目的 构建稳定表达Cas9蛋白的工具细胞,并利用短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)编辑技术改造1型单纯疱疹病毒(HSV-1),获得ICP34.5基因敲除的oHSV-1/Ecfp重组病毒.方法 利用慢病毒包装体系,将包装Cas9表达质粒的病毒感染HEK293T细胞,然后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达Cas9蛋白的293T-Cas9细胞株,通过聚合酶链式反应(PCR)及蛋白质免疫印迹技术检测Cas9基因及蛋白表达情况;利用分子克隆技术构建HSV-1病毒ICP34.5基因敲除的基因编辑质粒(pU6-Ecfp);pU6-Ecfp转染293T-Cas9细胞后感染野生型HSV-1病毒,在胞内通过CRISPR/Cas9技术敲除HSV-1病毒中ICP34.5基因,再利用增强型青色荧光(Ecfp)示踪及极限稀释法进行病毒富集纯化,通过PCR法进行oHSV-1/Ecfp病毒鉴定.结果 PCR扩增、核酸电泳及蛋白质免疫印迹技术结果显示,细胞株293T-Cas9高转录Cas9基因及高表达Cas9蛋白;通过PCR鉴定及荧光示踪结果显示,基因编辑质粒pU6-Ecfp构建成功;Ecfp荧光示踪、PCR扩增及核酸电泳结果显示,Ecfp成功插入ICP34.5基因敲除位点,获得oHSV-1/Ecfp重组病毒.结论 稳定表达Cas9蛋白的293T-Cas9细胞可作为CRISPR/Cas9基因编辑的工具细胞,构建的HSV-1/Ecfp病毒实现了ICP34.5基因敲除及Ecfp示踪蛋白的敲入.

目的:探讨可调式膝关节支具对脑卒中后膝过伸患者的即时疗效。方法:选取浙江医院康复治疗中心自2019年6月至2019年12月收治的脑卒中后膝过伸患者30例，在佩戴可调式膝关节支具前后采用Pro-Kin 254平衡测试系统评估患者双足稳定性和稳定极限，采用Berg平衡量表(BBS)评估患者的平衡功能，采用"起立-行走"计时测试(TUGT)和10 m步行测试(10MWT)评估患者的步行功能。结果:与佩戴前比较，佩戴可调式膝关节支具后患者的运动轨迹周长、运动轨迹面积、运动轨迹前后方向标准差、运动轨迹左右方向标准差均明显降低，稳定极限明显增高，差异均有统计学意义( P<0.05)。与佩戴前比较，佩戴可调式膝关节支具后患者的BBS评分明显增加、TUGT和10MWT所用时间明显缩短，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:可调式膝关节支具可以即时提高脑卒中后膝关节过伸患者的双足稳定性和稳定极限、平衡功能和步行功能，值得在临床上推广应用。

目的:探讨肌内效贴骨盆干预对脑卒中后骨盆前倾患者的骨盆倾斜角度、步行能力和平衡的影响。方法:将脑卒中后骨盆前倾患者26例按随机数字表法分为观察组( n＝13)和对照组( n＝13)，2组患者均接受常规康复治疗，观察组在此基础上增加骨盆处肌内效贴干预，对照组则进行骨盆处肌内效贴安慰治疗。2组受试者均在贴扎前(干预前)和贴扎后即刻(干预后)接受骨盆倾斜角度、10 m步行时间、步态分析(干预前、后步态时空参数的差值)和平衡能力(干预前、后稳定极限的差值)的评估。于贴扎前(干预前)和贴扎后即刻(干预后)对2组患者进行骨盆倾斜角度评定、10 m步行时间测试、步态分析和平衡能力的评估。 结果:干预后，2组双侧骨盆倾斜角度与组内干预前比较，差异均有统计学意义( P<0.05)，且观察组干预后双侧骨盆倾斜角度与对照组干预同侧比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。干预后，观察组10 m步行时间为(19.55±6.51)s，与组内干预前和对照组干预后比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。观察组步态参数中的步速、步频、步长、步幅干预前、后的差值与对照组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。观察组稳定极限参数中的方向控制和稳定极限总分干预前、后的差值与对照组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:肌内效贴骨盆干预可即时显著地纠正脑卒中后骨盆前倾患者的骨盆角度，增加其步行速度，改善其步行和平衡功能。

全直肠系膜切除术是直肠癌的标准手术方式，以此为基础的经括约肌间切除术和适形保肛术已将极低位直肠癌保肛手术推向极限。然而无论哪种手术方式，患者仍需面临造口、肛门功能不佳等问题，严重影响生命质量。对在新辅助放化疗后达到临床完全缓解的患者采用“等待观察”策略为直肠癌的治疗开启新思路，使直肠癌的非手术治疗成为可能。全程新辅助治疗使“等待观察”策略的应用范围进一步扩大，并被列入指南。而免疫治疗的兴起改变了肿瘤的治疗模式，已成为错配修复缺陷或微卫星高度不稳定晚期结直肠癌患者的一线治疗方案。增强错配修复正常或微卫星稳定的人群新辅助放疗联合免疫治疗的效果，使更多低位直肠癌患者有机会达到临床完全缓解从而进入等待观察，达到保器官保功能目的成为研究热点。笔者深入探讨低位直肠癌保肛手术现状和免疫治疗时代的保肛策略，以期为低位直肠癌的治疗提供思路。

