目的 探究小胶质细胞铁死亡在烟雾吸入性脑损伤中的作用机制.方法 将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、烟雾吸入性损伤(SII)组、铁抑素治疗组(Fer-1组,2.5 mmol/kg Fer-1)、甲磺酸去铁胺治疗组(DFO组,200 mg/kg DFO),每组5只.Fer-1组和DFO组于造模后第1、3、5天分别腹腔注射Fer-1和DFO.第6天通过苏木素伊红(HE)染色、普鲁士蓝染色观察各组小鼠脑组织的病理变化.实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测脑损伤因子、炎性因子、铁死亡因子基因表达水平.双联吡啶比色法测定小鼠脑组织中铁含量.硫代巴比妥酸比色法测定小鼠脑组织脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)含量.黄嘌呤氧化酶法测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性.二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接法测定小鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)含量.DMEM完全培养基培养BV2细胞,分为Control组、Erastin组(10 μmol/L Erastin刺激)、Fer-1组(10 μmol/L Erastin与5 mmol/L Fer-1同时刺激)、DFO组(10 μmol/L Erastin与50 mmol/L DFO同时刺激).24 h后,CCK-8法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,线粒体红色荧光探针检测线粒体膜电位.结果 与Control组相比,SII组小鼠脑组织出现明显铁沉积和炎症反应,脑组织脑损伤因子、炎性因子mRNA表达水平升高,乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)、核受体共激活因子4(NCOA4)mRNA表达水平升高,谷胱甘肽氧化酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)mRNA表达水平降低,小鼠脑组织GSH和SOD含量降低,LPO和MDA含量升高(P＜0.05).与SII组相比,Fer-1组和DFO组小鼠相应指标变化与上述相反(P＜0.05),小鼠脑组织损伤减轻.BV2细胞实验结果显示,与Control组相比,Erastin组BV2细胞存活率下降、凋亡率升高(P＜0.05),细胞内ROS水平升高,线粒体膜电位下降;与Erastin组相比,Fer-1组、DFO组细胞相应指标变化与上述相反(P＜0.05),BV2细胞氧化损伤得到缓解.结论 铁死亡抑制剂Fer-1和DFO能够抑制小胶质细胞铁死亡并缓解烟雾吸入性脑损伤.

目的:研究结肠癌组织中微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和硫酯酶超家族成员4(THEM4)的表达水平及其临床意义.方法:收集河北中石油中心医院96例结肠癌患者为研究对象,在进行根治切除术过程中收集患者结肠癌组织及癌旁正常组织.检测结肠癌组织及癌旁正常组织中miR-183-5p和THEM4 mRNA的相对表达水平.分析两者的相关性及其与预后的关系.Cox回归分析影响结肠癌患者预后的危险因素.结果:与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中miR-183-5p表达水平升高(P＜0.05),THEM4 mRNA表达水平降低(P＜0.05).结肠癌组织中miR-183-5p与THEM4 mRNA表达呈负相关(r=-0.529,P＜0.05).miR-183-5p高表达组生存率低于低表达组(P＜0.05),THEM4高表达组生存率显著高于低表达组(P＜0.05).TNM分期(Ⅲ～Ⅳ)、miR-183-5p高表达、THEM4低表达是结肠癌患者不良预后的危险因素(P＜0.05).结论:结肠癌织中miR-183-5p表达水平升高,THEM4表达水平降低,两者均与患者临床病理特征及预后密切相关.

目的 观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠肾脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积的影响.方法 将♂CD1小鼠随机分为4组:分别为正常对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+THEM4质粒组(DM+THEM4)、糖尿病+空质粒组(DM+V).后3组腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发糖尿病小鼠模型,质粒注射组小鼠在成模4周后,分别给予尾静脉快速注射pYr-ads-4-THEM4质粒或pYr-adshuttle-4质粒(1 mg·kg-1).此后每隔7 d注射1次,共注射4次,之后处死小鼠并收集保存标本,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达;免疫组化检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)及Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)蛋白表达和定位.结果 DM小鼠肾脏THEM4 mRNA和蛋白均呈低表达,而phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达明显增强,并出现ECM沉积.过表达的THEM4能够逆转DM小鼠肾脏phos-pho-Akt(Ser 473)蛋白活化,并下调 α-SMA、TGF-β1的表达,减轻DM小鼠肾脏ECM的沉积,降低小鼠尿蛋白水平.结论 过表达THEM4能够减轻DM小鼠肾脏ECM的沉积,可能是通过抑制phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现的.

