目的:探讨复制因子C5（RFC5）在子宫颈癌中的表达及其对预后、免疫调控的影响和相关机制。方法:2023年5月从癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载280例子宫颈癌患者RFC5 mRNA表达数据及临床数据。比较子宫颈癌组织和癌旁正常组织中RFC5 mRNA表达水平差异，分析不同临床病理特征患者RFC5 mRNA表达水平；根据子宫颈癌组织RFC5 mRNA中位表达水平将280例患者分为高表达组和低表达组，采用Kaplan-Meier法对两组进行生存分析，比较采用log-rank检验；利用基因表达谱交互分析（GEPIA）2在线工具验证子宫颈癌RFC5基因表达情况及与预后的关系。采用单因素、多因素Cox比例风险模型分析TCGA数据库子宫颈癌患者总生存（OS）的影响因素。利用LinkedOmics数据库筛选子宫颈癌中RFC5相关的共同差异表达基因（DEG），基于DAVID数据库对RFC5相关DEG进行基因本体（GO）分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。基于肿瘤免疫评估资源（TIMER）数据库，通过Spearman法分析RFC5表达与子宫颈癌肿瘤浸润免疫细胞的关系；基于肿瘤免疫系统相互作用数据库（TISIDB）分析子宫颈癌RFC5表达与免疫调节因子的关系。基于人类蛋白图谱（HPA）数据库分析子宫颈癌组织中RFC5蛋白表达情况。基于GEPIA2在线工具分析RFC5在泛癌中的表达及其与OS的关系。结果:TCGA数据库中RFC5 mRNA在子宫颈癌组织（277例）中相对表达水平高于癌旁正常组织（3例），差异有统计学意义（ P<0.001）；不同年龄、病理类型、临床分期子宫颈癌患者间癌组织中RFC5 mRNA相对表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）；RFC5高表达组（139例）子宫颈癌患者OS优于RFC5低表达患者（138例），差异有统计学意义（ P=0.027）。GEPIA工具验证RFC5在子宫颈癌中的表达及其与OS的关系，得到相同结果。GO和KEGG富集分析显示，RFC5相关基因主要参与DNA复制、细胞周期、范可尼贫血、错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复等信号通路。多因素Cox回归分析显示，年龄≥65岁、临床分期Ⅳ期、RFC5表达低水平是子宫颈癌患者OS不良的独立危险因素（均 P<0.05）。TIMER数据库分析显示，RFC5的表达与肿瘤纯度呈正相关（ rho=0.198， P<0.001），而与B细胞（ rho=0.062， P=0.306）、CD8 + T细胞（ rho=0.168， P=0.005）、CD4 + T细胞（ rho=-0.049， P=0.418）、巨噬细胞（ rho=0.034， P=0.577）、中性粒细胞（ rho=0.169， P=0.005）、骨髓树突细胞（ rho=0.026， P=0.667）的浸润水平呈弱相关性或无相关性。对TISIDB数据分析显示，RFC5表达与免疫抑制因子和免疫刺激因子大多呈负相关性。HPA数据库分析显示，子宫颈癌组织RFC5蛋白的表达水平高于正常子宫颈组织。GEPIA在线工具分析显示，RFC5在多种恶性肿瘤中表达上调，RFC5高表达胸腺瘤患者OS优于其低表达患者，而RFC5高表达急性髓系白血病患者OS较其低表达患者差，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:RFC5在子宫颈癌组织中高表达，且其水平与子宫颈癌患者预后相关。RFC5过表达可能抑制子宫颈癌免疫调节因子的表达，可能是通过DNA复制、细胞周期、错配修复、碱基切除修复等相关通路调控子宫颈癌的发生与发展的。