目的:观察阈值压力负荷吸气肌训练对帕金森病患者平衡功能的影响。方法:采用随机数字表法将帕金森病患者48例分为观察组和对照组，每组24例。对照组给予常规神经内科药物治疗和常规康复训练，观察组在此基础上使用阈值压力负荷训练器进行吸气肌训练。阈值压力负荷吸气肌训练每周训练5 d，连续训练8周。于治疗前和治疗8周后(治疗后)分别对2组患者进行吸气肌功能[包括超声评估膈肌的活动度和厚度，以及最大吸气压(MIP)]、平衡功能[包括躯干损伤量表(TIS)评分、Berg平衡量表(BBS)评分、姿势稳定极限(LOS)和计时起立-行走测试(TUGT)]和步行功能[包括10米步行测试(10MWT)和动态步态指数(DGI)]评定。结果:治疗后，2组患者的膈肌活动度、厚度和MIP均较组内治疗前均明显改善，差异均有统计学意义( P<0.05)。观察组治疗后的膈肌活动度、吸气末厚度和MIP均显著优于对照组治疗后，差异均有统计学意义( P<0.05)。治疗后，2组患者的TIS评分、BBS评分、LOS和TUGT较组内治疗前均显著改善，差异均有统计学意义( P<0.05)。观察组治疗后的TIS评分、BBS评分、LOS和TUGT均显著优于对照组治疗后，差异均有统计学意义( P<0.05)。治疗后，2组患者的10MWT和DGI评分较组内治疗前均显著改善，差异均有统计学意义( P<0.05)。观察组治疗后的10MWT和DGI评分均显著优于对照组治疗后，差异均有统计学意义( P<0.05)。相关性分析显示，观察组治疗前、后的MIP差值与其TUGT差值( r＝－0.651)、10MWT差值( r＝－0.501)均呈显著负相关( P<0.01)。 结论:阈值压力负荷吸气肌训练联合常规康复治疗可显著改善帕金森病患者的吸气肌力量、膈肌活动度和厚度，从而进一步地改善患者的平衡功能和步行能力。

目的:探讨子宫内膜癌不同技术方法分子分型的差异以探索符合国情的分子分型方案。方法:收集复旦大学附属妇产科医院病理科2021年4月至2022年3月诊断的子宫内膜癌254例，采用二代测序和免疫组织化学检测综合方案进行分子分型，并以POLE和TP53突变频率≥20%设定为Sanger测序检测极限值模拟其结果，比较不同组合方案下分子分型结果。结果:254例子宫内膜癌患者，年龄24~89岁，平均年龄51岁。包含有POLE的第9~14号外显子、TP53全外显子和微卫星不稳定（MSI）检测的二代测序panel为较好的独立解决方案，结合MSI片段分析检测和常规免疫组织化学初筛为最佳的综合解决方案，和癌症基因组图谱（TCGA）数据及近期文献比对有最佳符合率，POLE超突变型、错配修复缺陷型、TP53突变型及非特异分子特征型占比分别为11.4%（29/254）、31.5%（80/254）、22.4%（57/254）和34.6%（88/254）；如改用Sanger测序进行POLE和TP53突变检测，则分别为9.1%（23/254）、31.5%（80/254）、12.9%（33/254）和46.6%（118/254），大幅度增加了非特异分子特征型的数量；如采用Sanger测序检测POLE，其余分型均用免疫组织化学检测替代，则分别为9.1%（23/254）、42.2%（92/218）、13.8%（35/254）和40.9%（105/254），将增加错配修复缺陷组的假阳性判断。结论:包含MSI检测的中小型二代测序panel为分子分型的较好解决方案，Sanger测序对POLE突变检测目前可满足基本要求，但对TP53突变检测灵敏度不够，和p53免疫组织化学判断TP53突变效率相当。进一步优化含MSI检测和POLE 、TP53全外显子的中小型二代测序方案是未来符合国情的最优选择。

盂肱关节是人体中活动范围最大的关节，球窝结构特点使得关节易出现不稳定。而肩胛盂的形态(肩胛盂宽度、关节面凹面深度、肩胛盂扭转角和倾斜角)，以及关节周围的韧带和肌腱均对维持关节稳定性起着重要作用。本文详细阐述了肩胛盂及周围软组织如何通过关节内负压和凹面-加压效应两种机制，维持肩关节在非极限活动范围内的稳定性。并根据数学原理，总结关节内负压和关节稳定率的计算公式，使得这两个概念更易于临床应用。关节稳定率反映了凹面-加压效应的大小，根据标准CT检查即可计算盂肱关节上下方向或前后方向的关节稳定率，指导临床实践。

