与si-NC+Ketamine组比较，si-TRPM2+Ketamine组的SV-HUC-1细胞增殖活性、SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达均显著升高(均 P<0.05)，TRPM2的mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、MDA含量和细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达均显著降低(均 P<0.05)。 结论:下调TRPM2表达可抑制氯胺酮诱导的膀胱上皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激，进而减轻膀胱上皮细胞损伤，其可能是通过抑制NLRP3炎症小体激活发挥作用。

目的:探讨microRNA-26a-5p（miR-26a-5p）对糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease，DKD）足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:（1）体内实验：4周龄db/db小鼠按数字表法被分为db/db组、db/db+agomir-NC组、db/db+miR-26a-5p agomir组，每组10只，设同周龄db/m小鼠10只作为正常对照组。饲养至10周龄时观察各组小鼠肾组织病理改变，检测肾脏肥大指数（kidney weight/body weight，KW/BW）、空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）和尿白蛋白肌酐比（urinary albumin to creatinine ratio，ACR）等指标；采用荧光原位杂交法观察miR-26a-5p的定位，实时荧光定量PCR法测定肾组织miR-26a-5p水平，免疫组化及Western印迹法测定瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transient receptor potential cation channel-6，TRPC6）和Nephrin表达。（2）体外实验：小鼠足细胞（MPC5）被分为正常糖组、高渗组、高糖组、高糖+miR-26a-5p mimic组和高糖+mimic-NC组共5组，测定各组足细胞miR-26a-5p及TRPC6和Nephrin蛋白的表达水平，通过荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p和TRPC6 mRNA的靶向结合关系。结果:（1）体内实验：与db/m小鼠相比，db/db小鼠肾组织光镜下见肾小球体积增大，电镜下见基底膜增厚，足突融合率增加，ACR、FBG和血脂升高（均 P<0.01），miR-26a-5p及Nephrin表达减少（均 P<0.05），而TRPC6表达增多（ P<0.05）；与db/db+agomir-NC组相比，db/db+miR-26a-5p agomir组小鼠肾脏病理改变减轻，肾组织TRPC6表达和ACR降低（均 P<0.05），Nephrin表达增多（ P<0.05）。（2）体外实验：与正常糖组比较，高糖组足细胞miR-26a-5p表达减少（ P<0.01），Nephrin表达减少而TRPC6表达增多（均 P<0.05）；与高糖+mimic-NC组比较，高糖+miR-26a-5p mimic组足细胞TRPC6表达减少（ P<0.05），Nephrin表达增加（ P<0.05）；荧光素酶实验提示miR-26a-5p靶向调节TRPC6表达。 结论:DKD足细胞中miR-26a-5p表达减少，miR-26a-5p可以通过抑制TRPC6表达减轻DKD足细胞损伤。

目的:评价瞬时受体电位M2(TRPM2)在七氟烷麻醉致老龄大鼠海马神经元程序性坏死中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠60只，22月龄，体质量550~600 g，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(M组)和七氟烷麻醉+TRPM2抑制剂组(M+A组)。M组和M+A组吸入2%七氟烷5 h。于吸入七氟烷前1 h时，M+A组腹腔注射TRPM2抑制剂邻氨基苯甲酸(ACA)20 mg/kg，C组和M组腹腔注射等量DMSO。于吸入七氟烷后1 d时行Morris水迷宫实验，记录逃避潜伏期、穿越原平台位置次数和原平台所在象限停留时间；采用Western blot法检测海马组织TRPM2和程序性坏死相关蛋白：混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、磷酸化MLKL(p-MLKL)、磷酸化RIPK1(p-RIPK1)表达；采用流式细胞术检测海马神经元胞浆Ca 2+浓度和程序性坏死率。 结果:与C组比较，M组和M+A组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，原平台所在象限停留时间缩短，海马组织TRPM2、MLKL、RIPK1、p-MLKL和p-RIPK1表达上调，海马神经元胞浆Ca 2+浓度和程序性坏死率升高( P<0.05)；与M组比较，M+A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，原平台所在象限停留时间延长，海马组织TRPM2、MLKL、RIPK1、p-MLKL和p-RIPK1表达下调，海马神经元胞浆Ca 2+浓度和程序性坏死率降低( P<0.05)。 结论:海马TRPM2参与了七氟烷麻醉致老龄大鼠海马神经元程序性坏死的过程。