目的:探讨程序性细胞死亡分子10（ PDCD10）表达下调介导胶质母细胞瘤（GBM）细胞系耐替莫唑胺（TMZ）治疗的机制。 方法:使用 PDCD10小干扰RNA或阴性序列小干扰RNA转染U87、LN229和T98g细胞系，分别应用300 μmol/L TMZ（处理转染后的T98g细胞系）及150 μmol/L TMZ（处理转染后的U87和LN229细胞系）以构建TMZ耐药细胞系，即 PDCD10小干扰RNA转染及TMZ耐药的U87细胞系（shPDCD10-U87-RG）、阴性序列小干扰RNA转染及TMZ耐药的U87细胞系（EV-U87-RG）、shPDCD10-T98g-RG、EV-T98g-RG、shPDCD10-LN229-RG、EV-LN229-RG。采用流式细胞术和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检验TMZ耐药细胞系的转染效率和 PDCD10表达水平，通过MTT实验和克隆形成实验验证TMZ耐药细胞系的耐药能力。进一步通过生物信息学分析检验 PDCD10与碱基错配修复系统中关键基因 MSH6、 PMS2的相关性，同时通过检测耐药细胞的细胞周期和神经球形成能力来研究耐药细胞系的耐药机制。 结果:（1）qRT-PCR检测结果显示，与EV-U87-RG比较，shPDCD10-U87-RG细胞 PDCD10表达下调了（32.85±1.14）%，差异有统计学意义（ t=2.925， P=0.049）；与EV-T98g-RG比较，shPDCD10-T98g-RG细胞 PDCD10表达下调了（57.17±1.81）%，差异有统计学意义（ t=3.179， P=0.043）；与EV-LN229-RG比较，shPDCD10-LN229-RG细胞 PDCD10表达下调了（33.68±1.34）%，差异有统计学意义（ t=3.085， P=0.045）。（2）MTT实验结果显示，与EV-U87-RG比较，shPDCD10-U87-RG细胞活力明显增强，差异有统计学意义（ P<0.05）；与EV-T98g-RG比较，shPDCD10-T98g-RG细胞活力明显增强，差异有统计学意义（ P<0.05）。同一种细胞之间，与TMZ处理72 h后比较，TMZ洗出后3 d细胞活力亦显著提高，差异有统计学意义（ P<0.05）。克隆形成实验显示 PDCD10表达下调的细胞系成瘤能力更高。（3）与EV-U87-RG细胞、EV-T98g-RG细胞比较， PDCD10表达下调的细胞（shPDCD10-U87-RG细胞、shPDCD10-T98g-RG细胞）逃逸TMZ诱导的细胞周期G2/M阻滞，导致出现耐TMZ治疗。（4）生物信息学分析发现 PDCD10的表达与 MSH6（ r=0.262， P<0.001）和 PMS2（ r=0.327， P<0.001）的表达呈正相关关系；qRT-PCR实验发现 PDCD10下调引起 MSH6和 PMS2表达下调，破坏碱基错配修复系统。（5）与EV-U87细胞比较，shPDCD10-U87细胞形成的神经球数量明显增多，差异有统计学意义（ P<0.05）；与EV-U87-RG细胞比较，shPDCD10-U87-RG细胞形成的神经球数量明显增多，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:PDCD10通过阻滞细胞周期进程、破坏碱基错配修复系统及增加细胞干性影响GBM对TMZ的治疗敏感性。

目的:探究胃肠神经内分泌肿瘤（GI-NENs）原发灶与相应瘤旁组织及肝转移灶中的蛋白表达差异。方法:选取2015年7月至2019年4月于中国医学科学院肿瘤医院手术治疗的9例GI-NENs伴肝脏转移患者的原发灶、肝转移灶组织及相应瘤旁组织，采用数据非依赖性采集（DIA）技术检测其蛋白表达，以 P＜0.05且|log 2FC|＞0.5（FC为差异倍数）作为判定标准，明确原发灶与相应瘤旁组织、原发灶与肝转移灶、不同分化程度原发灶、不同分化程度肝转移灶的差异表达蛋白。对差异表达蛋白进行火山图分析、聚类分析、基因本体（GO）功能分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。 结果:相对于瘤旁组织，胃NENs原发灶中有85种蛋白表达下调，42种蛋白表达上调，差异表达蛋白主要富集在三磷酸鸟苷酶活性调控和脱氧核糖核苷单磷酸盐分解代谢相关的生物过程、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素和泛酸盐与CoA生物合成信号通路。肠NENs原发灶中有114种蛋白表达下调，155种蛋白表达上调，差异表达蛋白主要富集在谷胱甘肽代谢和硫化合物代谢相关的生物过程、收集导管酸分泌和牛磺酸、次牛磺酸代谢信号通路。相对于神经内分泌癌（NECs）原发灶，G1～2分化原发灶中有168种蛋白表达下调，278种蛋白上调，差异表达蛋白显著富集在DNA代谢和DNA复制的生物学过程，以及复制和错配修复等通路。相对于NECs转移灶，G1～2分化转移灶中有95种蛋白表达下调，97种蛋白表达上调，差异表达蛋白显著富集到转录共激活子的活性和催化活性功能、碱基切除修复和蛋白外排通路。相对于G1分化的原发灶，G1分化的转移灶中有530种蛋白表达下调，211种蛋白表达上调。相对于G2分化的原发灶，G2分化的转移灶中有53种蛋白表达下调，96种蛋白表达上调。相对于NECs原发灶，NECs转移灶中有109种蛋白表达下调，92种蛋白表达上调。G1和G2分化的GI-NENs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路中有多条相似，而GI-NECs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路中只有1条与GI-NENs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路相同，即药物代谢信号通路。G1分化的原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞质（20.26%）、线粒体（18.67%）和细胞核（15.48%）。G2分化的原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞质（20.24%）、细胞核（18.25%）和细胞膜（15.08%）。NECs原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞核（23.78%）、细胞质（22.7%）和细胞膜（11.35%）。结论:不同部位和分化程度的GI-NENs原发灶、瘤旁组织及转移灶中蛋白表达差异明显。

