目的:探讨HER2免疫组织化学（IHC）检测结果为0乳腺癌患者HER2 mRNA的表达特征，初步分析以HER2基因表达水平分层乳腺癌HER2超低表达和HER2无表达（IHC无染色）的可行性。方法:收集北京协和医院2020年1月至2023年3月手术的甲醛固定石蜡包埋的浸润性乳腺癌组织标本41例，包括21例HER2 IHC 1+和20例HER2 IHC 0（HER2超低表达12例，HER2无表达8例）。采用数字PCR方法，以荧光FAM（HER2）/VIC（内参基因）比值计算HER2 mRNA水平。结果:HER2 IHC 1+、HER2超低表达及HER2无表达的HER2 mRNA表达分别为0.30~1.78（平均0.90，中位0.82）、0.55~1.51（平均0.93，中位0.90）及0.22~0.78（平均0.41，中位0.36）。每组HER2 mRNA表达的平均值和中位值，HER2 IHC 1+和HER2超低表达之间差异无统计学意义（ P=0.757）；HER2 IHC 1+与HER2无表达及HER2超低表达与HER2无表达之间差异有统计学意义（分别 P=0.002， P=0.001）。 结论:根据HER2 mRNA水平，HER2无表达与HER2弱表达（HER2 1+和HER2超低表达）属于两组不同的肿瘤；而HER2 1+和HER2超低表达可能是同一组肿瘤。有必要进一步验证以HER2 mRNA精细分层HER2弱表达的能力及确定阈值。

目的:比较多种抗原修复方法在肾组织石蜡切片免疫荧光技术中的应用，探讨最佳抗原修复法。方法:选取2018年6月至2019年6月期间郑州大学第一附属医院肾脏病理中心的45例肾活检组织标本为研究对象，其中狼疮肾炎、膜性肾病、IgA肾病各10例及淀粉样变性肾病15例。分别用5种抗原修复法处理各组肾组织石蜡切片。按照标本来源和抗原修复方法分为6组：对照组（冰冻切片标本）、高压热修复联合胰蛋白酶消化双修复（高压热联合胰酶）组、微波热修复联合胰蛋白酶消化双修复（微波热联合胰酶）组、高压热修复（高压热）组、微波热修复（微波热）组、胃蛋白酶消化（胃蛋白酶）组。分析和比较5种热修复抗原方法的石蜡切片与冰冻切片免疫荧光染色和半定量评分的差异。结果:高压热联合胰酶、微波热联合胰酶组肾组织石蜡切片的免疫荧光染色结果与对照组一致，与对照组比较，两组免疫荧光半定量评分的差异无统计学意义（均 P>0.05）。高压热组、微波热组和胃蛋白酶组石蜡切片免疫荧光染色结果较对照组假阴性率高，免疫荧光半定量评分的差异有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:高压热修复联合胰蛋白酶消化双修复法与微波热修复联合胰蛋白酶消化双修复法为石蜡切片的最佳抗原修复方法。

目的:探讨膀胱原发性黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤（MALToma）临床病理特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2008年12月至2021年12月在福建省立医院、漳州市医院、宁德市闽东医院、漳州市第二医院及福州台江医院确诊的行经尿道膀胱肿瘤电切术的9例膀胱原发性MALToma患者的临床病理资料，收集石蜡包埋手术标本，进行HE染色、免疫组织化学染色及基因检测，总结患者临床病理特征，并复习文献。结果:9例患者中，女性8例，男性1例；年龄（59±11）岁，范围：39～74岁；其中肿瘤病灶三灶2例，两灶3例，单灶4例；肿物长径（3.2±1.9）cm，范围：0.3～7.0 cm。随访时间6～127个月，4例失访，4例无病生存，1例带瘤生存。组织形态学观察示，膀胱组织见弥漫性一致淋巴细胞浸润，淋巴细胞小至中等大小，核仁不明显，胞质丰富、淡染，部分透亮，核分裂象少见；1例部分区域见大细胞增多，可见核仁及核分裂象。9例患者肿瘤细胞均表达CD20；bcl-2、CD43、CD38部分细胞阳性4例，CD138少数细胞阳性2例；κ较多阳性4例，散在阳性5例；λ少数阳性4例，散在阳性5例。行B细胞受体基因重排检测的8例均阳性；行MALT1基因分离探针荧光原位杂交法检测的6例均无分离信号。结论:PBMALToma临床上罕见，主要见于老年女性，属于低级别B细胞淋巴瘤。未见MALT1基因异常改变。

