目的:评价琥珀酸脱氢酶(SDH)在缺氧后处理(HPC)减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其与线粒体ATP敏感性钾通道(mito-K ATP)的关系。 方法:分离成年雄性SD大鼠心肌细胞并培养48 h，采用随机数字表法分为7组( n＝24)：空白对照组(Nor组)、缺氧复氧组(H/R组)、SDHA-siRNA腺病毒+缺氧复氧组(siRNA+H/R组)、HPC组、SDHA-siRNA腺病毒+HPC组(siRNA+HPC组)、5-羟葵酸(5-HD)+HPC组和SDHA-siRNA腺病毒+5-HD+HPC组(siRNA+5-HD+HPC组)。Nor组常氧条件下持续培养195 min。缺氧复氧损伤模型制备：5%CO 2+1%O 2+94%N 2条件下缺氧45 min，复氧150 min。HPC方法：缺氧45 min时行3个循环的复氧5 min-缺氧5 min处理，继续复氧培养120 min。mito-K ATP阻断剂5-HD给药方法：缺氧30 min时加入终浓度为100 μmol/L的5-HD。各siRNA组心肌细胞成功转染SDHA-siRNA腺病毒，沉默SDHA表达。于复氧末，分别检测细胞活力、钙离子水平、SDH活性、ATP含量、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度和线粒体膜电位(MMP)。 结果:与Nor组比较，H/R组细胞活力、ATP含量和MMP降低，mPTP开放程度、钙离子水平和SDH活性升高( P<0.05)。与H/R组比较，siRNA+H/R组和HPC组细胞活力、ATP含量和MMP升高，mPTP的开放程度、钙离子水平和SDH活性降低( P<0.05)。与HPC组比较，5-HD+HPC组细胞活力、ATP含量和MMP降低，mPTP开放程度、钙离子水平和SDH活性升高，siRNA+HPC组细胞活力、ATP含量和MMP升高，mPTP开放程度、钙离子水平和SDH活性降低( P<0.05)。与siRNA+HPC组比较，siRNA+5-HD+HPC组细胞活力、ATP含量和MMP降低，mPTP开放程度和钙离子水平升高( P<0.05)，SDH活性差异无统计学意义( P>0.05)。与5-HD+HPC组比较，siRNA+5-HD+HPC组SDH活性降低，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:HPC可能通过降低SDH活性，开放mito-K ATP，减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤。

目的 探究缝隙连接蛋白(Cx)43 在舒芬太尼预处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠 40 只,随机分为缺血再灌注(I/R)组、舒芬太尼预处理(Sufen)组、线粒体ATP 敏感性钾通道(mito-KATP)特异性阻断剂 5-羟基葵酸钠(5-HD)组、舒芬太尼预处理+5-HD(SH)组,每组 10 只.利用Langendorff离体心脏灌注装置制备离体心脏灌注模型,其中I/R组持续灌注 30 min后停止灌注,然后恢复灌注 2 h;Sufen组与 5-HD组分别灌注含舒芬太尼(10 nmol/L)、5-HD(100 μmol/L)的K-H液 30 min;SH组于舒芬太尼预处理前 10 min至缺血 5 min灌注含舒芬太尼(10 nmol/L)和 5-HD(100 μmol/L)的K-H液 30 min.分别于平衡末(T1)、缺血前(T2)、再灌注末(T3)记录各组心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax).再灌注结束后,采用 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定各组心肌梗死面积,采用免疫荧光共聚焦技术检测Cx43 的平均光密度(AOD)值,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各组Cx43 mRNA表达情况,采用Western印迹法检测各组心肌组织Cx43 蛋白及磷酸化(p)-Cx43 蛋白相对表达量.结果 T3 时,与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组HR、LVSP、±dp/dtmax均下降,LVDP 均升高,差异有统计学意义(P<0.05).与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组心肌梗死面积均增大,差异有统计学意义(P<0.05).与Sufen组比较,I/R组、5-HD组、SH组Cx43 AOD值和Cx43 mRNA、Cx43、p-Cx43 蛋白相对表达量均减小,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Cx43 参与MIRI的病理生理过程,舒芬太尼预处理对于大鼠离体MIRI的保护作用机制可能是通过开放mito-KATP通道促使Cx43 蛋白表达增加来实现.