目的 探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)在高糖刺激的人胚肾上皮细胞(human embryo kidney epithelial cells,HKC)内的表达以及与胶原分泌的关系.方法 体外培养HKC,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后,收集细胞.提取RNA,Real-time PCR检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、转化生长因子β1 (transforming growth factor ββ,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况.结果 ①高糖培养HKC内THEM4表达明显降低,伴随phospho-Akt (Ser 473)、TGF-β1和α-SMA表达上调;THEM4与TGF-β1和αSMA表达呈负相关(分别为:y=-5.100 9x+ 1.178,R2=0.971 1;y=-3.803 3x+1.408,R2=0.893 9).②高糖可刺激HKC分泌Col Ⅰ、ColⅢ.结论 高糖诱导的HKC胶原的分泌可能是通过抑制THEM4表达,上调phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达而实现的.

目的 探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4, THEM4)/Akt在糖尿病小鼠肾脏中的表达以及与细胞外基质沉积的关系.方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,饲养8周后处死小鼠,应用 Western blot、免疫组化及 RT-PCR技术检测糖尿病小鼠肾脏中 THEM4/Akt、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA、Col Ⅲ、 FN蛋白及THEM4 mRNA的表达.结果 与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠肾脏中THEM4蛋白低表达,相对于对照组下降了37.7％;同时伴随phospho-Akt(Ser 473) 、TGF-β1、α-SMA、Col Ⅲ及FN蛋白表达升高,较对照组分别上调了3.66、1.29、2.33、1.99及2.82倍;糖尿病小鼠肾小管间质可见细胞外基质沉积.结论 糖尿病小鼠肾小管间质细胞外基质沉积可能是由于 THEM4的低表达进而激活Akt,上调TGF-β1和α-SMA蛋白的表达而实现的.

目的 观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白分泌的影响.方法 体外培养小鼠系膜细胞,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后收集细胞.提取RNA,RT-PCR技术检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot法检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、TGF-βI、α-SMA的表达;ELISA法检测细胞上清液Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的分泌情况.为进一步检测过表达THEM4对高糖诱导的细胞外基质沉积的影响及可能机制,将常规培养的系膜细胞随机分为正常对照组(5.5mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、高糖+pYr-ads-4-THEM4质粒转染组(高糖+THEM4组)、高糖+pYr-adshuttle-4空质粒对照组(高糖+V组).后3组经高糖刺激48 h后终止培养并进行上述检测.结果 随着高糖刺激时间的延长,小鼠系膜细胞THEM4表达呈下降趋势,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、oα-SMA的表达增强,伴随细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌增加;过表达THEM4能逆转高糖刺激所导致小鼠系膜细胞Akt蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1的表达,抑制细胞外基质蛋白(包括ColⅣ、FN)的分泌.结论 过表达THEM4能降低高糖诱导的小鼠系膜细胞细胞外基质蛋白的分泌,可能是通过抑制Akt蛋白的活化,下调αα-SMA、TGF-β1表达而实现.