目的:建立实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）大鼠模型，观察碘过量对EAT大鼠甲状腺功能、抗体及促甲状腺激素受体（TSHR）基因表达的影响，探讨TSHR基因在自身免疫性甲状腺炎发生中的作用机制。方法:48只4周龄雌性Lewis大鼠，按体重（80 ~ 100 g）采用随机数字表法分为对照组、甲状腺球蛋白（TG）组、TG +高碘Ⅰ（TG + HⅠ）组、TG +高碘Ⅱ（TG + HⅡ）组，每组12只大鼠，分别饮用碘离子含量为50、50 μg/L和20、200 mg/L的去离子水，对TG组、TG + HⅠ组、TG + HⅡ组大鼠进行免疫，采用猪甲状腺球蛋白（pTg）和完全弗氏佐剂（CFA）作为免疫试剂，每2周1次，共3次。石蜡包埋甲状腺组织、切片，观察大鼠甲状腺病理学变化；放射免疫法检测大鼠血清甲状腺球蛋白抗体（TgAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT 3）、游离甲状腺素（FT 4）水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清TSHR蛋白含量；实时荧光定量PCR检测大鼠全血及甲状腺组织TSHR mRNA表达水平；免疫组织化学法检测大鼠甲状腺组织TSHR蛋白表达水平。 结果:HE染色显示，对照组大鼠甲状腺滤泡结构完整，形态规则，无淋巴细胞浸润；TG组可观察到少量淋巴细胞且呈现散在分布；TG + HⅠ、TG + HⅡ组滤泡结构破坏、融合，滤泡间可见小灶状淋巴细胞浸润。各组大鼠血清TgAb、TPOAb、FT 3、FT 4水平[中位数（四分位数间距）]比较差异有统计学意义（ H = 30.28、21.99、12.87、26.69， P均< 0.05）；与对照组比较[6.89（6.32，7.27）、11.02（7.60，12.53），5.05（2.71，7.99）、7.51（6.50，9.24）pmol/L]，TG、TG + HⅠ、TG + HⅡ组大鼠血清TgAb[34.99（25.39，41.35）、37.70（29.06，43.99）、46.41（38.52，55.26）]、TPOAb[22.87（13.65，31.82）、22.22（14.82，28.33）、14.61（12.95，19.34）]、FT 3[57.74（24.56，64.27）、43.64（5.69，80.03）、38.56（17.73，47.59）pmol/L]、FT 4[62.16（41.22，91.57）、60.61（35.52，103.31）、47.96（31.84，112.71）pmol/L]水平明显升高（ P均< 0.05）。TG + HⅡ组大鼠血清TSHR蛋白表达水平[（154.26 ± 25.95）μU/L]低于对照[（249.37 ± 38.12）μU/L]、TG[（225.33 ± 41.28）μU/L]、TG + HⅠ组[（218.15 ± 65.51）μU/L， P均< 0.05]；与对照组比较（1.00 ± 0.05、1.13 ± 0.21），TG、TG + HⅠ、TG + HⅡ组大鼠全血（0.89 ± 0.19、0.89 ± 0.30、0.85 ± 0.24）、甲状腺组织TSHR mRNA表达水平（0.63 ± 0.25、0.46 ± 0.16、0.51 ± 0.25）明显下调（ P均< 0.05）。免疫组织化学染色显示，对照组大鼠甲状腺TSHR蛋白阳性强度明显高于TG、TG + HⅠ、TG + HⅡ组大鼠。 结论:长时间的高碘暴露可能会导致甲状腺的摄碘功能发生损伤，引发甲状腺疾病并使病情加重、TSHR基因的异常表达，使受体膜外区的促甲状腺激素结合位点具有抗原性，从而引发自身免疫性甲状腺疾病。

