JIB-04(Jumonji histone demethylase inihibitor,JIB-04)是一种泛组蛋白赖氨酸去甲基化酶抑制剂,可抑制多种肿瘤发生发展,但其具体机制仍不清楚.本文以肝癌细胞HepG2和Huh7为研究对象,探讨了 JIB-04对肝癌细胞的增殖影响,并揭示其可能的分子机制.CCK-8和EDU检测细胞增殖实验显示,JIB-04明显抑制肝癌细胞HepG2和Huh7活力,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度分别为0.7689 μmol/L及0.7392 μmol/L.流式细胞术检测细胞内ROS水平变化,结果显示,JIB-04可显著激活细胞内ROS的累积.通过谷胱甘肽(glutathione,GSH)检测试剂盒和脂质过氧化物检测试剂盒分别检测细胞内GSH和脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平发现,在2 μmol/L JIB-04处理下,HepG2和Huh7细胞内GSH分别下降88.4％和80.7％,而脂质过氧化物分别升高4.75倍和9.25倍.通过qRT-PCR和Western印迹分析发现,JIB-04显著降低铁死亡相关因子GPX4和SLC7A11的mRNA水平和蛋白质水平,同时铁死亡相关通路蛋白质MDM2明显下调,P53蛋白水平明显上调.机制研究显示,JIB-04可以使赖氨酸特异性去甲基化酶KDM4C的蛋白质水平下调约58％和51％.通过ChIP检测发现,在JIB-04处理肝癌细胞后MDM2基因启动子区域H3K9me3分别提高了 2.19倍和2.14倍,同时qRT-PCR证明,JIB-04处理肝癌细胞后MDM2 mRNA水平显著下调.综上所述,本研究初步揭示了 JIB-04可下调特异性去甲基化酶KDM4C的表达,进而影响MDM2基因启动子区域H3K9me3甲基化水平抑制MDM2基因表达,减少MDM2蛋白与P53蛋白结合,P53蛋白水平表达上调,同时,铁死亡相关蛋白质SLC7A11和GPX4的表达下调,导致细胞内GSH耗竭、ROS与脂质过氧化物积累,最终导致细胞发生铁死亡.

目的:分析赖氨酸特异性去甲基化酶6B（KDM6B）在乙型肝炎相关性肾炎（HBV-GN）患者肾组织及乙型肝炎病毒X基因（HBx）转染的人足细胞中的表达，及其在HBx介导的足细胞-巨噬细胞转分化（PMT）中的作用。方法:选取2013至2018年在上海交通大学附属第一人民医院经肾穿刺活检病理诊断为HBV-GN的48例患者肾活检标本，以30例原发性肾小球肾炎（PGN）肾活检标本及15例肾肿瘤患者癌旁正常肾组织作为对照。利用免疫荧光及免疫组化法观察HBV-GN患者肾组织KDM6B及巨噬细胞标志物F4/80的表达。分析肾组织KDM6B表达水平与HBV-GN患者临床特征的关系。Western印迹法检测足细胞中KDM6B、F4/80、主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）以及共刺激分子CD40的表达；ELISA法测定细胞上清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-6的含量；同时利用KDM6B小干扰RNA（siRNA）沉默HBx质粒转染的人足细胞中KDM6B基因表达后，Western印迹法检测细胞中KDM6B、F4/80及组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）的表达变化。结果:与正常对照组相比，HBV-GN患者肾组织KDM6B表达增加（0.022±0.004比0.006±0.002， P=0.006）。HBV-GN不同病理类型组间KDM6B阳性率差异无统计学意义（ P=0.139）。此外，在HBV-GN患者足细胞中可观察到KDM6B和F4/80的共表达。估算肾小球滤过率（eGFR）<60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白≥3.5 g/d的患者肾组织KDM6B表达分别高于eGFR≥60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白<3.5 g/d的患者（均 P<0.05）。HBx转染人足细胞后KDM6B、F4/80、MHC-Ⅱ以及CD40表达均上调（均 P<0.05），上清IFN-γ和IL-6含量均增加（均 P<0.05）；将KDM6B基因沉默后，HBx所诱导的足细胞F4/80表达下调，H3K27me3表达则上调（均 P<0.05）。 结论:HBx可通过诱导足细胞KDM6B表达启动PMT，可能参与HBV-GN局部组织免疫微环境紊乱的发生。

