目的 研究前列腺癌(PC)组织中硒结合蛋白1(SELENBP1)、硒蛋白F(SELENOF)表达与患者临床病理特征关系和预后的关系.方法 选取2017年1月至2020年1月邯郸市中心医院诊治的104例PC患者作为研究对象.检测PC患者癌组织和癌旁组织中SELENBP1、SELENOF表达水平,并分析两者与PC患者临床病理特征和预后的关系.采用多因素COX回归分析影响PC患者预后的因素.结果 PC患者癌组织中SELENBP1、SELENOF阳性率低于癌旁组织(P＜0.05).不同Gleason评分、TNM分期及术前前列腺特异性抗原(PSA)水平的PC患者癌组织中SELENBP1、SELENOF阳性率比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)o SELENBP1阴性患者、SELENOF阴性患者3年无进展生存率分别低于SELENBP1阳性患者、SELENOF阳性患者(P＜0.05).TNM分期Ⅲ期、Gleason评分＞7分、SELENBP1阴性、SELENOF阴性是影响PC患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 PC患者癌组织中SELENBP1、SELENOF表达降低,且两者与PC患者不良临床病理特征相关,可导致PC患者不良预后.

目的:探讨硒对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的AC16心肌细胞炎性损伤的影响。方法:将体外培养的AC16心肌细胞分为对照组、硒预处理组（100 μg/L亚硒酸钠预处理4 h）、50 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 50 μg/L TNF-α组、100 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 100 μg/L TNF-α组。各组分别培养24 h后，收集细胞培养液和细胞进行检测。Griess法检测细胞培养液一氧化氮（NO）含量；荧光倒置显微镜观察细胞Hoechst 33342核染色，分析核固缩比例；实时荧光定量PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测核因子-kappa B（NF-κB）p65、NF-κB抑制蛋白-α（IκB-α）蛋白表达水平。结果:对照组、硒预处理组、50 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 50 μg/L TNF-α组、100 μg/L TNF-α组和硒预处理+ 100 μg/L TNF-α组细胞培养液NO含量分别为（10.58 ± 2.32）、（9.07 ± 0.73）、（15.53 ± 3.97）、（12.05 ± 1.11）、（30.65 ± 4.16）、（19.02 ± 3.72）μmol/L。硒、TNF-α对细胞培养液NO含量均存在主效应（ F = 37.71、99.07，均 P < 0.001），且二者间存在交互效应（ F = 11.80， P < 0.001）。硒、TNF-α对核固缩比例，Bcl-2、Bax mRNA表达水平均存在主效应（ F = 56.37、462.81，18.04、32.85，18.38、170.77，均 P < 0.05），且硒、TNF-α对核固缩比例，Bax mRNA表达水平均存在交互效应（ F = 21.48、19.96，均 P < 0.001）。硒、TNF-α对iNOS mRNA表达水平均存在主效应（ F = 129.98、1 051.76，均 P < 0.001），且二者间存在交互效应（ F = 53.28， P < 0.001）。硒、TNF-α对NF-κB p65、IκB-α蛋白表达水平均存在主效应（ F = 73.65、145.49，710.20、105.66，均 P < 0.001），且二者间均存在交互效应（ F = 26.73、197.59，均 P < 0.001）。 结论:硒可能通过NF-κB信号系统抑制iNOS表达，保护心肌细胞免受TNF-α诱导的炎性损伤。

目的:探讨硒抑制长链非编码RNA HOXB cluster antisense RNA1(HOXB-AS1)表达调控胃癌增殖的作用及其机制。方法:对人胃癌HGC-27、SNU-1，KATO Ⅲ细胞和人胃黏膜上皮细胞使用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平；根据亚硒酸钠添加的浓度将高表达HOXB-AS1基因的细胞分为空白组、5 μmol/L组、10 μmol/L组、15 μmol/L组、20 μmol/L组、25 μmol/L组、30 μmol/L组，分别培养24、48、72 h后采用细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞活力，筛选亚硒酸钠的最佳作用浓度；用30 μmol/L亚硒酸钠干预人胃癌HGC-27细胞，采用RT-qPCR检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平，采用CCK-8检测细胞活力，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例变化，运用蛋白质印迹法(Western blot)法检测蛋白激酶B(Akt)及雷帕霉素的哺乳动物靶标蛋白(mTOR)的表达水平。组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:RT-PCR检测结果表明，与其他细胞株比较，人胃癌HGC-27细胞HOXB-AS1基因的表达水平最高(5.37±0.14， F＝386.913， P<0.05)；CCK-8结果显示30 μmol/L亚硒酸钠组的平均细胞抑制率都显著高于其他5组( F24 h＝178.105， F48 h＝1 093.759， F72 h＝473.833， P<0.05)；RT-PCR检测结果表明，亚硒酸钠干预后的HGC-27人胃癌细胞的HOXB-AS1表达水平(0.11±0.01)显著低于对照组( t＝43.895， P<0.05)，而细胞凋亡率[(36.36±0.46)%]则显著高于对照组( t＝－26.737， P<0.05)；Western blot结果显示亚硒酸钠组的Akt(1.02±0.00)、磷酸化Akt(p-Akt，0.32±0.02)、mTOR(0.79±0.00)和磷酸化mTOR(p-mTOR，0.49±0.02)的相对表达量都显著低于对照组( tAkt＝27.951， tp-Akt＝47.666， tmTOR＝37.898， tp-mTOR＝25.307， P<0.05)。 结论:硒能够通过抑制人胃癌细胞的lncRNA HOXB-AS1表达来影响Akt/mTOR通路，从而促进人胃癌细胞的凋亡来抑制胃癌的增殖。