目的:探讨结直肠癌中错配修复蛋白缺陷（dMMR）与NTRK基因融合的相关性。方法:收集南京大学医学院附属鼓楼医院病理科2015—2019年诊断为结直肠癌的组织蜡块830例，分别运用免疫组织化学和荧光原位杂交（FISH）检测830例甲醛固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织中错配修复蛋白表达情况以及NTRK1/2/3基因断裂情况。比较dMMR型和错配修复蛋白无缺陷（pMMR）结直肠癌中NTRK1/2/3基因融合的发生率，进一步运用FFPE样本进行RNA Seq二代测序检测，分析融合伴侣和融合方式。结果:830例原发性结直肠癌FFPE样本均成功进行免疫组织化学和FISH检测。dMMR病例82例（9.88%），pMMR病例748例（90.12%）。其中MLH1蛋白缺失比例为9.04%（75/830），PMS2蛋白缺失比例为9.04%（75/830），MSH2蛋白缺失比例为2.53%（21/830），MSH6蛋白缺失比例为4.10%（34/830），MLH1和PMS2共缺失比例为8.67%（72/830），MSH2和MSH6共缺失比例为2.17%（18/830）。伴有dMMR肿瘤与pMMR肿瘤相比较，在发生部位、组织学分型、分化程度、美国癌症联合会（AJCC）分期、N分期及NTRK基因融合的发生频率上差异有统计学意义（ P<0.05）。在82例dMMR的病例中共检测到6例（7.32%）携带NTRK基因融合；而在748例pMMR的病例中共检测到7例（0.94%）携带NTRK基因融合。二代测序进一步证实13例FISH检测阳性的病例均为携带了NTRK基因融合，NTRK基因融合阳性组仅在分化程度上与融合阴性组差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:在原发性结直肠癌中，携带dMMR的肿瘤其NTRK基因融合的比例远高于pMMR的肿瘤。

目的:探讨新型硬组织切片技术在临床骨与骨髓病理诊断中的潜在应用价值。方法:收集2021年3至12月上海市第六人民医院19例骨病病例（骨软骨瘤1例、软骨肉瘤2例、骨肉瘤4例、纤维结构不良2例、甲状腺乳头状癌骨转移2例、骨髓炎病例2例、骨巨细胞瘤4例、尤文肉瘤2例），其中男14例，女5例，年龄 M（范围）为31（10~66）岁；16例血液病病例，其中男7例，女9例，年龄 M（范围）为28（16~65）岁。对35例临床病例标本分别采用新型硬组织切片技术与石蜡包埋切片技术制片，通过苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色、荧光原位杂交及Sanger测序等方法比较两种制片方法对于临床骨与骨髓疾病病理诊断的优缺点。 结果:新型硬组织切片在HE染色中展现出更好的组织细胞形态；在免疫组织化学染色检测Ki67、SATB2、CD34、SMA、CD68、MPO、CD4、CD33等指标时，新型硬组织切片技术相对于石蜡切片技术表达更好，定位更准确；针对MDM2荧光原位杂交结果显示，新型硬组织切片技术荧光强度更高；Sanger测序结果显示，两种切片技术的DNA纯度均满足条件，且均检测到突变。结论:新型硬组织切片技术简单易行、耗时短，适用于优化临床骨与骨髓病理诊断流程。

