目的:利用汉逊酵母系统重组表达人细小病毒B19(human parvovirus B19, B19V)主要衣壳蛋白VP2，并对VP2病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)进行理化性质研究及免疫效果评价。方法:重组表达B19V VP2蛋白，并使其自组装成VLP；通过高密度发酵和系列层析纯化步骤获得VP2-VLP；SDS-PAGE和凝胶过滤高效液相色谱检测蛋白质纯度，动态光散射和透射电镜观察颗粒形态，并检测VP2-VLP磷脂酶活性。采用ELISA和红细胞凝集抑制试验检测小鼠体内VP2-VLP特异性IgG抗体和中和抗体水平。结果:本研究制备的重组VP2-VLP纯度大于95%，颗粒均一且形态良好，大小近似天然病毒颗粒；VLP可与特异性单克隆抗体结合，磷脂酶A2活性为阴性；吸附佐剂后的VP2-VLP能够诱导小鼠产生高滴度的特异性IgG抗体和中和抗体。结论:汉逊酵母表达系统制备的B19V VP2-VLP可作为候选靶抗原用于B19V预防性疫苗的开发。

目的 研究黔西南州流感流行特征与鸡胚培养和细胞培养分离毒株在血凝和血凝抑制方面的特性,为流感监测、防控、疫苗研制提供技术支持.方法 收集2021年11月-2022年3月流感监测哨点医院采集的流感样病例样本,经Real-time PCR检测分型,并对乙型流感病毒Victoria系(BV)阳性样本进行鸡胚和细胞分离培养,对培养物进一步进行血凝与血凝抑制试验,然后统计分析其滴度和效价.结果 收集的1 178份标本中,流感阳性353份,阳性率为29.97％,其中BV系占89.52％,且每月均占比最高,季节性H3亚型占10.48％,主要集中在2022年3月.BV系流感鸡胚分离率为20.57％,细胞分离率15.82％.鸡胚分离株红细胞凝集试验(HA)滴度1∶64以上占70.77％(46/65),1∶128 以上占 36.92％(24/65),1∶256 的毒株占 20.00％(13/65),红细胞凝集抑制试验(HI)效价 1∶640以上占 44.62％(29/65),＞1∶1 280 占 4.62％(3/65).而细胞分离株 HA 滴度 1∶64 以上占 52.00％(26/50),1∶128 以上仅占10.00％(5/50),1∶256毒株为0株;HI效价1∶640以上占14.00％(7/50),＞1∶1 280有0株.结论 黔西南州2021年11月-2022年3月以BV系流感为优势流行型别,鸡胚分离和细胞分离可相互补充,鸡胚分离株HA滴度和HI效价整体上比细胞分离毒株高.

目的 利用随机噬菌体12肽库筛选出血型D抗原的模拟多肽并验证.方法 采用IgG型单克隆抗-D筛选噬菌体随机12肽库,测定每轮筛选后洗脱物与抗-RhD的结合情况.对经特异性筛选得到的阳性噬菌体克隆进行DNA序列测定,将推导出的12肽氨基酸序列进行同源性比较,通过凝集抑制试验验证阳性噬菌体与IgG型单克隆抗-D的反应.结果 随着筛选轮次增加,噬菌体洗脱物与抗-RhD的结合力逐渐增强.经过4轮淘洗后,得到8个亲和力较强且具有较高重合率的保守区域的12肽序列.凝集抑制实验表明具有相同氨基酸序列的阳性噬菌体对IgG型单克隆抗-D与RhD阳性红细胞的凝集反应具有抑制作用.结论 随机噬菌体12肽库筛选得到的血型D抗原模拟多肽,为RhD结构与功能研究及研制针对RhD新生儿溶血病的新型诊断抗原、制备特异疫苗以及探索新的治疗方法提供实验基础.

