目的:探讨致死型线粒体三功能蛋白缺乏症（mitochondrial trifunctional protein deficiency，MTPD）患儿的临床表型、诊治和基因特点。方法:对桂林市妇幼保健院新生儿科收治的1例致死型MTPD患儿临床资料进行回顾性分析。以“线粒体三功能蛋白缺乏症”、“线粒体三功能蛋白”、“新生儿”、“婴儿”、“致死型”和“mitochondrial trifunctional protein deficiency”、“mitochondrial trifunctional protein”、“HADHA”、“HADHB”、“newborn”、“infant”、“lethal”为关键词，分别对中文科技期刊数据库、中国知网、万方数据、中华医学期刊全文数据库、中文生物医学期刊文献数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、Elsevier ScienceDirect、Embase、BIOSIS Previews等自建库至2023年7月收录的文献进行检索，总结致死型MTPD患儿的临床特征和基因变异特点。结果:本例患儿男，胎龄33 +3周，生后9 d出现病情变化，以代谢性酸中毒、反复呼吸暂停、休克、心肌病、心力衰竭为主要表现，血串联质谱回报多种酰基肉碱增高，基因检测提示患儿HADHB基因存在母源性c.527C>G错义变异和新发c.1148C>T错义变异，确诊致死型MTPD，日龄12 d家属放弃抢救后患儿死亡。文献检索收集到相关文献13篇、共29例患儿资料，包括本例共30例。资料相对完整的16例患儿中，男10例，新生儿期起病15例，主要临床表现为心肌病、心肌酶谱异常、心力衰竭以及乳酸酸中毒或代谢性酸中毒；明确描述死亡时间的15例患儿中，3月龄内死亡14例；仅报道1例8岁时仍存活的患儿；29例通过基因检测确诊，HADHA基因变异10例，HADHB基因变异19例，1例通过病理检测及质谱分析确诊。 结论:MTPD是一种罕见的常染色体隐性遗传病，致死型MTPD发病时间早，新生儿期发病者可表现为严重酸中毒及心力衰竭，病死率高，应尽早对高度怀疑MTPD的患儿进行酰基肉碱及HADHB、HADHA基因检测，以助于早期基因诊断和干预治疗。

本文报告了1例 HADHB基因复合杂合变异导致的致死型线粒体三功能蛋白缺乏症（mitochondrial trifunctional protein deficiency，MTPD）。患儿生后24 h内起病，以“吃奶少伴心肌酶异常”为主诉在生后第4天转至南京医科大学附属儿童医院。入院时体格检查见精神稍萎靡，反应尚可，心肺腹无明显异常；实验室检查肌酸激酶同工酶及肌钙蛋白均偏高，心电图提示窦性心动过速、肢导联低电压；血液代谢筛查提示十四烯酰基肉碱及多种3-羟基肉碱均偏高；全外显子组测序结果示胎儿 HADHB基因复合杂合变异［c.739C>T（p.Arg247Cys）和c.607C>T（p.Arg203Ter，272）］。随访至3月龄，患儿受凉后出现吃奶差、精神差，再入院后出现心力衰竭、呼吸衰竭等多脏器功能障碍表现，经治疗无效后死亡。致死型MTPD较为罕见，目前无有效治疗措施，预后差。对于新生儿期出现不明原因心肌病、低血糖、酸中毒等代谢异常表现，应警惕致死型MTPD可能，新生儿期基因检测可早期明确诊断。

目的:基于转录组测序（RNA-Seq），分析比较非酒精性脂肪性肝炎（NASH）早期小鼠模型中Yes相关蛋白（YAP）阳性肝细胞和YAP阴性肝细胞的差异表达基因（DEGs），初步了解此类YAP阳性肝细胞的功能学特征。方法:蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饲喂C57BL/6小鼠2周构建NASH早期模型，对照组为正常饮食。肝组织行苏木精-伊红（HE）、天狼星红染色和病理学评分；免疫组织化学（IHC）观察YAP、p-YAP在肝组织的表达。胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心获取活率大于90%的原代肝细胞。进行YAP抗体标记、流式分选获得YAP阳性和YAP阴性肝细胞并进行RNA-Seq。测序结果用GO、KEGG和相互作用网路的分析方法筛选DEGs。RT-PCR验证模型组肝组织中YAP以及部分DEGs的表达水平。两样本均数比较采用独立样本 t检验。 结果:与对照组相比，MCD诱导小鼠2周的HE染色肝组织可见脂肪变（病理评分1.07±0.21），伴有小叶炎症（病理评分1.13±0.32）和肝细胞气球样变（病理评分0.80±0.20），天狼星红染色未见明显肝纤维化（病理学评分0.40±0.40）。IHC显示NASH早期的部分肝细胞YAP表达为阳性。RNA-Seq分析，YAP阳性和YAP阴性的肝细胞分别得到Clean reads为49 310 604条、54 820 036条。与YAP阴性肝细胞相比，YAP阳性肝细胞导致5 565个基因差异表达，包括上调基因1 662个，下调基因3 903个。上调基因的GO分析显示，嘌呤三磷酸核苷和三磷酸核苷等线粒体功能相关的代谢过程为显著富集的生物学过程（BP）；下调基因分析到显著富集的BP为嗅觉受体相关过程。KEGG分析显示，DEGs富集到292条通路，氧化磷酸化（OXPHOS）通路为显著富集信号通路。RT-PCR确认炎症因子（白细胞介素-1β、白细胞介素-6）、YAP及其靶基因（Cyr61、Ankrd1）以及OXPHOS通路的Cox5b、Sdhc基因水平显著上调，与测序结果一致。相互作用网络分析预测到8个关键基因。结论:NASH早期肝细胞代谢水平的变化可能与YAP活性增加有关。