目的:探讨肝细胞核因子4γ(HNF4γ)在胃癌细胞增殖和干性维持中的作用及机制。方法:收集2012—2015年在郑州大学第一附属医院行胃癌根治术患者的胃癌及相应癌旁正常组织蜡块102例，新鲜组织42例。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应和免疫组化法检测HNF4γ的表达情况。建立HNF4γ过表达胃癌细胞株AGS-HNF4γ和HNF4γ沉默细胞株HGC27-shHNF4γ，分别采用XTT细胞增殖、平板克隆实验、干细胞成球实验测定HNF4γ过表达和沉默对胃癌细胞增殖和干性的影响，Western blot检测CD44的表达。结果:42例新鲜胃癌组织中，HNF4γ mRNA的表达水平为12.43±2.702，高于相应癌旁正常组织3.639±1.109( P<0.010)。102例石蜡包埋胃癌组织中，41.2%(42/102)HNF4γ蛋白表达阳性，高于癌旁正常组织的8.8%(9/102， P<0.001)。HNF4γ蛋白表达与胃癌患者的分化程度、浸润深度、临床分期和淋巴结转有关(均 P<0.05)。HNF4γ蛋白高表达组患者的中位生存时间为25个月，3年生存率为4.8%(2/42)，HNF4γ蛋白正常表达组患者的中位生存时间为38个月，3年生存率为51.7%(31/60)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。AGS-HNF4γ细胞增殖快于对照AGS-Vector细胞，细胞克隆数高于AGS-Vector细胞[分别为(243.5±24.5)个和(81.0±16.0)个， P＝0.030],细胞成球率高于AGS-Vector细胞[分别为(83.5±3.9)%和(21.8±5.6)%， P＝0.010]，CD44的表达量高于AGS-Vector细胞。HGC27-shHNF4细胞增殖慢于对照HGC27-Vector细胞，细胞克隆数低于HGC27-Vector细胞[分别为(26.0±1.0)个和(83.5±4.5)个， P＝0.006]，细胞成球率低于HGC27-Vector细胞[分别为(20.8±8.4)%和(72.5±4.8)%， P＝0.030]，CD44的表达量低于HGC27-Vector细胞。 结论:HNF4γ在胃癌组织中异常高表达，与胃癌患者的不良预后有关。HNF4γ可促进胃癌细胞的增殖，并通过促进CD44的表达维持胃癌细胞的干性。

目的:探讨局部晚期非小细胞肺癌患者KRAS基因突变、程序性死亡受体配体1（PD-L1）表达与一线同步放化疗预后的关系。方法:回顾性分析2018年1月至2021年12月南平市第一医院收治的50例局部晚期非小细胞肺癌患者临床资料，所有患者均接受一线同步放化疗方案治疗，治疗前已获取患者组织标本并石蜡包埋。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测治疗前组织中KRAS基因突变类型，采用免疫组织化学法测定PD-L1表达情况（肿瘤细胞中阳性细胞比例≥1%为阳性），分析KRAS基因状态、PD-L1表达情况与患者临床特征和近期疗效的关系。随访1年，采用Kaplan-Meier法绘制患者无进展生存（PFS）曲线，比较采用log-rank检验。采用单因素和多因素Cox比例风险模型分析患者PFS的影响因素。结果:50例患者中KRAS突变型11例（22.00%），PD-L1阳性36例（72.00%）；11例KRAS突变患者中，第2号外显子第13号密码子突变2例、第12号密码子突变9例。患者客观缓解率（ORR）为76.00%（38/50）、临床控制率（DCR）为86.00%（43/50）。KRAS突变型组与KRAS野生型组间患者年龄、病理类型、TNM分期、ORR、DCR差异均无统计学意义（均 P>0.05），KRAS突变型组男性[72.73% （8/11）比38.46%（15/39）]、有吸烟史[90.91%（10/11）比20.51%（8/39）]、PD-L1阳性表达[100.00%（11/11）比64.10%（25/39）]患者比例均高于KRAS野生型组（均 P<0.05）；PD-L1阳性组与PD-L1阴性组间患者年龄、病理类型、性别、吸烟史、TNM分期、ORR及DCR差异均无统计学意义（均 P>0.05）。KRAS突变型组和野生型组患者中位PFS时间分别为8.75、11.32个月，两组间PFS差异有统计学意义（ P＝0.039）；PD-L1阳性和阴性患者中位PFS时间分别为10.19、11.16个月，二者间PFS差异无统计学意义（ P＝0.116）。多因素Cox回归分析显示，KRAS基因突变型为接受一线同步放化疗局部晚期非小细胞肺癌患者PFS的独立危险因素（ HR =1.449，95% CI 1.071~1.196， P＝0.017），PD-L1表达、吸烟史、性别均不是PFS的独立影响因素（均 P>0.05）。 结论:KRAS基因状态与接受一线同步放化疗治疗的局部晚期非小细胞肺癌患者预后密切相关，而PD-L1表达情况与之无关。

