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纳米疫苗载体材料的研究进展
编辑人员丨5天前
疫苗是一种预防传染病和治疗疾病的重要手段.近年,有研究采用分子生物学方法将病原体的多肽蛋白或核酸整合至载体上,构建新型疫苗.其中纳米材料具有生物相容性高、毒性低、抗原装载效率高、靶向性强等优势,已成为纳米疫苗制备中的常用载体.目前,用于制备纳米疫苗的载体材料包括蛋白质/肽、脂质体、聚合物和无机物等,可用于多种疾病相关纳米疫苗的研发及制备.本文就各种纳米疫苗的优势及纳米疫苗载体材料的研究进展作一综述,以期为纳米疫苗的设计、研发及应用提供新的思路和策略.
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编辑人员丨5天前
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胶质母细胞瘤的免疫治疗研究进展
编辑人员丨5天前
胶质母细胞瘤(GBM)是成人颅内最常见的、恶性度最高的原发性肿瘤。近年来,肿瘤免疫治疗在多肽疫苗、DC疫苗、嵌合抗原受体T细胞、免疫检查点抑制剂及溶瘤病毒5个领域飞速发展。GBM的免疫治疗相关研究取得了不同程度的进展,本文将从以上5个方面对近期报道的针对GBM的免疫治疗研究进展进行综述。
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编辑人员丨5天前
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一个表现为血栓的遗传性低异常纤维蛋白原血症家系
编辑人员丨5天前
纤维蛋白原(Fbg)由肝脏合成及分泌,是血浆中浓度最高的凝血因子。纤维蛋白原是由三对多肽链(Aα、Bβ、γ)以二硫键连接而成的二聚体,三条肽链分别由位于4号染色体长臂的FGA、FGB和FGG三个基因编码 [1]。遗传性纤维蛋白原异常作为一种罕见的遗传性出血性疾病主要包括两种类型,一类为纤维蛋白原量的减少或缺乏,包括遗传性低纤维蛋白原血症和无纤维蛋白原血症。另一类则为纤维蛋白原的缺陷,包括遗传性异常纤维蛋白原血症(CD)和遗传性低异常纤维蛋白原血症,其中前者以纤维蛋白原活性(Fbg∶C)降低而抗原(Fbg∶Ag)水平正常为特征,后者纤维蛋白原活性和抗原均有下降但活性降低更为明显。CD和遗传性低异常纤维蛋白原血症患者在临床上既可能表现为出血,亦可能发生有血栓事件,甚至在同一患者上述两种表现共存 [1,2]。该类疾病患者的临床表现通常难以预测,目前仅有少数基因型与临床表型存在明确对应关系,因此对这些患者的管理极具挑战。本文中我们对一个首次报道的遗传性低异常纤维蛋白原血症家系的基因型及患者表型进行介绍。
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编辑人员丨5天前
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LncRNA Gm13568调控A1型星形胶质细胞活化及在EAE小鼠病变中的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNA)Gm13568对A1型星形胶质细胞活化及实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠疾病进程的影响与分子机制。方法:构建特异性靶向星形胶质细胞的lncRNA Gm13568沉默与对照的重组慢病毒载体,分别命名为LV-Inhibit-Gm13568和LV-ctrl,并包装病毒。1×10 7 TU病毒悬液静脉注射入C57BL/6小鼠体内7 d后,髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG 35-55)多肽诱导EAE模型。实验分为PBS组、EAE组、LV-ctrl+EAE组和LV-Inhibit-Gm13568+EAE组,采用双盲法每日对小鼠进行神经功能评分。EAE小鼠诱导后23 d,取各组小鼠脊髓组织,利用real-time PCR测定A1型星形胶质细胞活化指标Serping 1、C3、Srgn和H2-T23的mRNA转录水平,同时测定IL-6、TNF-α、巨噬细胞趋化蛋白-1(macrophage chemotactic protein-1, MCP-1)和干扰素诱导蛋白-10(interferon-inducible protein-10, IP-10)的生成变化;Western blot检测脊髓组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和Notch1的表达及信号转导与转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的磷酸化水平(phosphorylated STAT3, p-STAT3);免疫荧光法检测各组脊髓组织中Notch1活化后的胞内段蛋白(Notch1 intracellular domain,NICD)与GFAP的共表达;HE和劳克坚牢蓝染色(Luxol fast blue,LFB)分别观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失变化。 