该研究通过研发的可穿戴式平衡诊疗系统测试，初步探讨可反映前庭性眩晕患者异常平衡功能状态的评估指标。该研究为横断面研究，选取2022年7月至2023年5月复旦大学附属眼耳鼻喉科医院门诊诊断为非急性期前庭性眩晕的30例患者为眩晕组，男13例，女17例，年龄（45.7±13.9）岁；同期选取20名健康人为健康对照组，男8名，女12名，年龄（43.6±8.0）岁。采用由复旦大学附属眼耳鼻喉科医院牵头研发的可穿戴式平衡诊疗系统测试并分析两组静态平衡和稳定极限试验（LOS）结果。在静态平衡测试中，眩晕组睁眼有软垫/睁眼无软垫的比值小于健康对照组［1.20%（0.92%，1.53%）比1.49%（1.22%，1.81%）， P=0.008］。在LOS中，眩晕组8个方向的方向控制力，以及正前、正后、右前、右后的最大偏移，正后、右后、左后的端点行程均小于健康对照组，左后方向的反应时间长于健康对照组（均 P<0.05）。本研究结果提示LOS的方向控制力、最大偏移、端点行程可考虑作为动态平衡功能评估的重要参考指标。

目的:探讨谷丙转氨酶（ALT）轨迹与新发代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）的相关性，为MAFLD的防治提供科学依据。方法:以河南体检人群队列研究中符合入选标准的3 553例观察对象组成研究队列，依据观察对象2017-2019年健康体检的ALT水平，采用R LCTMtools程序确定3个不同的ALT轨迹组，分别为低稳定组、中稳定组、高稳定组，随访各组人群2020年健康体检时MAFLD的发病情况，用乘积极限法计算各组累积发病率，用Cox比例风险回归模型分析不同ALT轨迹与新发MAFLD的相关性。结果:MAFLD的发病率随着ALT轨迹的升高而不断增加，低稳定组、中稳定组、高稳定组分别为6.93%、15.42%、19.05%，差异有统计学意义（ P<0.001）。Cox比例风险回归模型调整性别、腰围、血压、BMI、血糖、血脂等多种混杂因素后，ALT中稳定组、高稳定组MAFLD发病风险仍为ALT低稳定组的1.422倍（95% CI：1.115~1.813）与1.483倍（95% CI：1.040~2.114）（ P<0.05）。 结论:发生MAFLD的风险随着长期正常范围内ALT水平的升高而增加，应对长期持续正常高值的MAFLD及时干预，延缓MAFLD疾病的进展，以实现早期预防MAFLD的目的。

目的:探讨扩张型心肌病(DCM)并完全性左束支阻滞(CLBBB)患儿左心室射血分数(LVEF)的中短期变化及相关心电图指标的预测价值。方法:回顾性分析2011年11月至2020年8月青岛大学附属妇女儿童医院心脏中心和首都医科大学附属北京安贞医院临床确诊为DCM的患儿，根据是否有CLBBB将DCM患儿分为合并CLBBB组(CLBBB组)和未合并CLBBB组(non-CLBBB组)。所有患儿定期行超声心动图和心电图检查，根据随访1~5年的数据，比较两组患儿LVEF的中短期变化特点，并应用COX比例风险模型及Kaplan-Meier乘积极限法探索心电图相关指标预测DCM合并CLBBB患儿LVEF变化的价值。结果:94例DCM患儿纳入本研究，其中CLBBB组35例，non-CLBBB组59例。CLBBB组和non-CLBBB组的LVEF基线值比较差异无统计学意义( P>0.05)，但2组患儿的QRS时限、纠正的QT间期(QTc)、V 5导联R波峰值时间(T V5R)及QRS波切迹或顿挫异常比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。DCM患儿的LVEF在发病1年内呈上升趋势，左心室舒张末期内径(LVEDd) Z值呈下降趋势，并于1~5年内趋于稳定；且CLBBB组患儿的LVEDd Z值显著高于non-CLBBB组，差异有统计学意义( P<0.05)。CLBBB组患儿的LVEF均值围绕50%小幅度波动，而non-CLBBB组患儿的LVEF均值于60%上下浮动，CLBBB组患儿的LVEF均值显著低于non-CLBBB组，差异有统计学意义( P<0.05)。多变量COX回归分析显示患儿QRS时限( HR＝0.979；95% CI：0.960~0.999， P<0.05)和QTc( HR＝0.988；95% CI：0.979~0.998， P<0.05)是DCM患儿LVEF恢复正常的独立预测因子。Kaplan-Meier乘积极限法显示不同水平QRS时限和QTc的DCM患儿LVEF正常化率的差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:DCM并CLBBB患儿LVEF经规范治疗后短期内上升，后趋于稳定；CLBBB影响DCM患儿左心室功能的恢复；心电图指标QRS时限和QTc是预测DCM患儿LVEF恢复正常的独立预测因子。