目的 探讨虫草多糖功能化纳米硒(Cs4-SeNPs)对脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎症反应的作用及其可能机制.方法 以不同浓度(0.01、0.10、1.00 μmol/L)Cs4-SeNPs作用LPS诱导的BV2小胶质细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测BV2小胶质细胞活力,免疫印迹技术检测BV2小胶质细胞硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达,荧光定量PCR技术检测不同时间(4、8、12 h)BV2小胶质细胞促炎因子环氧化酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达.结果 0.01、0.10、1.00 μmol/L的Cs4-SeNPs对BV2细胞活力无明显影响.与对照组相比,LPS组GPX4蛋白表达降低(F=25.47,q=6.43,P＜0.01);0.01、0.10和1.00 μmol/L的 Cs4-SeNPs 处理组 GPX4 蛋白表达较 LPS 组明显升高(q=5.72～14.07,P＜0.01),且 1.00 μmol/L Cs4-SeNPs作用效果最好(q=6.04～8.35,P＜0.01).LPS组COX-2与iNOS mRNA表达较对照组显著上调(F=25.00、37.34,q=12.18、12.06,P＜0.001).1.00 μmol/L Cs4-SeNPs 预处理 12 h 可显著抑制 COX-2 基因表达(q=6.10,P＜0.05);预处理 8 和 12 h 可显著抑制 iNOS mRNA 表达(q=4.71、6.97,P＜0.05).结论 Cs4-SeNPs 对 LPS 诱导的BV2小胶质细胞炎症反应具有抑制作用,其机制可能与硒蛋白GPX4的调控有关.

目的 探讨糖尿病肾病(DN)大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)的提取及体外培养方法.方法 取SD雄性大鼠25只,随机分为正常组(n=5)和模型组(n=20).对模型组大鼠构建DN大鼠模型,不给予正常组任何处理.获取两组大鼠双肾组织,一部分组织用于HE染色及Masson染色以观察肾组织结构,另一部分用于RTECs的提取及培养.RTECs的提取、培养方法:将肾皮质组织在80目筛网上研磨,经100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min后,使用含10％胎牛血清、1％胰岛素-转铁蛋白-硒-乙醇胺添加剂和1％青链霉素双抗溶液的DMEM/F-12完全培养基培养细胞.用免疫荧光染色法检测细胞角蛋白18的表达情况以鉴定所获得的细胞.结果 (1)建模后模型组大鼠出现多饮、多食、多尿、体重下降、血糖升高等特征,尿蛋白定性呈阳性,肾组织病理检测提示肾小球结构不完整且出现明显缺损,RTECs明显肿胀、变性,肾小管管腔萎缩,肾小管间质纤维化严重.(2)培养72h后,两组RTECs均已经贴壁并呈岛屿状聚集生长,培养5～8d后细胞呈多边鹅卵石样.模型组RTECs高表达细胞角蛋白18,阳性率＞95％.结论 采用在80目筛网上研磨、100目筛网过滤、Ⅰ型胶原酶消化25 min的方法可以得到数量较多、活性良好、纯度较高的DN大鼠模型RTECs,且在形态与贴壁情况方面与正常大鼠RTECs无明显差异.