结果:与PBS组比较,EAE组和LV-ctrl+EAE组小鼠A1型星形胶质细胞活化增生,Notch1的表达显著上调。沉默内源性lncRNA Gm13568后,与LV-ctrl+EAE组比较,小鼠的神经功能评分在抗原诱导后23 d从平均3.5分下降至1分以下,临床症状缓解,A1型星形胶质细胞活化降低,同时炎性因子及趋化因子生成减少;Notch1、GFAP、NICD的蛋白质表达水平和STAT3的磷酸化水平显著降低;小鼠脊髓组织炎性细胞浸润与髓鞘脱失显著减轻。结论:LncRNA Gm13568可能通过调控Notch1/STAT3信号调控A1型星形胶质细胞的活化,从而调节炎性因子及趋化因子的产生,参与EAE的病变进程。
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编辑人员丨5天前
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1.2倍基因组长度C2亚型HBV重组体的表达和多肽分析
编辑人员丨5天前
目的:获得乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)C2蛋白的HBV多肽。方法:同源重组法构建含1.2倍HBVC2全基因组表达重组体;脂质体法转染HepG2和Huh-7细胞;荧光定量PCR法检测HBV DNA水平;双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)的水平;免疫荧光法检测核心抗原(HBcAg)水平和分布。电转染法转染人永生化B淋巴细胞系(B-lymphoblastoid cell line,BLCL),液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrography/mass spectrometry,LC-MS/MS)法分离鉴定HBV多肽,生物信息学预测亲合力,并检索已报道序列。结果:成功构建了含3881 bp目的片段的HBVC2全基因组的重组体,即pAAV/HBV1.2 C2。HepG2和Huh-7细胞转染重组体后24、48和72 h,培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg均呈现较高水平;HBcAg多分布在细胞核,均在48 h表达水平达高峰。从5株BLCLs细胞裂解液中检出来源于HBsAg、HBeAg和HBcAg的HBV多肽(序列长度≥8aa)共95条。比较分析共同序列和包含或重叠(≥8aa)序列,67条多肽形成了11个HBV多肽热点核心区域,有92条已见报道。51(53.68%)条多肽有相应的人类白细胞表面抗原(human leukocyte antigen,HLA)等位基因分型,而与5株细胞所携带HLA等位基因一致的共有21条。 结论:成功构建和表达了pAAV/HBV1.2 C2,获得了真实世界的HBVC2多肽谱。
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编辑人员丨5天前
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中国人群优势HLA-A分子限制性甲胎蛋白T细胞表位谱研究
编辑人员丨5天前
目的:研究被13种中国人群优势人类白细胞抗原A(human leukocyte antigen A,HLA-A)分子限制的甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)T细胞表位谱。方法:利用多种T细胞表位预测数据库,虚拟预测AFP抗原被13种HLA-A分子限制的候选表位肽。采用多肽-肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)共刺激试验(多肽-PBMCs试验)和胞内细胞因子染色验证候选表位肽的免疫原性。利用表达特定HLA-A分子的12种HMy2.CIR细胞株进行HLA-A分子的多肽竞争结合试验,分析每种HLA-A分子与相应表位肽的亲和力和交叉限制性。结果:通过对67例AFP阳性肝细胞癌患者进行多肽-PBMCs共刺激试验,从42种候选表位肽中获得20种能刺激患者CD8 + T细胞反应的阳性表位肽。HLA-A分子的多肽竞争结合试验显示,与特定HLA-A分子呈高、中、低亲和力的表位肽分别有22、13和6种候选表位肽,另有10种无亲和力;20种经多肽-PBMCs共刺激实验验证的阳性表位肽均呈现与相应HLA-A分子的高或中亲和力结合,且多数肽能与多种HLA-A分子交叉结合。 结论:通过肝细胞癌患者的T细胞功能性试验获得20种被中国人群优势HLA-A分子限制的AFP特异性CD8 +T细胞表位肽,并初步明确了这些表位肽与对应HLA-A分子的交叉结合能力。本研究为设计中国人群普适性的AFP特异性T细胞检测系统和肝癌多肽疫苗等提供了较为系统的基础数据。