目的:探讨微小RNA-377(miR-377)对硫酯酶超家族成员4(THEM4)的靶向作用及对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)的影响.方法:将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常葡萄糖组(NG组:5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG 组:30 mmol/L葡萄糖)、HG+miR-NC 组(HG+转染 miR-NC)、HG+miR-377组(HG+转染 miR-377)、HHG+anti-miR-NC 组(HG+转染 anti-miR-NC)、HG+anti-miR-377组(HG+转染 anti-miR-377)、HG+miR-377+pcDNA3.1 组(HG+共转染 miR-377+pcDNA3.1)、HG+miR-377+pcDNA3.1-THEM4组(HG+共转染 miR-377+pcDNA3.1-THEM4)、HG+miR-377+si-NC 组(HG+共转染 miR-377+si-NC)和 HG+miR-377+si-THEM4组(HG+共转染 miR-377+si-THEM4).qPCR 检测 miR-377表达,Western blot检测Vimentin、E-cadherin、THEM4蛋白表达,生物信息学预测和双荧光素酶实验分析miR-377与THEM4的靶向关系.结果:与NG组相比,HG诱导的HK-2细胞中miR-377表达量、Vimentin蛋白表达量明显增加,E-cadherin蛋白水平显著降低(P＜0.05).与HG+miR-NC组相比,HG+miR-377组HK-2细胞的miR-377表达量、Vimentin蛋白表达量显著升高,E-cadherin蛋白水平显著降低(P＜0.05).与HG+anti-miR-NC组相比,HG+anti-miR-377组HK-2细胞中miR-377表达量、Vimentin蛋白水平显著降低(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P＜0.05).miR-377靶向调控THEM4表达.与 HG+miR-377+pcDNA3.1 组相比,HG+miR-377+pcDNA3.1-THEM4组HK-2细胞中THEM4、E-cadherin蛋白水平明显升高,Vimentin蛋白表达量显著降低(P＜0.05).与 HG+miR-377+si-NC 组相比,HG+miR-377+si-THEM4组 HK-2细胞的 THEM4、E-cadherin 蛋白表达量明显降低,Vimentin 蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论:miR-377通过靶向THEM4调控高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT.

目的:观察栀子-川芎药对对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7泡沫细胞DNA甲基化和转录组表达的作用.方法:细胞毒性试验(CCK-8)法检测不同浓度栀子-川芎冻干粉对RAW 264.7细胞的增殖抑制情况;以ox-LDL处理RAW 264.7细胞48 h形成泡沫细胞,将细胞分为栀子-川芎冻干粉组(80 mg/L ox-LDL、0.3 g/L栀子-川芎冻干粉干预)、模型组(80 mg/L ox-LDL处理)和空白对照组(未处理);气相、色谱质谱法(GC-MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测各组总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)以及炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)]的表达;采用DNA甲基化捕获测序(MC-seq)和转录组测序(RNA-seq)方法检测各组细胞全基因组DNA甲基化和转录组基因表达水平,使用DSS工具分析各组样本间的差异甲基化位点(DMS)和差异表达基因(DEGs),并利用生物信息学方法对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析.结果:CCK-8检测发现,栀子-川芎冻干粉对RAW264.7细胞具有一定的细胞毒效应;与空白对照组相比,模型组TC、FC水平以及炎性因子TNF-α、IL-6和ICAM-1的表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,栀子-川芎冻干粉组TC、FC水平以及TNF-α、IL-6、ICAM-1的表达明显降低(P<0.01).MC-Seq检测发现,在启动子区域,模型组与空白对照组相比,共有8421个DMSs,分别对应5061个低甲基化和3405个高甲基化基因位点.栀子-川芎冻干粉组与模型组比较,共有8395个DMSs,分别有4257个高甲基化基因位点和4138个低甲基化基因位点.RNA-seq检测方面,经两两比较取交集(栀子-川芎冻干粉组与模型组比较,模型组与空白对照组比较)显示栀子-川芎冻干粉共逆转了119个DEGs,其中下调39个,上调80个.对MC-Seq与RNA-seq数据进行联合分析发现,与模型组相比,栀子-川芎冻干粉组有29个低甲基化高表达基因,包括YAM1、硫酯酶超家族成员4(THEM4)、神经型一氧化氮合酶(NOS1)等;33个高甲化低表达基因,包括血小板源性生长因子受体α多肽(PDGFRα)、纤维连接蛋白1(FN1)及Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)等.KEGG富集分析显示上述基因涉及Focal adhesion、PI3K-Akt和AGE-RAGE等信号通路;GO富集分析显示涉及白细胞介素-1产生的调节和上皮细胞增殖的正向调节等生物学过程.结论:体外实验表明,栀子-川芎冻干粉具有明显的抗动脉粥样硬化效应,其机制可能与调控心血管相关基因的甲基化水平进而影响下游基因的表达有关.