目的:了解类芳烃受体核转位蛋白2(BMAL2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及与患者预后的关系,分析其对AML细胞有氧糖酵解和增殖的影响.方法:应用实时定量PCR法检测AML患者和正常对照组的骨髓单个核细胞中BMAL2的表达情况.利用美国国家生物技术信息中心公共数据库分析BMAL2表达与AML患者预后的相关性.通过慢病毒系统敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中BMAL2的表达,葡萄糖摄取实验、乳酸含量实验、CCK-8法、细胞集落形成实验检测其对细胞糖代谢、细胞增殖的影响.结果:BMAL2 mRNA在AML中的表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01).BMAL2表达高的AML患者总生存时间较低表达患者明显缩短(P＜0.05).敲低AML细胞系HL-60和Kasumi-1中的BMAL2后,细胞葡萄糖摄取减少,乳酸生成减少.RT-PCR及Western blot检测结果显示,BMAL2通过增强HIF1A的表达来促进AML细胞有氧糖酵解,进而促进细胞增殖.结论:BMAL2高表达于AML中,通过HIF1A增强AML细胞有氧糖酵解从而促进细胞增殖.

目的:探讨昼夜节律基因脑肌类芳烃受体核转位样蛋白1(Bmal1)过表达对小鼠动脉粥样硬化斑块病变程度及斑块稳定性的影响.方法:12只血管平滑肌细胞特异性Bmal1转基因的SM-Bmal1-TG/ApoE-/-小鼠和12只ApoE-/-小鼠均予以高脂饮食,行颈总动脉CAST套管结扎术使小鼠形成动脉粥样硬化斑块.喂养11周后处死动物,取出颈总动脉血管,行苏木精-伊红染色检测小鼠主动脉粥样硬化程度及斑块面积,Western blot法检测及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达水平.结果:与ApoE-/-组相比,SM-Bmal1-TG/ApoE-/-组三酰甘油(TC)、总胆固醇(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显降低(P均<0.05),2组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平的差异无统计学意义.SM-Bmal1-TG/ApoE-/-组小鼠颈总动脉斑块减少约25％,内膜增厚不明显.与ApoE-/-组相比,SM-Bmal1-TG/ApoE-/-组MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05).结论:Bmal1可抑制动脉粥样硬化斑块病变程度,下调主动脉粥样斑块内MMP-2、MMP-9水平,具有抗动脉粥样硬化的作用.

目的 评价大麻二酚(CBD)配伍褪黑素(MLT)(CBD-MLT复方)对生物节律紊乱与失眠的调节作用及机制.方法 ①雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、CBD(5,10和20 mg·kg-1)组、MLT(2.5,5,10和20 mg·kg-1)组及CBD-MLT复方〔1.25+2.5,2.5+2.5,1.25+5和(2.5+5)mg·kg-1〕组.ig给药后ip给予戊巴比妥钠(48 mg·kg-1)进行翻正反射实验,考察各组药物对正常小鼠睡眠持续时间的影响.②雄性SD大鼠进行植入子手术,随机分为正常对照组、阳性药物地西泮(DZP 3 mg·kg-1)组和CBD-MLT复方(10+10)mg·kg-1组.ig给药后进行无线生理信号遥测与睡眠分析,考察各组药物对正常大鼠睡眠时间和睡眠结构的影响.③雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+DZP(3 mg·kg-1)组及模型+CBD-MLT复方〔5+5,10+10和(20+20)mg·kg-1〕组,连续5 d ip给予对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导失眠,第6天ig给药后ip给予戊巴比妥钠(48 mg·kg-1)进行翻正反射实验,考察CBD-MLT复方对入睡潜伏期和睡眠持续时间的改善作用;借助自发活动视频分析系统对失眠小鼠活动总路程和活动速度进行分析,通过活动-静息节律的变化考察CBD-MLT复方(20+20)mg·kg-1对小鼠昼夜节律的调节作用;生化试剂盒检测小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测小鼠下丘脑视交叉上核脑肌类芳烃受体核转位样蛋白1(Bmal1)、时钟节律调节蛋白(Clock)、节律周期调节蛋白2(Per2)、隐花色素节律调节蛋白2(Cry2)和5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)蛋白表达水平.结果 ①与正常对照组比较,CBD或MLT协同戊巴比妥钠延长小鼠睡眠时间的最低有效剂量分别为20 mg·kg-1(P<0.01)和10 mg·kg-1(P<0.05),而CBD-MLT复方的最低有效剂量为(1.25+2.5)mg·kg-1(P<0.01).②大鼠脑电睡眠分析结果表明,与正常对照组比较,CBD-MLT复方(10+10)mg·kg-1可增加大鼠睡眠总时间,在10:00,20:00,00:00,02:00和06:00差异显著(P<0.05,P<0.01),作用效果与DZP(3 mg·kg-1)相当.CBD-MLT复方(10+10)mg·kg-1增加慢波睡眠总时间和片段平均持续时间作用显著(P<0.05,P<0.01),而DZP(3 mg·kg-1)无此作用.③ 与正常对照组比较,PCPA模型组小鼠睡眠潜伏期显著延长(P<0.01),睡眠持续时间显著缩短(P<0.01),昼夜节律紊乱,活动总路程显著增加(P<0.05),活动速度显著加快(P<0.05),血清SOD和CAT活性及GSH含量显著降低(P<0.05,P<0.01),MDA含量显著增加(P<0.05),下丘脑Clock和Bmal1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Per2,Cry2和5-HT1AR蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与模型组小鼠比较,模型+CBD-MLT复方〔10+10和(20+20)mg·kg-1〕组小鼠睡眠潜伏期显著缩短(P<0.05,P<0.01),模型+复方各剂量组小鼠睡眠持续时间均显著延长(P<0.05,P<0.01);模型+复方(20+20)mg·kg-1组小鼠活动总路程显著减少(P<0.05),活动速度显著减慢(P<0.05),血清SOD和CAT活性及GSH含量显著增加(P<0.05,P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05),下丘脑Clock和Bmal1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Per2,Cry2和5-HT1AR蛋白表达显著升高(P<0.05).结论 CBD-MLT复方具有镇静催眠和睡眠结构调控作用,其机制可能与维持体内氧化还原平衡,调节下丘脑5-HT1AR和核心时钟蛋白Clock,Bmal1,Per2和Cry2表达有关.