面对各种因素导致的DNA损伤，细胞有一套应答修复机制。其中细胞周期阻滞在DNA损伤应答修复中扮演了重要角色，为修复受损DNA创造了条件。关于细胞周期调控的研究集中于细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）与细胞周期检查点等方面。在DNA损伤修复过程中，损伤位点募集的磷脂酰肌醇-3-激酶样激酶（PIKKs）可引起细胞周期检查点相关蛋白的激活，导致细胞周期阻滞。在碱基切除修复、核苷酸切除修复、错配修复、DNA双链断裂修复等常见的DNA损伤修复途径中，招募的损伤修复相关蛋白在细胞周期调控中也起到一定的作用。因此综述了主要DNA损伤修复形式与细胞周期阻滞之间的关系及研究进展。

DNA损伤引发细胞启动一系列DNA损伤应答(DNA damage response,DDR),包括DNA损伤修复、细胞周期检查点激活、细胞周期阻滞、各种细胞内信号转导途径的活化和细胞凋亡等.DNA损伤修复(DNA damage repair)是细胞维持基因组稳定性的重要机制,于2015年获得诺贝尔化学奖.DNA损伤修复途径主要包括:碱基切除修复(base-excision repair,BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)、错配修复(mismatch repair,MMR)、同源重组(homologous recombi-nation,HR)和非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)等,分别在DNA单链断裂(sin-gle-strand break,SSB)或双链断裂(double-strand break,DSB)等损伤修复中发挥重要作用.DNA损伤修复缺陷与肿瘤发生发展密切相关,同时也是肿瘤治疗的重要靶点.DNA损伤修复通路的多聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)与乳腺癌易感基因BRCA1/2等存在合成致死(synthetic lethality)作用,使PARP抑制剂(PARP inhibitor,PARPi)成为第一个也是目前唯一上市的肿瘤治疗合成致死靶药.PARPi在卵巢癌及多种实体瘤治疗中疗效良好,使DNA损伤修复及相关DDR通路的合成致死靶药研发成为热点,其他在研靶点主要包括:共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia-mutated protein,ATM)、共济失调毛细血管扩张与 RAD3 相关蛋白(ataxia telangiectasia and Rad3 related protein,ATR)、DNA 依赖性蛋白质激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、细胞周期检测点激酶 1(checkpoint kinase1,CHK1)、细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)、阻止有丝分裂的蛋白质激酶WEE1等.PARPi与其他DDR靶药、抗血管生成药物及免疫检查点抑制剂的联用,有可能成为克服PARPi耐药、提高疗效的有效手段和发展前景.本文针对DNA损伤修复及相关DDR通路的关键分子和潜在肿瘤治疗靶点进行综述,阐述了 DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及在卵巢癌的应用和前景,为基础研究及临床应用提供指导.

DNA损伤修复是指纠正DNA两条单链间错配的碱基、清除DNA链上受损的碱基、恢复DNA正常结构的过程.细胞内存在多种机制来应对不同类型的DNA损伤,同源重组修复便是重要的修复机制之一.在同源重组修复过程中,RNA的合成发挥着重要作用,而RNA甲基化修饰作为一个普遍存在于真核细胞中的调控机制,也参与了这一复杂的修复过程.肿瘤发生过程中普遍存在RNA甲基化修饰失调导致的DNA损伤累积,从而引起肿瘤的恶性转化.此外,RNA甲基化修饰还可以影响放化疗后细胞对DNA损伤的修复能力,使肿瘤细胞的放化疗敏感性发生改变,进而影响治疗效果.本文综述了目前已知的不同类型RNA甲基化修饰在DNA损伤修复过程中的作用,并进一步分析RNA甲基化修饰介导的DNA损伤修复异常在肿瘤临床诊断、预后判断和作为治疗靶点等方面的应用前景.