目的:观察微小RNA(miR)-137-3p对赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(KDM4A)的调控在坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性痛中的作用。方法:将大鼠随机分为假手术组(Sham)、CCI模型组、2 mg/kg miR-137-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-137-3p mimic鞘内注射组。术后的第14天，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测大鼠背根神经节(DRG)和脊髓(SC)中miR-137-3p及KDM4A的表达变化。于注射前及注射后的第1、3、7、14天，采用von Frey检测大鼠机械撤足阈值(PWT)和热撤足潜伏期(PWL)。蛋白质印迹法(Western blot)检测DRG和SC中KDM4A的表达变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脊髓L4~L5组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的含量；双荧光素酶报告基因法检测miR-137-3p与KDM4A的靶向关系。应用GraphPad Prism 8.2.1软件，对数据进行配对 t检验、ANOVA单因素方差分析及双因素方差分析等方法分析。 结果:(1)与Sham组比较，miR-137-3p在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(0.363±0.130、0.490±0.099)显著低于Sham组(1.013±0.164、0.950±0.120)，且差异有统计学意义( t＝8.772、8.425， P<0.05)，但KDM4A在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(3.113±0.083、3.613±0.136)高于Sham组(1.025±0.158、0.975±0.198)，差异有统计学意义( t＝33.020、31.060， P<0.01)。(2)与Sham组大鼠机械撤足阈值(1 d，23.220±5.262；3 d，22.790±5.764；7 d，23.220±5.262)和热撤足潜伏期(1 d，11.617±0.518；3 d，11.345±0.867；7 d，11.645±0.588)比较，CCI组机械撤足阈值(1 d，10.269±2.422；3 d，6.484±2.314；7 d，4.434±2.273)热撤足潜伏期(1 d，8.061±0.123；3 d，6.661±0.298；7 d，5.067±0.335)显著下降( F＝7.841， P<0.05； F＝162.900， P<0.01)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著促进大鼠机械撤足阈值(1 d，15.302±8.044；3 d，13.891±5.894；7 d，11.006±2.284)和热撤足潜伏期(1 d，10.995±0.139；3 d，9.972±0.336；7 d，8.522±0.322)的上升( F＝12.420， P<0.01； F＝80.300， P<0.01)，抑制KDM4A的表达(DRG中，1.554±0.071比2.698±0.160， t＝15.672， P<0.05；SC中，1.684±0.059比3.006±0.088， t＝5.223， P<0.05)。(3)与Sham组(153.600±15.600；150.900±6.302)比较，CCI组大鼠DRG和SC中BDNF表达水平(354.400±13.020；350.700±26.850)显著上升( t＝4.673， P<0.05； t＝1.981， P<0.05)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著抑制BDNF的产生(188.000±5.685， t＝5.767， P<0.05；182.200±4.983， t＝20.034， P<0.05)。(4)与miR-scramble组相比，miR-137-3p mimic转染可显著降低KDM4A野生型载体的荧光素酶报告基因的荧光强度(1.002±0.080比0.486±0.063， t＝11.290， P<0.05)。 结论:miR-137-3p通过调控大鼠背根神经节和脊髓背角中KDM4A的表达参与神经病理性痛。

结直肠癌细胞中组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）表达增高，并且LSD1与其发生、发展、增殖、侵袭和转移密切相关。LSD1是一种去甲基酶，其功能依赖黄素腺嘌呤二核苷，能特异性催化组蛋白赖氨酸的去甲基化反应，通过使赖氨酸H3第4位和第9位发生去一甲基、二甲基反应（H3K4me、H3K4me2、H3K9me、H3K9me2），进而调控靶基因的表达。靶向抑制LSD1已被证实能够发挥显著的抗肿瘤效应，但由于肿瘤涉及多个中心和因素，后期的研究发现单一抑制LSD1并不能完全有效杀死肿瘤细胞，并且LSD1催化底物的特异性很大程度上依赖于与其结合的协同因子并形成复合体。基于LSD1的双靶点抑制剂在抑制肿瘤方面呈现出更加显著的效果，所以寻找LSD1结合的协同因子可能会为多靶点抑制剂的研究提供基础。

目的:探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶4A(KDM4A)在结直肠癌发生发展中的作用及可能的机制。方法:2019年1月至2019年6月，构建高(KDM4A)、低表达(ShKDM4A#1，ShKDM4A#2)KDM4A的结直肠癌细胞株(购自美国典型菌种保藏中心公司)，同时设立对照组(NC，ShNC)。通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测KDM4A对细胞增殖的影响。利用细胞侵袭小室法(Transwell)检测KDM4A对结直肠癌细胞迁移/侵袭能力的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测高、低表达KDM4A后细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。两组间统计学差异通过双尾 t检验进行分析。 结果:KDM4A高表达组与对照组比较，细胞增殖率明显提高[(50.233±3.430)%和(35.417±4.501)%， t＝3.900、2.942， P<0.05]。低表达KDM4A与对照组比较，细胞增殖能力明显受抑制[(58.056±2.750)%和(57.386±8.228)%， t＝4.558、4.419， P<0.05]。Transwell实验显示高表达KDM4A后穿孔细胞数[(304.000±62.466)个]比对照组[(64.000±20.833)个]增多( t＝5.154， P<0.01)；低表达KDM4A后穿孔细胞数[(47.333±13.573)个]较对照组[(93.667±18.874)个]减少( t＝2.819， P<0.05)。KDM4A可以正向调节Cyclin D1和MMP-9的蛋白表达。 结论:KDM4A在结直肠肿瘤发生发展中起到重要作用，其机制可能是通过调节Cyclin D1和MMP-9的表达。