目的:探讨初始骨转移与肺转移的骨肉瘤基因组学表现差异及发病机制。方法:收集2021年5月1日至10月1日于北京大学人民医院诊治的38例高级别骨肉瘤患者肿瘤新鲜标本及部分石蜡包埋标本，男29例、女9例，年龄（19.6±2.2）岁（范围6~61岁）。38例中12例发生初始骨转移、26例发生初始肺转移，其中15例（40%，15/38）具有原发灶和转移灶的配对标本。应用Illumina NovaSeq 6000平台进行全外显子测序及转录组测序，并随治疗进程获取肿瘤演进过程中的新鲜配对标本，分析不同进展模式的骨肉瘤配对标本的全外显子组测序数据，进一步根据其基因型表现进行疾病亚分类，将基因学表现与临床过程进行关联。结果:骨转移组以单核苷酸变异为主（83%，10/12），肺转移组以结构变异为主（58%，15/26）。骨转移组的肿瘤突变负荷为4.9（2.8，12.0）、新抗原负荷为743.0（316.5，1 034.5），较肺转移组的2.4（1.4，4.5）和128.5（49.0，200.5）更高，差异均有统计学意义（ P=0.010， P=0.003）。突变谱示骨转移组[0.33（0.13，0.60）]和肺转移组[0.10（0.00，0.13）]在与年龄有关的基因特征1上的差异有统计学意义（ P=0.005）。以随机表法每组各选择3例患者进行多色免疫荧光染色，骨转移组中1例发现了三级淋巴结构。通过对配对标本进行进化图谱分析发现骨肉瘤配对标本的已知基因呈高度保守。 结论:以单核苷酸变异为主而非结构变异的骨肉瘤可能容易发生初始骨转移，此类患者年龄更大，肿瘤微环境的免疫源性可能更高。

目的:探讨RET基因融合阳性非小细胞肺癌患者的临床病理学特征及治疗与预后。方法:选取2018年8月至2020年4月江南大学附属医院存档的非小细胞肺癌标本1 089例，采用多种基因融合检测试剂盒（荧光PCR法）检测1 089例石蜡包埋组织标本中RET、表皮生长因子受体、间变性淋巴瘤激酶、ROS1、KRAS、BRAF和HER2等基因状态。采用免疫组织化学法检测患者组织标本中PD-L1和错配修复相关蛋白的表达。分析患者RET基因融合与年龄、性别、吸烟史、分期、分化程度、病理学类型以及PD-L1、错配修复蛋白等表达的相关性。结果:1 089例非小细胞肺癌患者中共发现RET基因融合阳性患者22例（2.02%），男性和女性各11例，中位年龄63.5岁。22例RET基因融合阳性患者有20例腺癌，其中腺泡亚型11例，实体亚型5例，贴壁生长型4例；另有鳞状细胞癌（非角化型）和肉瘤样癌（多形性癌）各1例。临床分期Ⅰ~Ⅱ期6例，Ⅲ~Ⅳ期16例。伴有淋巴结转移16例，远处转移11例。RET基因融合阳性患者中有1例伴HER2突变。RET基因融合阳性肺癌患者中PD-L1的阳性比例分数≥1%的占54.5%（12/22）。未发现RET基因融合阳性非小细胞肺癌患者的错配修复蛋白表达存在缺陷。4例RET基因融合阳性患者（腺泡亚型2例、实体亚型2例）接受了普拉替尼靶向治疗，观察到其中2例患者从靶向治疗中获益。结论:RET基因融合阳性患者的组织学亚型倾向于腺泡亚型以及实体亚型。RET基因融合阳性患者往往发生于临床分期较晚的患者，通常伴有淋巴结转移。RET基因融合阳性患者可从RET特异性抑制剂靶向治疗中获益。