目的:鉴定并阐述6个ACADVL新发突变的对细胞和分子功能的影响,为后期分子诊断和临床病例管理提供科学依据.创新点:本文从分子功能和结构的角度阐述6个新位点对蛋白和细胞功能的不同影响.方法:通过体外构建突变载体建立各突变的过表达细胞系,检测各细胞系脂肪酸代谢能力、线粒体呼吸链功能、线粒体产三磷酸腺苷(ATP)能力、活性氧(ROS)和凋亡水平.同时检测了新发突变对蛋白二聚体稳定性的影响并用分子动力学模拟了突变蛋白构像的改变.结论:突变(c.541C>T、c.863T>G、c.895A>G、c.1238T>C、c.1276G>A和c.1505T>A)过表达细胞系均表现出脂肪酸代谢障碍,线粒体呼吸链功能障碍,ATP产生水平下降和线粒体ROS水平上升.在无糖条件下,各细胞系的凋亡水平上升.各突变影响了极长链酰基辅酶A脱氢酶(VLCAD)蛋白二聚体的稳定性,分子动力学模拟预测每个突变均会导致VLCAD蛋白结构的发生重要构象变化.

目的 阿尔茨海默病(AD)是世界第一的神经退行性疾病,目前缺乏有效的治疗药物.研究发现,AD与2型糖尿病(T2DM)之间存在密切联系.课题组系统分析了19种糖尿病治疗复方,从中筛选出具有AD治疗作用的黄芪葛根汤,并通过网络药理学以及现代药理学基础分析探讨黄芪葛根汤治疗AD的潜在靶点及信号通路,阐述其可能的作用机制.方法 采用Aβ1-42基因诱导的秀丽隐杆线虫作为AD病理模型,探讨黄芪葛根汤的抗AD作用.从TCMSP和BATMAN-TCM数据库搜索黄芪葛根汤中2味中药的化合物及靶点,使用GeneCards、NCBI、CTD以及OMIM数据库检索AD和T2DM的靶点;通过STRING数据库构建蛋白质相互作用网络;通过cytoHubba,选择MCC对关键靶点进行分析;采用Metascape数据库对关键靶点进行聚类分析;采用Omicshare平台对关键靶点进行KEGG分析及GO分析,以获取潜在靶标与机制.结果 黄芪葛根汤共包含2味中药,14种化合物,相对应的药物靶标有113个,黄芪葛根汤、AD、T2DM共同交集靶点共31个.对交集靶点进行MCC聚类分析获得JUN,PTGS2和SIRT1等核心靶点.交集靶点可以聚类为3类,分别与过氧化物酶体增殖剂激活受体信号传导途径、发育生长和凋亡信号通路有关,这些途径和AD密切相关.通过KEGG信号通路富集筛选所得排名前三的信号通路分别为钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用和cAMP信号通路.GO分析得到主要的生物过程聚类分析包括氮化合物的细胞反应、血液循环和神经递质水平的调节;细胞组成聚类分析主要有突触后膜、突触后、突触膜;核心分子功能聚类分析包括神经递质受体活性、核糖核酸聚合酶Ⅱ特异性脱氧核糖核酸结合转录因子结合,以及乙酰胆碱结合.另外,秀丽隐杆线虫实验结果表明,黄芪葛根汤可以延缓线虫肌肉组织因过度表达Aβ1-42导致麻痹表型的AD样病理特征,其中0.5 g·L-1的抗AD活性最优.进一步实验证明黄芪葛根汤还可显著减缓泛神经元过度表达Aβ1-42导致的线虫对外源5-羟色胺超敏感的AD样病理特征.结论 黄芪葛根汤可能通过对钙离子稳态失衡、线粒体氧化应激、炎症等的调节治疗AD,且实验研究证明黄芪葛根汤对AD线虫有治疗作用.

目的 探讨参葛方抑制脂肪变性肝细胞氧化应激和线粒体功能的相关机制.方法 ①将30只雄性C57BL/6J小鼠分为正常组、模型组、参葛方治疗组(给药剂量15.75 g·kg-1·d-1),每组10只,通过蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食诱导脂肪肝模型,连续16周.参葛方治疗组于第13周行中药灌胃至结束,观察小鼠肝组织炎症、脂质沉积、过氧化水平.②体外使用0.2 mmol/L棕榈酸作用于人肝癌细胞(HepG2细胞)24 h诱导脂肪变性模型,结合沉默信息调节蛋白3(SIRT3)抑制剂(3-TYP)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)、参葛方药物血清、正常大鼠血清处理,分为对照组(Control)、模型组(PA)、参葛方组(PA+SGF)、SIRT3抑制组(PA+3-TYP)、AMPK抑制组(PA+Compound C)、参葛方+SIRT3抑制组(PA+3-TYP+SGF)、参葛方+AMPK抑制组(PA+Compound C+SGF).观察氧化应激水平[细胞活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)]、线粒体功能[腺苷三磷酸(ATP)]等指标及其对SIRT3、p-AMPK/AMPK、氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)含量的影响,电镜下观察线粒体结构.结果 ①与PA小鼠比较,PA+SGF脂质沉积、过氧化水平均降低.②与PA比较,PA+SGF的三酰甘油(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)水平降低(P<0.05),ROS、MDA水平降低(P<0.01),PGC-1α、ATP生成量增加(P<0.05),电镜下线粒体损伤减轻.而使用3-TYP和Compound C处理后以上作用均减弱.结论 参葛方可抑制氧化应激损伤、改善线粒体功能、减轻肝细胞脂肪变性,其作用机制可能与上调SIRT3、AMPK表达有关.