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转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA通过调节核糖核酸结合蛋白2/胚胎致死性异常视觉样蛋白1促进前列腺癌发生发展
编辑人员丨5天前
目的:探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法:利用生物信息学方法,寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点,以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA,miR)-29b,蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后,利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown,检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1,检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达,以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果:分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点,ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点,并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现,circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02, F=2 832.200, P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后,RT-qPCR检测circTGFBR2的表达,可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02, F=63 426.15, P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组,应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01, F=1268.314, P<0.01),并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25, F=4.852, P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02, F=1663.667, P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验,多个蛋白质能与circTGFBR2结合,并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较,敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时,间质标志基因Vimentin表达高于对照组,而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组,当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02, F=614.919, P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时,PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱,细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组,Vimentin及ZMYM1表达高于对照组,Transwell检测细胞迁移高于对照组,而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时,上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1 319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01, F=1 108.46, P<0.01;ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02, F=2 023.794, P<0.01)。 结论:circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。
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编辑人员丨5天前
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鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1基因在甲状腺乳头状癌诊断和治疗中的应用
编辑人员丨5天前
甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤,其中甲状腺乳头状癌(PTC)的发病率最高,约占甲状腺癌的85%~90%。有关PTC的肿瘤标志物很多,如鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)、端粒酶逆转录酶、Ki-67、微小RNA146b、PDLIM5等,其中BRAF基因在PTC的发生、发展和预后中发挥重要的作用。文章总结了BRAF基因及其信号通路、BRAF基因在PTC发生发展和预后中的作用、BRAF基因与PTC临床病理特征的相关性、BRAF基因在PTC诊断和治疗中的研究进展等,以供读者参考。
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编辑人员丨5天前
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circ_0000263通过miR-338-3p/TERT抑制端粒酶蛋白活性影响HeLa细胞生物学功能提高放射敏感性
编辑人员丨5天前