目的 观察硒对小鼠特应性皮炎样表现的影响.方法 40只BALB/c小鼠随机等分为缺硒组(0.01 mg/kg)、正常硒组(0.25 mg/kg)、过量硒组(3.00 mg/kg)和对照组(0.25 mg/kg),4组小鼠先用缺硒饲料饲养4周后,再分别以缺硒、正常硒、过量硒和正常硒饲料喂养4周.此后,3个致敏组(缺硒组、正常硒组、过量硒组)采用二硝基氯苯(DNCB)诱导特应性皮炎样表现.激发期间监测小鼠皮炎表现严重程度.激发3周后检测小鼠血浆总IgE、全血炎症细胞计数,并剪取小鼠背部皮肤组织进行组织病理检查,分析组织中硒含量.单因素方差分析方法评估多组间IgE、硒水平和细胞计数等检测结果差异,Pearson相关性分析和线性回归分析评估IgE等检测指标与硒水平的相关性.结果 致敏6d后,致敏组小鼠皮肤表现评分明显高于对照组(致敏第6、8、11、13、15、18天时各组间比较,F值分别为44.897、76.622、114.866、33.352、28.605、11.271,均P＜ 0.01),第11天过量硒组皮肤表现评分明显高于缺硒组和正常硒组(均P＜ 0.05).与对照组相比,致敏小鼠均发生明显的皮炎病理改变,但3个致敏组之间皮损中炎症细胞计数差异无统计学意义(均P＞ 0.05).致敏小鼠全血炎症细胞和血浆总IgE水平均随膳食硒水平的增加而升高;其中过量硒组血浆总IgE水平升高最明显,与缺硒组、正常硒组和对照组比较,差异均有统计学意义[(167.17±8.49) μg/L比(124.78±5.32) μg/L、(132.61±4.71) ug/L、(109.13±0.79) μg/L,t值分别为3.919、3.222、6.485,均P＜0.05].致敏组小鼠皮肤组织硒含量与小鼠血浆总IgE水平(r=0.579,P＜0.001)、全血白细胞(r=0.414,P＜0.05)、中性粒细胞(r=0.439,P＜0.05)、淋巴细胞(r=0.417,P＜0.05)和嗜酸性粒细胞(r=0.505,P＜0.01)均呈线性正相关.结论 不同硒水平对小鼠皮炎表现严重程度的影响不同,过量硒组皮炎表现更严重.

目的 观察血管细胞黏附分子-1 (vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)在氧化应激诱导的肥大软骨细胞、大骨节病(KBD)儿童和成人关节软骨以及低硒和T-2毒素中毒大鼠膝关节软骨的表达变化,探讨VCAM-1在大骨节病深层软骨细胞坏死以及分化异常中的作用.方法 采用1％混合液(含10 mg/L胰岛素、5.5 mg/L转铁蛋白、6.7μg/L亚硒酸钠)对小鼠软骨前体细胞ATDC5作用21 d,诱导为肥大软骨细胞,选择5-氨基-3-(4-吗啉基)-1,2,3-恶二唑盐酸盐(3-morpholino-sydnonimine hydrochloride,SIN-1)作为自由基供体构建氧化应激致肥大软骨细胞坏死模型.采用荧光定量(Real-time) PCR检测不同浓度SIN-1诱导的肥大软骨细胞中VCAM-1 mRNA表达情况.采用免疫组织化学技术检测KBD儿童、成人及对照组关节软骨各层软骨细胞VCAM-1表达情况.采用免疫组织化学技术检测低硒和T-2毒素中毒KBD大鼠动物模型膝关节软骨及骺板软骨各层软骨细胞VCAM-I的表达水平.结果 随SIN-1浓度梯度(0、1、3、5 mmol/L)增高,诱导的小鼠关节软骨肥大细胞中VCAM-1 mRNA表达降低(1.00±0.00、1.22±0.20、0.71±0.22、0.37±0.16),组间比较差异有统计学意义(F=27.788,P＜0.05);KBD儿童关节软骨表层、中层VCAM-1阳性细胞率[(16.08±5.20)％、(19.20±9.71)％]高于对照组[(0.00±0.00)％、(0.00±0.00)％],深层VCAM-1阳性细胞率[(7.00±4.40)％]低于对照组[(51.60±20.58)％,t表、中、深=-10.972、-6.249、6.564,P均＜0.05].KBD成人关节软骨表层VCAM-1阳性表达率[(7.92±4.29)％]高于对照组[(3.12±1.12)％],中层[(17.54±8.27)％]表达低于对照组[(31.75±13.30)％],组间比较差异有统计学意义(t表、中=-3.824、3.037,P＜0.05).动物实验中,与对照组[(1.89±1.76)％]比较,低硒组、T-2毒素组与低硒+T-2毒素组关节软骨表层VCAM-1阳性表达率[(4.11±1.90)％、(5.00±2.02)％、(2.78±1.48)％]增高(P均＜0.05);骺板软骨深层软骨细胞中低硒组以及低硒+T-2毒素组深层软骨细胞中VCAM-1阳性表达率[(13.67±2.45)％、(20.56±7.42)％]均低于对照组[(33.00±12.57)％,P均＜0.05].结论 VCAM-1水平在氧化应激致肥大软骨细胞以及KBD软骨组织和低硒条件下T-2毒素中毒大鼠的关节软骨深层软骨细胞中表达减少,VCAM-1对KBD深层软骨细胞坏死及分化异常可能具有重要调控作用.