目的 评价线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATP)对帕瑞昔布减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠100只,体质量280~330 g,随机分成5组(n=20只):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、帕瑞昔布组(P组)、5-羟葵酸组(5-HD组)和5-羟葵酸+帕瑞昔布组(5-HD+P组).采用改良线栓法阻塞右侧颈总动脉2 h恢复灌注的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型.P组在缺血前15 min和再灌注12 h经静脉注射帕瑞昔布,4 mg/kg.5-HD组在缺血前1 h经静脉注射5-HD,30 mg/kg.5-HD+P组在缺血前1 h经静脉注射5-HD,30 mg/kg,余操作同P组.S组和I/R组给予等容量生理盐水.各组于再灌注24 h时,行神经功能缺陷评分后处死取脑,检测SOD、MDA、Bcl-2及Bax蛋白表达水平.结果 与S组相比,其余各组大鼠神经功能缺陷评分、MDA水平及Bax蛋白表达升高,SOD水平及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与I/R组相比,P组大鼠神经功能缺陷评分、MDA水平及Bax蛋白表达降低,SOD水平及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);与P组相比,5-HD+P组大鼠神经功能缺陷评分、MDA水平及Bax蛋白表达升高,SOD水平及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).结论

ATP敏感性钾离子通道(KATP)是一种存在于细胞膜和线粒体膜上的内向整流型钾离子通道.该通道对低氧非常敏感,通过调节生物膜电位而参与生物体一系列生理和病理作用.目前对低氧性肺动脉高压(HPAH)的研究有较长历史,但其发病机制尚未完全清楚.近年研究表明,KATP与HPAH中肺血管收缩和肺血管结构重塑关系密切,且研究结果存在一些争议.本文就KATP与HPAH关系的研究现状作一综述,为今后进一步深入研究通过KATP防治HPAH提供新思路.

目的:观察内关电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞蛋白激酶(PKC)、ATP敏感性钾通道(KATP)、线粒体膜通透性转换孔(MPTP)的影响,探讨针刺内关穴防治心血管疾病及经穴脏腑理论相关机制.方法:将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、电针内关组和电针环跳组,每组10只.电针内关组和电针环跳组在造模前,分别给予电针刺激20 min/d,共7 d.采用左冠状动脉前降支上、中1/3交界处结扎法造模,所有动物造模后予以心电图监测,结扎40 min,再灌注60 min,取心肌组织.观察PKC、内向整流钾通道(Kir6.1)、MPTP三个指标的变化及心肌细胞超微结构的改变.结果:缺血再灌注组PKC、Kir6.1较假手术组明显降低(P<0.01),MPTP较假手术组明显升高(P<0.01);电针内关组PKC、Kir6.1较缺血再灌注组及电针环跳组明显升高(P<0.01),MPTP较缺血再灌注组及电针环跳组明显降低(P<0.01);缺血再灌注组与电针环跳组组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:电针预处理内关穴通过激活PKC,增加KATP开放,抑制MPTP开放来对抗心肌缺血再灌注损伤,从而对心肌产生保护作用.

目的 评价线粒体ATP敏感性钾(mito-KATP)通道在右美托咪定减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠40只,8~12周龄,体重200~350 g.采用随机数字表法分为5组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I∕R组)、右美托咪定组(DEX组)、mito-KATP通道阻断剂5-羟葵酸组(5-HD组)和右美托咪定+5-羟葵酸组(DEX+5-HD组).采用结扎冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.DEX组再灌注前15 min腹腔注射右美托咪定5 μg∕kg;5-HD组再灌注前30 min腹腔注射5-HD 40 mg∕kg.DEX+5-HD组再灌注前30 min腹腔注射5-HD 40 mg∕kg,再灌注前15 min腹腔注射右美托咪定5 μg∕kg.于缺血前(T0)、再灌注60 min(T1)、120 min(T2)时记录心功能指标:左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp∕dtmax)和最大下降速率(-dp∕dtmax).于再灌注120 min时采集颈动脉血样,采用ELISA法检测血清CK-MB和cTnI浓度,处死大鼠,取左心室组织,确定心肌梗死体积比率.结果 与S组相比,其余各组T1,2时LVSP、+dp∕dtmax和-dp∕dtmax降低,LVEDP升高,血清CK-MB和cTnI 浓度和心肌梗死体积比率升高(P<0.05);与 I∕R 组相比,DEX 组 T1,2时LVSP、+dp∕dtmax和-dp∕dtmax升高,LVEDP 降低,血清CK-MB和cTnI浓度和心肌梗死体积比率降低, DEX+5-HD组T1,2时LVSP、+dp∕dtmax和-dp∕dtmax升高,血清CK-MB和cTnI浓度和心肌梗死体积比率降低(P<0.05),LVEDP差异无统计学意义,5-HD组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与DEX组相比,DEX+5-HD组T1,2时LVSP、+dp∕dtmax和-dp∕dtmax降低,LVEDP升高,血清CK-MB和cTnI浓度和心肌梗死体积比率升高(P<0.05).结论 右美托咪定减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的部分机制与促进mito-KATP通道开放有关.