目的:探讨circ_0000263对HeLa细胞活性、凋亡、端粒酶活性以及放射敏感性的影响及其分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ_0000263和miR-338-3p mRNA表达水平,细胞克隆形成实验检测细胞存活情况,细胞计数试剂盒8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、Cleaved-casp3、端粒酶逆转录酶(TERT)的表达,双荧光素酶实验检测circ_0000263和miR-338-3p、miR-338-3p和TERT的靶向关系,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附试验检测端粒酶活性。结果:Hela细胞中circ_0000263呈高表达,miR-338-3p呈低表达,TERT呈高表达,射线辐射的HeLa细胞中circ_0000263也呈高表达(均 P<0.05)。敲减circ_0000263可抑制HeLa细胞克隆形成和细胞增殖能力,增强HeLa细胞的辐射敏感性和细胞凋亡。敲减circ_0000263可降低HeLa细胞中PCNA蛋白表达水平,增强HeLa细胞中Cleaved-casp3蛋白表达水平( P<0.05)。si-circ_0000263(si-circ)组细胞凋亡率为(13.19±1.12)%,高于si-NC组[(6.80±0.62)%, P<0.05];si-circ+4 Gy组细胞凋亡率为(24.82±1.57)%,高于si-NC+4 Gy组[(17.00±0.96)%, P<0.05]。circ_0000263靶向调控miR-338-3p,miR-338-3p靶向调控TERT。miR-338-3p在Hela细胞中呈低表达,敲减circ_0000263可提高HeLa细胞中miR-338-3p表达水平。circ_0000263通过miR-338-3p调控TERT表达,抑制端粒酶活性。miR-338-3p/TERT均能恢复抑制circ_0000263对Hela细胞放射敏感性的影响。si-circ+anti-NC组细胞凋亡率为(27.37±0.89)%,高于si-circ+anti-miR-338-3p组[(18.22±1.18)%, P<0.05];si-circ+vector组细胞凋亡率为(27.55±0.48)%,高于si-circ+TERT组[(20.10±0.68)%, P<0.05]。经4 Gy射线照射72 h后,si-circ+anti-NC组细胞存活分数(0.41±0.02)低于si-circ+anti-miR-338-3p组(0.66±0.03, P<0.05);si-circ+vector组细胞存活分数(0.42±0.05)低于si-circ+TERT组(0.70±0.03, P<0.05)。 结论:抑制circ_0000263的表达通过调控miR-338-3p/TERT抑制Hela细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制端粒酶活性,提高癌细胞的放射敏感性。
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编辑人员丨5天前
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端粒酶影响胃癌生物学特征的机制研究进展
编辑人员丨5天前
胃癌是威胁人类健康的重大疾病之一,发病率较高,早期诊断率低。治疗过程中遇到许多瓶颈。提高早期诊断率并寻找新的治疗靶点是当前亟待解决的难题。端粒酶在正常组织中检测不到,但在大多数癌症中表现出较高的特异性和敏感性,且与预后有明确相关性,有可能作为血清肿瘤标志物和预后指标。人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因多态性可以调节人群对胃癌的易感性,并通过其靶基因影响胃癌发生发展及增殖和凋亡过程。抵抗素、visfatin、G-四链体、胡椒胺等物质则可以通过调节端粒酶表达来影响胃癌的发生发展。目前关于hTERT参与调节肿瘤侵袭和转移的机制尚不清楚,阐明其作用机制具有重要意义。本文将对这一机制近年来的研究进展进行综述。
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编辑人员丨5天前
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端粒酶逆转录酶在急性坏死性胰腺炎大鼠中性粒细胞凋亡中的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERE)对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠中性粒细胞凋亡的影响。方法:24只SD大鼠按数字表法随机分为正常对照组、ANP 3 h组、ANP 6 h组、TERT抑制剂BIBR1532干预组(BIBR1532组),每组6只。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠构建ANP模型,分别在造模后3、6 h收集和分离大鼠外周血中性粒细胞BIBR1532组在造模前腹腔注射2 mg/kg BIBR1532,在造模后3 h处死大鼠,收集外周血中性粒细胞。应用荧光定量PCR法检测中性粒细胞TERT mRNA表达量;蛋白质免疫印迹法检测中性粒细胞TERT蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bax表达量;流式细胞术检测中性粒细胞的凋亡;ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-6水平。取大鼠胰腺组织行病理学检查。结果:正常对照组、ANP 3 h组、ANP 6 h组、BIBR1532组大鼠外周血中性粒细胞TERT mRNA表达量分别为1.03±0.26、3.31±1.07、5.21±0.78、1.95±0.49;TERT蛋白表达量分别为0.09±0.03、0.43±0.12、0.58±0.11、0.22±0.07;Bcl-xL蛋白表达量分别为0.19±0.05、0.50±0.07、0.85±0.04、0.40±0.11;Bax蛋白表达量分别为0.29±0.08、0.23±0.03、0.17±0.02、0.43±0.12;细胞凋亡率分别为(10.03±0.74)%、(7.99±0.27)%、(6.65±0.36)%、(22.98±2.86)%。ANP 3、6 h组TERT mRNA和蛋白表达量、Bcl-xL蛋白表达量高于对照组,Bax蛋白表达量、细胞凋亡率低于对照组,而BIBR1532组TERT mRNA和蛋白表达量、Bcl-xL蛋白表达量低于ANP 3 h组,Bax蛋白表达量、细胞凋亡率高于ANP 3 h组,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。正常对照组、ANP 3 h组、BIBR1532组血清TNF-α水平分别为(96.67±27.12)、(382.30±46.33)、(206.88±36.42)ng/L,IL-6水平分别为(43.34±14.50)、(134.21±16.13)、(88.06±13.05)ng/L,ANP 3 h组均高于正常对照组,而BIBR1532组均低于ANP 3 h组,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。BEBR1532组大鼠胰腺组织病理改变较ANP组明显改善。 结论:ANP大鼠外周血中性粒细胞TERT表达量显著升高,给予TERT抑制剂干预后,ANP大鼠中性粒细胞凋亡率显著升高,表明TERT可抑制ANP大鼠外周血中性粒细胞的凋亡。