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编辑人员丨5天前
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高级别卵巢浆液性癌组织中ETAR mRNA表达的临床意义及ETAR来源融合多肽抑癌作用的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨高级别卵巢浆液性癌(HGSOC)组织中内皮素A受体(ETAR)表达的临床意义;设计ETAR羧基末端(ETAR-C)氨基酸序列来源的ETAR-C融合多肽,研究其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的体外抑癌作用。方法:(1)选择2007年1月1日至2017年12月31日在徐州市中心医院接受手术治疗、术后病理检查确诊为HGSOC且有完整临床病理资料及随访资料的患者共126例,收集其癌组织标本,采用逆转录-PCR技术检测HGSOC组织中ETAR mRNA的表达,并分析其临床意义。(2)以ETAR-C氨基酸序列为基础设计ETAR-C融合多肽,通过体外表达、纯化ETAR-C融合多肽,采用划痕实验、侵袭实验分别检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞的迁移、侵袭能力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测ETAR-C融合多肽处理后顺铂耐药卵巢癌SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的化疗敏感性,蛋白印迹(western blot)法检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞中β抑制蛋白1(β-arrestin-1)的表达。结果:(1)HGSOC组织中ETAR mRNA的相对表达水平为18.6±5.1,X-Tile软件分析显示最佳截断值为61.7%,据此将HGSOC患者分为ETAR mRNA高表达(76例)和低表达(50例)。ETAR mRNA高表达与HGSOC患者的腹水量、铂类药物耐药和血清癌抗原125(CA 125)水平均显著有关( P均<0.05),而与HGSOC患者的年龄、术后残留灶大小无关( P均>0.05);ETAR mRNA高表达和低表达患者的5年无进展生存率分别为18.4%、28.0%,5年总生存率分别为38.2%、52.0%,两者分别比较,差异均有统计学意义( P=0.046, P=0.034)。(2)划痕实验和侵袭实验结果均显示,内皮素1(ET-1)、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3和CAOV3细胞的划痕愈合率和细胞侵袭率分别比较,差异均有统计学意义( P均<0.05)。MTT比色法检测显示,加入不同浓度(4、6、8、10、12、24 μg/ml)顺铂后,ETAR-C融合多肽处理后的SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的抑制率均显著高于对照细胞( P均<0.05)。western blot法检测显示,ET-1、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3细胞(分别为1.85±0.09、1.13±0.09)和CAOV3细胞(2.14±0.15、1.66±0.12)中β-arrestin-1蛋白的表达水平分别比较,差异均有统计学意义( P均<0.05)。 结论:ETAR mRNA高表达HGSOC患者的预后显著差于ETAR mRNA低表达者,ETAR可能成为HGSOC治疗的新靶点。干扰ETAR与β-arrestin-1相互作用的ETAR-C融合多肽具有良好的体外抑制卵巢癌细胞的效果,具有临床应用潜力。
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编辑人员丨5天前