糖尿病是脑血管疾病重要的独立危险因素,大量的临床和实验研究证实,糖尿病可加重脑缺血损伤,但其机制尚不十分清楚.线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)是位于线粒体内膜上一种重要的离子通道,在许多生理病理过程中发挥重要功能.近年来,不断有研究表明,mitoKATP对脑缺血损伤有保护作用,而糖尿病可使其启动的正常保护机制受损,mitoKATP与糖尿病合并脑缺血损伤的关系受到大家越来越多的关注.本文就mitoKATP在糖尿病合并脑缺血损伤中的作用作一综述.

目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP通道)在吡那地尔后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 SPF级健康雄性SD大鼠,16～20周龄,体重250 ～ 300 g,取离体灌注模型制备成功的心脏32个,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、吡那地尔后处理组(P组)和5-羟葵酸+吡那地尔后处理组(5-HD+P组).采用停灌40min再灌注60 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.于再灌注即刻,P组灌注含50 μmol/L吡那地尔的K-H液2 min,再灌注K-H液58 min;5-HD+P组先灌注含100 μmol/L 5-羟葵酸的K-H液5 min,随后灌注含50 μmol/L吡那地尔的K-H液2 min,再灌注K-H液53 min.于平衡灌注20 min(T1)和再灌注结束(T2)时记录HR、左室舒张末压(LVEDP)、左室舒张压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax).于T2时取心肌组织,采用TTC法确定心肌梗死面积百分比,观察心肌超微结构,行线粒体Flameng评分.结果 与C组比较,I/R组T2时HR、LVDP和+dp/dtmax降低,LVEDP、心肌梗死面积百分比和线粒体Flameng评分升高(P＜0.05).与I/R组比较,P组T2时HR、LVDP和+dp/dtmax升高,LVEDP、心肌梗死面积百分比和线粒体Flameng评分降低(P＜0.05),心肌病理学损伤减轻;5-HD+P组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与P组比较,5-HD+P组T2时HR、LVDP和+dp/dtmax降低,LVEDP、肌梗死面积百分比和线粒体Flameng评分升高(P＜0.05),心肌病理学损伤加重.结论 吡那地尔后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的全部机制与促进mito-KATP通道开放有关.

柚皮素(naringenin,Nari)具有抗氧化和抗动脉粥样硬化的效应,并能激活ATP敏感性钾离子通道(KATP)以给心脏提供保护.为了探究Nari对心脏保护的机制,本研究选取成年雄性SD大鼠为研究对象,并将大鼠分为4组:对照组、NARI组、NARI+格列本脲(GLI)组和NARI+5-羟基癸酸(5-HD)组.将实验小鼠的心脏分离,Langendorff灌流,缺血处理30 min,然后再灌注60 min,测定其左心室压力、冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及测量心肌梗死面积.结果发现,2.5 μmol/L以上浓度的Nari能够促进左心室功能恢复,冠脉流出液中LDH降低,心肌梗死面积明显减少,说明Nari可增加心肌SOD活性,并减少心肌MDA含量,同时Nari的这种心脏保护作用可被GLI和5-HD阻断.研究证明,Nari在缺血再灌注损伤时具有心脏保护作用,其机制可能与通过激活细胞和线粒体膜KATP通道发挥增强心肌抗氧化的能力有关.

目的 探究尼可地尔后处理对H9c2细胞缺氧复氧的保护机制.方法 将H9c2细胞随机分为:对照(Con)组,缺氧复氧(HR)组,尼可地尔缺氧复氧(Nic+HR)组,尼可地尔加5羟基葵盐酸缺氧复氧(Nic+5-HD+HR)组.经过缺氧复氧处理后用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞活性,Hoechst 33258检测细胞凋亡、JC-1检测线粒体膜电位、双氯荧光素染色(DCFH-DA)检测活性氧(ROS),Western blot测cleaved Caspase-3和ATP敏感的钾通道(KATP)蛋白的表达情况.结果 与缺氧复氧组比较,尼可地尔后处理可以增加H9c2细胞活性,抑制细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,减少ROS的生成,下调cleaved Caspase-3,上调KATP蛋白(均P<0.05);加入KATP阻断剂5-HD后以上作用均被阻断(均P<0.05).结论 尼可地尔后处理能够降低H9c2细胞缺氧复氧引起的细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,减轻氧化应激损伤,其作用机制与开放KATP及增加KATP蛋白表达密切相关.