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编辑人员丨5天前
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皮肤黑素瘤94例临床病理特点与基因突变的关系
编辑人员丨5天前
目的:探讨皮肤黑素瘤(CMM)临床病理特点及与易感基因突变的关系。方法:回顾分析新疆维吾尔自治区人民医院2009年1月至2019年12月确诊的94例CMM临床及组织病理学特征。48例留存黑素瘤石蜡组织标本,采用Sanger测序法检测黑素瘤组织中BRAF、NRAS、c-KIT基因及人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子区突变情况;分析基因突变与临床病理特征的关系。计量资料的比较采用 t检验,计数资料采用卡方检验或Fisher精确检验法。 结果:94例CMM中,男46例(48.9%),女48例(51.1%),年龄(58.5 ± 16.0)岁。汉族41例(43.6%),少数民族53例(56.4%)。发病部位为肢端50例(53.2%),其中27例(65.8%)为汉族;非肢端患者44例(46.8%),14例(31.8%)为汉族,两组民族分布差异有统计学意义( χ2 = 5.25, P = 0.022)。组织病理特征:41例(43.6%)Clark分级处于Ⅳ、Ⅴ级,52例(55.3%)可见溃疡,32例(34.04%)初诊即有淋巴结转移。48例中,11例(22.9%)出现BRAF基因突变,包括c.1799 T>A(p.V600E)、c.1790 T>A(p.L597Q)、c.1394 C>T(p.S465F);5例(10.4%)出现NRAS基因c.182 A>G(p.Q61R)突变;6例(12.5%)出现c-KIT基因突变,包括c.1727 T>C(p.L576P)、c.1669 T>C(p.W557R);7例(14.6%)出现hTERT基因启动子区突变,4例为距起始密码子ATG上游124 bp(C228T),3例为146 bp(C250T)。26例< 60岁患者中,发生BRAF突变9例,显著高于60岁以上患者(22例中2例发生突变, P < 0.05),肢端型患者发生率(3/27例)低于非肢端型(8/21例, P < 0.05);有淋巴结转移的患者中NRAS、c-KIT、hTERT突变发生率(3/10、4/10、4/10例)均高于无淋巴结转移的患者(2/38、2/38、3/38例,均 P < 0.05)。 结论:不同民族CMM的发病部位有差异;BRAF基因突变与CMM患者年龄、发病部位相关;NRAS、c-KIT基因突变、hTERT基因启动子区突变与是否有淋巴结转移相关。
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编辑人员丨5天前
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miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-15b-5p参与PD中抑郁样行为发生的机制。方法:(1)将18只C57BL/6N小鼠按随机数字表法分为PD组、干预组及对照组,每组6只。PD组小鼠通过脑立体定位仪将0.25 mg/kg鱼藤酮注射至右侧纹状体以制备PD模型,干预组小鼠接受0.25 mg/kg鱼藤酮及miR-15b-5p抑制物慢病毒注射,对照组小鼠注射等体积PBS。4周后进行旷场实验及转棒实验评价小鼠的运动能力,进行糖水偏好实验及强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为表现,然后提取小鼠黑质及纹状体中相关蛋白及miRNAs,进行Western blotting实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验以及免疫荧光染色实验检测相关指标[miR-15b-5p、酪氨酸羟化酶(TH)、脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)、突触后密度蛋白95(PSD95)]。(2)将100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列分别转染至6孔板上SH-SY5Y细胞中(分别命名为miR-15b-5p模拟物组、miR-15b-5p模拟物对照组及miR-15b-5p抑制物组、miR-15b-5p抑制物对照组),48 h后进行Western blotting实验及qRT-PCR实验,以检测BDNF、TrkB、PSD95蛋白及miR-15b-5p表达改变。(3)将100 ng BDNF 3'端非编码区(3'-UTR)野生型或突变型荧光素酶报告载体质粒以及100 nmol/L miR-15b-5p模拟物/抑制物序列及各自阴性对照序列共转染至24孔板上SH-SY5Y细胞中,得到相应8组细胞,48 h后进行荧光素酶报告载体活性检测实验,以检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:(1)与对照组相比,PD组小鼠的运动速度明显减慢、落棒潜伏期明显缩短、糖水偏好百分比明显降低、不动时间明显增加;与PD组相比,干预组小鼠的运动速度明显提高、落棒潜伏期明显延长、糖水偏好百分比明显升高,不动时间明显减少;差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)与miR-15b-5p模拟物对照组比较,miR-15b-5p模拟物组细胞中miR-15b-5p表达明显升高,BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±5.75 vs. 66.79±5.90;100.00±5.95 vs. 84.46±5.77;100.00±7.02 vs. 80.43±3.25);与miR-15b-5p抑制物对照组比较,miR-15b-5p抑制物组细胞中miR-15b-5p表达明显降低,BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(100.00±6.81 vs. 119.90±5.66;100.00±2.88 vs. 110.10±4.15;100.00±2.19 vs. 124.60±11.69);差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组相比,PD组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显增加,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显降低(100.00±9.20 