目的:评价瞬时受体电位M2(TRPM2)-钙调磷酸酶A(CnA)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)通路在丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤中的作用。方法:SPF级雄性C57BL6小鼠24只，8周龄，体重20～23 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组)和TRPM2激动剂腺苷二磷酸核糖(ADPR)+丙泊酚组(AP组)。采用夹闭肝左、中叶门静脉和肝动脉60 min恢复灌注的方法制备肝缺血再灌注损伤模型。P组于造模前1 h时腹腔注射生理盐水0.2 ml，造模前30 min时腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；AP组于造模前1 h时腹腔注射ADPR 10 mg/kg(溶于0.2 ml生理盐水中)，造模前30 min腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；S组和IR组分别于造模前1 h和30 min时腹腔注射等体积生理盐水。于再灌注6 h时摘眼球采血检测血清BUN、Cr、ALT和AST水平，然后处死小鼠取肾组织，透射电镜下观察线粒体超微结构，并计算线粒体长径，采用Western blot法检测TRPM2、CnA、磷酸化Drp1(p-Drp1) Ser637和cleaved caspase-3的表达。 结果:与S组比较，IR组、P组和AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)；与IR组比较，P组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达下调，p-Drp1 Ser637表达上调，线粒体长径延长( P<0.05)，线粒体损伤减轻，血清ALT和AST浓度差异无统计学意义，AP组血清BUN和Cr浓度差异无统计学意义( P>0.05)；与P组比较，AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)，线粒体损伤加重。 结论:丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤的机制与其抑制肾组织TRPM2的表达，降低胞内CnA的水平，抑制Drp1 Ser637去磷酸化有关。

目的:探究溶酶体Ca 2＋通道瞬时受体电位粘脂蛋白1(TRPML1)激动剂ML-SA5通过促进溶酶体胞吐促进醋酸铀酰暴露的人肾近端小管上皮HK-2细胞内铀的排出及减轻铀致细胞损伤的作用及机制。 方法:将HK-2细胞分为空白对照组(Ctrl组)、ML-SA5组(M组)、Vacuolin-1组(V组)、ML-SA5＋Vacuolin-1组(M＋V组)、单纯铀染毒组(U组)、铀染毒＋ML-SA5组(U＋M组)、铀染毒＋Vacuolin-1组(U＋V组)和铀染毒＋ML-SA5＋Vacuolin-1组(U＋M＋V组)，分别给予0和300 μmol/L醋酸铀酰暴露24 h后加入ML-SA5和/或溶酶体胞吐抑制剂Vacuolin-1作用0.5 h。采用免疫荧光法检测溶酶体相关膜蛋白-1(LAMP-1)在细胞质膜的定位情况，ICP-MS检测细胞内铀含量，免疫荧光法检测肾损伤分子1(KIM-1)蛋白表达，Calcein-AM/PI双染色法检测细胞死亡率，免疫荧光法检测转录因子EB(TFEB)的亚细胞定位、LAMP-1及TRPML1蛋白表达，采用溶酶体LysoTracker荧光探针检测溶酶体数量。结果:与Ctrl组相比，U组细胞质膜定位的LAMP-1蛋白、细胞KIM-1蛋白表达、细胞死亡率明显增加( t ＝ 12.86、18.86、38.53， P < 0.05)，TFEB核转位、TFEB下游靶基因LAMP-1和TRPML1蛋白表达及LysoTracker探针标记的溶酶体数量明显增加( t ＝ 9.12、16.47、32.33、7.75， P < 0.05)；与U组相比，U＋M组HK-2细胞质膜定位的LAMP-1明显增加( t ＝ 3.33， P < 0.05)，细胞内铀含量明显减少( t ＝ 5.01， P < 0.05)，细胞内KIM-1蛋白表达和细胞死亡率显著降低( t ＝ 3.81、3.24， P < 0.05)，这些作用均能被溶酶体胞吐抑制剂Vacuolin-1所抵消；ML-SA5还可明显提高负载铀HK-2细胞的TFEB核转位( t ＝ 9.20， P < 0.05)、TFEB下游靶基因LAMP-1及TRPML1蛋白表达( t ＝ 3.05、3.17， P < 0.05)以及LysoTracker标记的溶酶体数量( t ＝ 3.13， P < 0.05)。 结论:TRPML1激动剂ML-SA5通过刺激溶酶体胞吐，促进负载铀的HK-2细胞内铀排出及降低铀致细胞损伤/死亡，与其激活TFEB上调溶酶体生物发生和TRPML1蛋白表达有关。

目的:观察蜂针疗法对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型疗效,并观察其对TRPV1和TRPM8的影响.方法:40只白变种实验室(BALB/c)小鼠随机分为空白对照组3只和银屑病模型组37只,银屑病建模成功27只后再随机分为模型组、本维莫德乳膏组(阳性对照组)和蜂针疗法组,每组各9只.从实验第22天开始治疗,阳性治疗组外涂本维莫德乳膏1次/d,10 mg/次;蜂针疗法组每周采用蜂针治疗1次,1针/次,留针2 s后拔除,共3周.观察各组小鼠皮损情况,并应用HE染色观察皮损病理状态;免疫组化法观察皮损中TRPV1、TRPM8的表达情况;ELISA法检测IL-17水平;RT-PCR法检测皮损处TRPV1和TRPM8 mRNA表达水平.结果:实验结束时,阳性对照组、蜂针疗法组血清IL-17含量与治疗前相比显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后与模型组相比,血清IL-17含量亦下降明显,差异有统计学意义(P<0.05).蜂针治疗后模型小鼠皮损中TRPV1表达含量较空白对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);阳性对照组、蜂针疗法组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).蜂针治疗后,蜂针疗法组小鼠皮损中TRPM8含量较模型组显著降低(P<0.05),阳性对照组下降不明显(P>0.05).结论:蜂针治疗能有效改善银屑病患者皮疹及咪喹莫特诱导银屑病样小鼠皮损,同时发现蜂针治疗后皮损中TRPV1含量有所恢复、TRPM8含量有所减少,可见银屑病的发生与皮肤中冷热敏通道存在密切关系.