目的 探讨湖北省恩施地区肝硬化患者血清硒元素水平.方法 选取2016年1月-2017年6月恩施州中心医院收治的肝硬化患者90例为肝硬化组,采用Child-Pugh分类法分为A、B、C级;60例正常健康体检人群为对照组.检测其血清硒元素及肝纤维化指标.计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验,相关分析采用Spearman相关检验.结果 与对照组比较,肝硬化组血清硒水平明显下降,而透明质酸( HA)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层黏连蛋白(LN)明显升高,差异均有统计学意义(t值分别为7.246、9.759、4.790、8.671、5.908,P值均＜0.05).随着Child-Pugh分级的递增,血清硒水平进行性下降,而HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN呈进行性升高,差异均有统计学意义(F值分别为13.524、53.903、21.490、52.495、19.530,P值均＜0.05).血清硒与HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN和Child-Pugh分级间呈负相关(r值分别为-0.361、-0.519、-0.448、-0.354、-0.602,P值均＜0.05).结论 恩施地区肝硬化患者血清硒水平明显低于本地区正常人群,但补硒治疗是否能改善肝硬化预后需要进一步的临床探讨.

目的 探讨硒对一氧化氮(NO)介导心肌细胞凋亡的保护性作用.方法 将体外培养的AC16心肌细胞分为对照组、硒处理组、硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)处理组、硒+SNP处理组,SNP为外源性NO供体.对照组无任何干预,加入与各处理组等体积的培养液,硒处理组加入的硒剂量为100 μg/L,SNP处理组加入的SNP剂量为1.0 mmol/L,硒+SNP组在100μg/L硒预处理4h后加入1.0 mmol/L SNP;培养24 h后收集细胞或上清液.采用Griess法检测上清液NO含量,流式细胞仪检测细胞活性氧水平,荧光倒置显微镜下观察细胞膜电位变化情况及细胞凋亡状况,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平.结果 对照组、硒处理组、SNP处理组和硒+SNP处理组NO含量分别为(10.3±1.8)、(9.2±2.1)、(15.2±3.5)、(14.3±2.6) μmmol/L,SNP对NO含量存在主效应(F=23.33,P＜0.05);细胞活性氧水平分别为31.63±1.40、29.52±2.86、60.62±4.83、50.08±2.41,硒、SNP对活性氧水平存在主效应(F=12.19、187.20,P均＜0.05),二者也存在交互效应(F=5.42,P＜0.05);细胞线粒体膜电位水平分别为0.42±0.11、0.37±0.07、7.25±1.91、5.21±1.59,硒、SNP对细胞线粒体膜电位水平存在主效应(F=14.21、440.01,P均＜0.05),二者也存在交互效应(F=12.89,P＜0.05).硒对细胞核固缩比例、Bax蛋白水平、Bcl-2 mRNA水平存在主效应(F=9.52、10.84、22.17,P均＜0.05);SNP对细胞核固缩比例,Bax、Bcl-2 mRNA水平,Bcl-2蛋白水平存在主效应(F=192.86、21.90、16.09、18.39,P均＜ 0.05);硒与SNP对Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白水平存在交互效应(F=20.51、7.59、15.38、11.97,P均＜0.05).结论 SNP能够引起AC16心肌细胞发生凋亡,硒和SNP对AC16心肌细胞存在交互效应,硒对NO介导的心肌细胞凋亡有保护作用.

硒是哺乳动物必需的一种微量营养元素,主要以硒代半胱氨酸的形式存在于各种硒蛋白中,硒的生物学功能主要通过硒蛋白来实现.在已发现的25种哺乳动物硒蛋白中有7种位于内质网,分别为硒蛋白F (SELENOF)、Ⅱ 型脱碘酶(DI02)、硒蛋白M(SELENOKM)、硒蛋白T(SELENOT)、硒蛋白K(SELENOK)、硒蛋白S(SELENOS)和硒蛋白N(SELENON).这些蛋白的缺失会严重影响内质网的功能,诱导内质网应激的发生.近年的研究发现,阿尔茨海默病中的神经系统损害与内质网功能及应激异常密切相关,这提示,内质网硒蛋白可能与阿尔茨海默病的发生、发展有关.该文主要对内质网硒蛋白与阿尔茨海默症之间的关系展开综述.