[背景]桑黄是一种具有很高药用价值及广泛应用前景的药用真菌,其主要有效成分为多糖.凝集素则是桑黄所含的另一类生物活性物质,具有免疫调节、抗肿瘤及抗菌等作用.[目的]从药用真菌桑黄发酵液中分离纯化凝集素SHL24,并对其生物活性进行初步探究.[方法]通过冷冻干燥、Sephadex G-50、DEAE Sephadex A-25、MPLC-MonoQ和LPLC-Sephadex G-75 等方法,从药用真菌桑黄的发酵液中进行分离纯化;利用LPLC-Sephadex G-75和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定其分子质量;检测不同pH、金属离子、糖、发酵时间、血红细胞、温度对其凝血活性的影响.[结果]从药用真菌桑黄发酵液中分离到单一蛋白条带,SDS-PAGE凝胶电泳检测其分子质量约为24 kD,与分子筛层析法分析的分子质量一致,表明该凝集素为单亚基蛋白.SHL24可以凝集供试的小鼠血红细胞和4种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集程度不同.糖抑制试验表明,SHL24不被D-甘露糖、D-麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、树胶醛糖、D-乳糖以及L-鼠李糖所抑制.热稳定性试验和金属离子对SHL24凝血活性影响试验表明SHL24具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca2+、Mg2+和Zn2+等二价阳离子的影响.[结论]SHL24具有的稳定理化性质和生物活性,有作为蛋白质药物的潜质.

目的 对2012-2016年菏泽市流感病毒分离鉴定结果进行对比分析,为本市未来流感防控工作提供科学依据.方法 采集哨点医院内科门诊流感样病例(IL)咽拭子标本,MDCK细胞分离培养.观察细胞病变情况,收集病毒培养液进行血凝试验(HA),HA≥8者进行红细胞凝集抑制试验(HAI)对病毒分型鉴定.结果 2012-2016年共接受并分离鉴定咽拭子标本l 334份,共分离鉴定出流感病毒株329株,总阳性率为24.66％.新甲H1N1、H3N2、BY、BV4种血清型毒株均有出现.每年的优势毒株不同.4种血清型毒株主要分布在流感易感人群0～岁组和5～岁组.结论 病毒分离鉴定结果显示:菏泽市近年流行的流感毒株型有H3N2亚型、BY型、BV型和新甲H1N1型,每年的流行优势株、流行强度均不同;流感整体处于相对稳定状态,未发生大规模流行.

目的 了解江阴市职业暴露人群H5、H7、H9亚型禽流感病毒的感染状况,为制定人感染禽流感防控措施提供科学依据.方法 采集监测人群血清,用马血球红细胞凝集抑制试验检测血清中的H5N1、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒HI抗体,数据用Excel软件进行统计分析.结果 共调查职业暴露人群80人,血清学结果 显示14份标本H7N9和27份H9N2亚型禽流感病毒中和抗体阳性,总阳性率为45.00％.职业暴露人群和对照组人群HI抗体效价阳性率差异有统计学意义(x2=10.98,P＜0.05).问卷调查显示人群年龄偏大、文化水平偏低、流感疫苗接种率为0.00％,防护意识较差.结论 职业暴露人群存在H7N9和H9N2隐性感染现象,应加强健康教育,提高防护意识,同时加强职业人群和外环境监测,降低禽流感感染风险.

目的:对多发骨髓瘤全凝集病例进行血清学及分子生物学定型,并探讨其输血实践.方法:初检血型呈全凝集者,红细胞37℃生理盐水洗涤3遍,正定型检测仍有凝集时,56℃水浴箱热放散1 min,再次洗涤后做正定型;血浆用多人份O型洗涤红细胞4℃进行吸收4h,离心取上清做反定型,结果不理想者复做一次;仍未能判读者取上清置37℃水浴30 min再次如上方式进行反定型检测.经上述处理结果仍然不理想时,进一步应用二硫苏糖醇(DTT)处理检测红细胞或患者红细胞.同时采用中和抑制试验测定患者唾液中和血型物质及PCR扩增1～7外显子测序佐证血型.结果:血型全部得以确认;唾液中和试验与基因定型结果与血清学结果一致;配血试验血红蛋白均有提升.结论:全凝集患者血型定型正确,输血效果良好.