vs. 63.60±12.80;100.00±9.88 vs. 71.95±10.00;100.00±5.16 vs. 70.37±8.43;100.00±7.01 vs. 68.12±10.22),BDNF荧光强度明显降低(100.00±12.99 vs. 48.23±12.58);与PD组相比,干预组小鼠黑质中miR-15b-5p表达明显降低,TH、BDNF、TrkB、PSD95表达明显升高(63.60±12.80 vs. 90.69±9.84;71.95±10.00 vs. 93.31±4.50;70.37±8.43 vs. 88.11±4.10;68.12±10.22 vs. 89.59±5.93),BDNF荧光强度明显升高(48.23±12.58 vs. 83.65±10.52);差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p模拟物组细胞中荧光素酶活性明显降低(100.00±5.07 vs. 90.59±1.75);与BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物对照组比较,BDNF 3'-UTR野生型+miR-15b-5p抑制物组细胞中荧光素酶活性明显升高(100.00±5.08 vs. 152.20±31.87);差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-15b-5p通过下调BDNF/TrkB/PSD95表达参与PD中抑郁样行为发生。
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编辑人员丨5天前
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外周血端粒酶逆转录酶mRNA表达量对结直肠癌微转移的诊断价值分析
编辑人员丨5天前
目的:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)系统的方式,通过检测结直肠癌患者外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。方法:选取2015年10月至2016年10月于重庆市开州区人民医院确定诊断的结直肠癌患者47例为肿瘤组。同期选取23名健康体检者为对照组。采用荧光定量RT-PCR系统技术检测肿瘤组及对照组外周血液标本中的hTERT mRNA表达的具体情况,并分析其表达与肿瘤特征的关系,分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。结果:肿瘤组hTERT mRNA阳性表达量为(14.022±7.691),对照组为(0.467±0.391),肿瘤组明显高于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。47例结直肠癌患者外周血液中hTERT mRNA阳性表达的情况,与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及浸润程度无关,差异均无统计学意义(均 P>0.05),与是否有淋巴、血行转移及TNM分期有关,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:采用实时荧光定量RT-PCR系统,克服了传统检测技术不能定量只能定性的检测缺点,通过检测外周血hTERT mRNA表达量,可作为有效诊断结直肠癌及是否微转移,有在临床上普及、推广价值。
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编辑人员丨5天前
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13-顺式维A酸通过CCCTC结合因子促进神经母细胞瘤衰老的作用及机制
编辑人员丨5天前
目的:探讨13-顺式维A酸(13-cis RA)对神经母细胞瘤(NB)细胞衰老的调控作用及机制。方法:NB细胞株分为空载体对照组、CCCTC结合因子(CTCF)过表达组、随机干扰组、CTCF干扰组,筛选稳定过表达、敲低CTCF的亚克隆细胞株;二甲基亚砜(DMSO)、13-cis RA分别处理空载体对照组、CTCF过表达组前后,采用实时定量PCR、Western blot法检测瘤细胞中CTCF及靶基因的转录水平和蛋白表达变化;噻唑蓝(MTT)比色分析法检测细胞增殖活性;β-Gal原位染色法检测细胞衰老程度的改变。组间比较采用 t检验。 结果:13-cis RA能抑制NB细胞增殖活性,促进细胞衰老;CTCF在NB中显著高表达;CTCF过表达组端粒酶逆转录酶(TERT)表达高于对照组(5.32±0.07比1.00±0.02, t=57.17, P<0.05)、Pescadilo 1的表达高于对照组(3.93±0.06比1.00±0.01, t=47.76, P<0.05),细胞增殖活性增强,细胞衰老被抑制;在CTCF干扰组,TERT的表达低于对照组(0.35±0.04比1.00±0.01, t=18.26, P<0.05)、PES1表达低于对照组(0.36±0.05比1.00±0.01, t=13.46, P<0.05),细胞增殖活性降低,细胞衰老增多;13-cis RA处理后,瘤细胞中CTCF表达下调,回补CTCF表达水平能逆转13-cis RA对NB细胞增殖和衰老的调控作用。 结论:13-cis RA能下调转录因子CTCF的表达,抑制衰老相关基因TERT、PES1的表达,促进NB细胞的衰老。
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编辑人员丨5天前
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微小RNA与端粒酶逆转录酶在麻醉药影响认知功能中的作用与研究进展
编辑人员丨5天前
微小RNA (microRNA, miRNA)是非编码小RNA分子,可通过调控脑中端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)对认知功能产生影响。关于麻醉药的研究表明,miRNA参与调节麻醉药相关的认知障碍,但麻醉药对TERT的活性、表达水平的调节及其内在机制尚不明确。miRNA可靶向胰岛素生长因子(insulin-like growth factor, IGF)与NF-κB信号分子调节中枢神经系统TERT水平与活性,且当前研究发现麻醉药调控miRNA亦经相关通路影响认知功能,综上分析可对麻醉药影响认知功能中TERT的存在意义与内在调节机制提出一种新想法,TERT活性信号通路受麻醉药与miRNA调节可能为探寻麻醉药调控TERT介导神经元凋亡的研究带来新想法。
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编辑人员丨5天前