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发热伴血小板减少综合征病毒的人源CD8 + T细胞表位鉴定
编辑人员丨5天前
目的:鉴定发热伴血小板减少综合征病毒的CD8 + T细胞表位,为了解抗病毒免疫机制和疫苗设计提供参考。 方法:基于生物信息学方法在SFTSV非结构蛋白中预测潜在表位,利用酶联免疫斑点吸附试验、胞内因子染色、四聚体染色验证表位的免疫原性,体外复性试验验证表位与人白细胞分化抗原的结合力。结果:NS-3多肽能刺激特异性CD8 + T分泌多种细胞因子,且诱导CD107a表达水平升高。康复病例中检测到NS-3表位特异性CD8 + T细胞分群。NS-3与HLA-A*3001能稳定结合。 结论:从SFTSV的NS蛋白中鉴定到首个人源HLA-A*3001限制性CD8 + T细胞表位NS-3,为疫苗开发提供依据。
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编辑人员丨5天前
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靶向PD-L1的PET/CT分子探针研究进展
编辑人员丨5天前
程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)是肿瘤免疫治疗中重要的免疫检查点,PD-L1主要在肿瘤细胞和肿瘤相关髓样细胞中表达。放射性核素标记的靶向PD-L1分子探针可被PET/CT检测,使PD-L1表达在分子层面可视化,是指导免疫治疗的重要手段。靶向PD-L1的PET探针有抗体、多肽、小分子及其他类,目前部分探针应用于临床。笔者对靶向PD-L1的分子探针及临床应用进行综述。
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编辑人员丨5天前
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奥希替尼联合替雷利珠单抗治疗晚期非小细胞肺癌效果及患者生存情况
编辑人员丨5天前
目的:探讨奥希替尼联合替雷利珠单抗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床效果及患者生存情况。方法:前瞻性选择南京鼓楼医院集团宿迁医院2019年2月至2022年1月晚期NSCLC患者108例,采用随机数字表法分为奥希替尼联合替雷利珠单抗治疗组(研究组)和奥希替尼治疗组(对照组),每组54例。3周为1个周期,两组均治疗3个周期后观察疗效。对比两组临床疗效、肿瘤标志物水平、免疫功能、不良反应;随访1年,采用Kaplan-Meier法分析两组总生存(OS)和无进展生存(PFS),比较采用log-rank检验。结果:治疗3个周期后,研究组疾病控制率比对照组高[81.48%(44/54)比59.26%(32/54), χ2=6.40, P=0.011],研究组客观缓解率比对照组高[57.41%(31/54)比37.04%(20/54), χ2=4.50, P=0.034]。治疗前,两组间细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、组织多肽抗原(TPA)水平差异均无统计学意义(均 P>0.05),治疗后两组均较治疗前降低(均 P<0.05),且研究组较对照组更低(均 P<0.05)。治疗前,两组CD3 + T细胞、CD4 + T细胞、CD8 + T细胞比例差异均无统计学意义(均 P>0.05),治疗后两组CD3 + T细胞、CD4 + T细胞比例均较治疗前升高(均 P<0.05),且研究组较对照组更高(均 P<0.001),治疗后两组CD8 + T细胞比例均较治疗前降低( P<0.05),且研究组较对照组更低( P<0.001)。两组中性粒细胞减少、白细胞减少、免疫相关性肺炎、肝功能损害发生率差异均无统计学意义(均 P>0.05)。随访1年,研究组失访1例,对照组失访2例,随访率为97.22%(105/108);研究组死亡9例,OS率为83.02%,对照组死亡20例,OS率为61.54%。研究组OS、PFS均优于对照组[中位OS时间:11个月(95% CI 6~11个月)比8个月(95% CI 3~11个月), χ2=12.32, P<0.001;中位PFS时间:9个月(95% CI 4~11个月)比5个月(95% CI 4~11个月), χ2=6.84, P<0.001]。 结论:奥希替尼联合替雷利珠单抗可降低晚期NSCLC患者肿瘤标志物水平,改善患者免疫功能,近期疗效良好,未增加不良反应,且可使患者生存获益。
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编辑人员丨5天前