目的:应用免疫磁珠分离技术获得具有良好抗原性的A/B血型抗原, 并探究其作为ABO血型抗体吸附剂去除A/B抗体的可行性.方法:将含有血型物质的唾液进行预处理, 再与包被了抗体的磁珠混合, 分离出纯度较高的A/B抗原, 运用酶联免疫及凝集抑制试验验证所得抗原的抗原性及是否存在交叉反应.用未纯化A/B抗原和纯化A/B抗原包被磁珠, 对含有抗A/B IgM、IgG的血清进行抗体吸附, 用纯化A/B抗原对100份来自O型血孕妇的临床血清样本进行抗体吸附, 分别评价其吸附效果.结果:纯化抗原与对应抗体反应后, 其吸光度显著高于对照组 (A抗原与A抗体0.85±0.12 vs.0.27±0.03, P＜0.01;B抗原与B抗体0.86±0.09 vs.0.24±0.06, P＜0.01), 与其它类型抗体反应后的吸光度值与对照组比较差异无统计学意义 (P＞0.05).进行红细胞凝集抑制试验时, 纯化抗原可显著抑制相应抗体与红细胞的凝集反应, 对其它类型抗体与红细胞的凝集没有抑制作用.血清抗体吸附实验表明纯化抗原的吸附效率比未纯化抗原的高 (97.00％vs.88.00％, P＜0.001).临床样本抗体吸附实验显示, 纯化A抗原对抗A IgM/IgG的吸附效率分别为96.88％、98.44％;纯化B抗原对抗B IgM/IgG的吸附效率分别为96.88％、98.44％.结论:磁珠纯化抗原能特异性地与对应抗体结合, 有效吸附血清中的血型抗体, 有望作为合成A/B抗原的替代品.

目的 对北京市密云区2012年9月至2018年8月流感样病例实验室检测结果进行分析,掌握该地区流感病毒流行特征和规律,为流感防控和预警工作提供数据支持.方法 根据北京市流感监测方案,采集哨点医院发热门诊流感样病例的咽拭子标本,经实时荧光定量PCR方法检测后,核酸阳性标本接种狗肾(MDCK)细胞传代分离培养,采用红细胞凝集抑制试验(HAI)对病毒分离结果 进行流感病毒亚型鉴定.结果2012—2018年共检测流感样病例咽拭子标本4130件,总阳性率为14.26％;2013—2014年度核酸阳性检出率最低,2017—2018年度核酸阳性检出率最高;型别为新甲型H1N1,季节性H3N2和B型流感均有检出;共分离流感病毒518株,分离率为87.94％;六个监测周期优势病原分别为H3N2、H1N1、BV、BY.60～组阳性率最高(21.40％),0～组阳性率最低(0.06％),阳性率差异有统计学意义(χ2=38.063,P<0.05);平原地区发病人数最高(13.87％),山区发病人数最低(12.18％),乙型流感病毒地区差异明显(χ2=8.982,P<0.05).结论 密云区流感病毒流行呈一定规律,12月至次年3月为甲型流感病毒流行的高峰期,4～11月份流感流行水平较低;乙型流感流行始于1～4月份,流行季节主要在春季,成为主要优势株;流感防控工作应在流行季来临之前做好流感的预防和宣传,夏季防控也不能忽视,长期开展流感病原学监测和扩大流感监测点范围.

目的 合成Mur血型抗原多肽及重复多肽序列,比较2者抗原性,并建立不依赖新鲜红细胞的可用于抗-Mur检测的流式微球实验技术.方法 采用固相化学合成法合成制备生物素Biotin标记的Mur血型抗原多肽及重复多肽序列:Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSE和Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSETYPA HTANEVSE,经凝集抑制试验验证其抗原特异性后,通过链亲和素streptavidin包被于羧基流式微球表面,建立抗-Mur流武微球检测技术.采用该方法检测本研究室制备的抗-Mur参考血清1份和2 300例临床患者血液标本,并与试管法血凝试验比较.同时验证多肽抗原微球的稳定性和保存期限.结果 Mur血型抗原多肽及重复多肽序列被高效包被于流武微球表面;通过抗-Mur流式微球检测技术可检测出参考血清中的抗-Mur;流式微球检测技术与试管法血凝试验对临床患者血液标本抗-Mur阳性检出率皆为0.35％(8/2 300).通过对参考血清检测实验比较,流式微球检测技术的Mur血型抗原重复多肽序列阳性检测结果明显优于Mur血型抗原多肽,该多肽抗原微球4℃保存稳定性可维持＞11个月.结论 基于合成重复多肽序列抗原的抗-Mur流式微球检测技术用于检测抗-Mur,弥补了临床难以获得Mur表型阳性红细胞及保存期短的局限性,有助于临床常规开展抗-Mur检测.