机体在体内因素如DNA碱基错配、自身不稳定性、机体代谢产生活性氧自由基(ROS)等,体外因素如辐射、化学毒物、药物、病毒和霉菌等作用下,可以造成DNA损伤. DNA损伤有碱基损伤、错配、DNA单链或双链断裂、嘧啶二聚体形成等多种类型. 其中,DNA双链断裂(DSB)是一种非常严重的损伤类型.

目的 分析肝细胞癌(HCC)复发进程中DNA修复调节的作用及机制.方法 串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学方法分析HCC 2年内复发和5年预后良好的肝癌组织样本,分析富集在DNA复制、错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复4条通路的蛋白表达差异,分析在HCC复发进程中起主要作用的调控通路及靶点,预测可能的调控机制.计量资料2组间比较采用成组t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 真核生物复制复合体通路MCM2(P=0.018)、MCM3(P=0.047)、MCM4(P=0.014)、MCM5(P=0.008)、MCM6(P=0.006)、MCM7(P=0.007)、PCNA(P=0.019)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、LIG1(P=0.042)蛋白表达均显著降低;核苷酸切除修复通路中PCNA(P=0.019)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、LIG1(P=0.042)共4个蛋白表达水平均显著减少;碱基切除修复通路PCNA(P=0.019)和LIG1(P=0.042)在HCC复发组中均显著降低;错配修复富集通路中MSH2(P=0.026)、MSH6(P=0.006)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、PCNA(P=0.019)、LIG1(P=0.042)共6个蛋白在肝癌复发组织中均显著减少.差异蛋白涉及MCM复合体、DNA聚合酶复合体ε、连接酶LIG1、长补丁碱基剪切修复复合体(long patch BER)、DNA错配修复蛋白复合体的重要组分.对DNA修复调节的重要差异蛋白进行临床样本验证分析,结果表明复发组中除MCM6表现出下降趋势外,MCM5(P=0.008)、MCM7(P=0.007)、RCF4(P=0.002)、RCF5(P<0.001)和MSH6(P=0.006)蛋白相对表达量均显著降低.结论 HCC复发过程中,DNA修复进程中多个复合体蛋白组分存在显著减少或缺失.

2023年4月24日,上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心周斌兵课题组在Leukemia期刊上发表了最新研究成果 Targeting DNA polymerase β elicits synthetic lethality with mismatch repair deficiency in acute lymphoblastic leukemia(靶向DNA聚合酶β在错配修复缺陷型急性淋巴细胞白血病中引起合成致死效应).该研究聚焦DNA重要修复通路之碱基切除修复(base excision repair,BER),探究其在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞耐药存活中的作用,揭示了其在巯嘌吟引起的基因组损伤修复中所发挥的重要作用,并提出了 POLB抑制剂联合巯嘌呤用于ALL治疗的潜在策略.该研究为进一步优化儿童ALL疏嘌呤临床精准用药方案奠定了理论基础.

目的 探讨碱基错配修复(MMR)缺陷子宫内膜癌的临床病理特征与临床意义.方法 收集天津市中心妇产科医院常规开腹手术者中≤50岁内膜癌患者共108例,进行4种碱基错配修复(MMR)蛋白(MLH1、MSH2、MSH6及PMS2)的免疫组化检测,MMR蛋白表达完全缺失提示MMR基因缺陷,依据免疫组化结果 进行分组.结果108例内膜癌中,33.3%(36例)至少1种MMR表达缺失.重点对36例MMR蛋白表达缺失患者行临床病理特征分析并与对照组比较.31%伴有深肌层侵犯,25%可见肿瘤细胞周围有密集的淋巴细胞浸润.35%的内膜癌患者合并黏液分化及透明细胞分化等多种分化方式,14%伴有异质性分化.20%患者同时合并卵巢癌.背景内膜多为增生期内膜.倾向深肌层侵犯、多样性分化与异质性分化、肿瘤周围淋巴细胞浸润、同时合并卵巢癌及背景内膜的特征与对照组相比差异有统计学意义.结论 MMR缺陷子宫内膜癌具有区别于传统Ⅰ型及Ⅱ型内膜癌的特征.