目的 探讨小胶质细胞及星形胶质细胞中的瞬时受体电位M2 型(TRPM2)离子通道在颞叶癫痫(TLE)相关神经炎症中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和癫痫组,癫痫组采用氯化锂-毛果芸香碱(匹罗卡品)制作癫痫模型,对照组给予等剂量的生理盐水代替,根据造模后观察的时间将TLE大鼠随机分为 7 个亚组(n = 5):急性期(3 h组、6 h组、1 d组、2 d组)、潜伏期(14 d组)、慢性期(30 d组、90 d组).检测TRPM2 在不同亚组TLE大鼠海马中的表达及TRPM2 在大鼠海马中的细胞定位情况.采用过氧化氢(H2O2)诱导小胶质细胞BV2 及星形胶质细胞C8 细胞系,检测细胞释放IL-1β、IL-6 和TNF-α的水平,检测H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)、糖原合成酶激酶 3β(GSK-3β)、磷酸化核因子κB p65 蛋白(p-NF-κB p65)的表达变化,同时检测H2O2 诱导BV2 细胞中钙调神经磷酸酶(CaN)的活性变化.结果 急性期TLE大鼠海马中的TRPM2 表达升高(P<0.05).H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2 的表达升高、炎症因子释放增加(P均<0.05),H2O2 可促进BV2 细胞中PARP-1、p-NF-κB p65 的表达并提高CaN、GSK-3β的活性(P均<0.05).结论 氧化应激可促进小胶质细胞及星形胶质细胞TRPM2 及促炎细胞因子的表达,癫痫反复发作引起的氧化应激可能在小胶质细胞中通过TRPM2/CaN/p-NF-κB p65 通路介导TLE相关神经炎症的发生.

缺血性脑损伤是导致成人死亡和残疾的主要原因之一,既往研究的主流观点认为:缺血性脑损伤致死致残的原因主要与NMDA(N-methyl-D-aspartic acid)受体过度激活有关,即缺血时会引起谷氨酸大量释放,激活NMDA受体,从而介导Ca2+过量流入胞内,触发下游Ca2+依赖性的细胞死亡信号级联反应;这一系列级联反应进一步引起了一些非选择性阳离子通道的开放,如酸敏感离子通道(ASICs)和瞬时受体电位M型离子通道(TRPM)等,最终共同导致了不可逆性的脑组织损伤.因此,诸多拮抗NMDA受体的具有类药性的小分子化合物应运而生,但是这些临床前疗效显著的化合物不能成功通过Ⅳ期临床实验,提示在NMDA受体之外还存在其他重要的上游分子决定着缺血性脑损伤的转归.

目的 探讨薄荷醇对低压低氧诱导小鼠肺动脉高压的作用和机制.方法 健康雄性10～12周C57小鼠、瞬时受体电位通道M8基因敲除(TRPM8-/-)小鼠各40只,分为对照组、薄荷醇组、低压低氧组、低压低氧+薄荷醇组,超声测量肺动脉加速时间(PAT)和肺动脉射血时间(PET),右心导管测量右心室收缩压(RVSP),计算右心室肥厚指数(RVHI),观察肺小动脉重构(＜100 μm)情况,Western blot检测Krüppel样因子4(KLF-4)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达.肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)经低氧(3％氧浓度)、低氧+薄荷醇(100 μmol·L-1)处理,测定增殖和迁移能力.结果 薄荷醇处理野生型小鼠后,PAT和PAT/PET比值增加(P＜0.05),RVSP和RVHI降低(P＜0.05),同时肺小动脉增厚和管腔狭窄程度减轻(P＜0.05),KLF4表达增加(P＜0.05)、PCNA表达降低(P＜0.05);薄荷醇处理TRPM8-/-小鼠后,PAT、PAT/PET、RVSP、RVHI、KLF4、PCNA表达和肺血管重构均未见明显改变(P＞0.05).薄荷醇干预PASMCs后增殖、迁移能力下降(P＜0.01、P＜0.05).结论 薄荷醇可能通过TRPM8抑制PASMCs增殖、迁移,改善低压低氧诱导的小鼠肺血管重构和肺动脉高压,其机制可能与上调KLF4表达有关.