赖氨酸去甲基化酶5C(lysine demethylase 5C,KDM5C)可以催化组蛋白H3上第4位赖氨酸残基二甲基和三甲基(histone H3 lysine 4 di-/trimethylation,H3K4me2/3)去甲基化为H3K4me1.KDM5C主要在人的大脑和骨骼肌中表达,其编码的蛋白质参与各种生物学效应.KDM5C与X连锁智力迟钝有关,在神经系统疾病中发挥重要作用;KDM5C在肿瘤中是一把双刃剑,具有促癌和抑癌的特性.KDM5C在前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、膀胱癌、肝细胞癌、食管癌、鼻咽癌、胃癌、肺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中过表达并促进肿瘤生长,在肝内胆管癌、子宫颈癌、套细胞淋巴瘤和甲状腺乳头状癌中低表达,在肾透明细胞癌和前体B细胞急性淋巴细胞白血病中易失活突变,并与不良预后相关,在乳腺癌中发挥双重作用.本文就KDM5C在疾病中的功能研究做一简述.

赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶(lysine-specific histone demethylase,LSD)是真核生物中关键的表观遗传调控因子,在真菌中能够执行组蛋白特定位点上赖氨酸的去甲基化,调控多个基因的表达,从而影响多种次级代谢产物的合成.本研究通过对蛹虫草LSD基因(CmLSD)编码蛋白的生物信息学分析,发现蛹虫草CmLSD蛋白具有典型JmjC功能域,可能参与组蛋白H3、H4的去甲基化修饰.进一步对蛹虫草菌株 Cm01 进行 CmLSD 基因的过表达和敲除研究,发现该基因能够影响蛹虫草的生长和分生孢子的产生,以及腺苷、虫草素的分泌.

目的 探讨赖氨酸特异性去甲基化酶 1(lysine-specific demethylase 1,Lsd1)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)发育及活化的影响.方法 利用条件性敲除胸腺T细胞中Lsd1 的C57BL/6 小鼠(Lsd1fl/flLck-Cre),取对照组及敲除组小鼠胸腺、脾和淋巴结,通过流式细胞术检测Treg的数量和比例,并统计效应Treg(activated effector Treg cell,eTreg)和静息Treg(naive-like central Treg cell,cTreg)比例(eTreg/cTreg)的变化.结果 与对照组相比,敲除组小鼠胸腺指数减小,胸腺中CD4+ T细胞减少,但Treg的数量和比例增加.在外周,脾和淋巴结中Treg的比例增加,eTreg/cTreg比值增加.结论 条件性敲除T细胞中Lsd1 促进胸腺中Treg的发育,并可能引起脾和淋巴结中Treg的活化.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)Hotair在慢性肾脏病(CKD)小鼠模型肾脏纤维化中的作用及其机制.方法 采用随机数字表法将36只小鼠分为对照组、CKD组、CKD+短发夹RNA-对照(sh-Ctrl)组、CKD+短发夹RNA-Hotair(sh-Hotair)组,每组9只.对照组喂食正常饲料,其余3组均予0.2％腺嘌呤饲料喂养造模.造模6周后,CKD+sh-Ctrl组和CKD+sh-Hotair组分别予尾静脉注射100μL(1011基因拷贝)包装了对照shRNA和Hotair-shRNA的腺相关病毒,对照组和CKD组予尾静脉注射100 μL 0.9％氯化钠注射液.观察8周后处死,检测血清肌酐、尿素氮水平,取肾组织行HE染色和Masson染色观察肾脏纤维化情况.采用qRT-PCR法检测肾皮质Hotair、多梳抑制复合体2(PRC2)复合物[Zeste增强子同源物2(EZH2)、Zeste12同源物抑制因子(SUZ12)、胚胎外胚层发育蛋白(EED)]和赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)mRNA表达水平,Western blot法检测肾皮质纤维化相关蛋白胶原蛋白1A1(COL1A1)、胶原蛋白4A1(COL4A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cad-herin)的表达水平,并检测PRC2复合物和LSD1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,CKD组小鼠体重下降、肾功能恶化,出现肾脏纤维化,肾皮质Hotair表达升高;与CKD+sh-Ctrl组比较,CKD+sh-Hotair组小鼠血清肌酐、尿素氮水平均降低(均P＜0.01),病理检查显示肾脏纤维化程度减轻,肾皮质Hotair表达下降(P＜0.01).与对照组比较,CKD组小鼠COL1A1、COL4A1和α-SMA蛋白表达水平均增加,E-cadherin表达水平减少,PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1 mRNA和蛋白表达水平均升高(均P＜0.01).与CKD+sh-Ctrl组比较,CKD+sh-Hotair组小鼠COL1A1、COL4A1 和α-SMA蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平恢复,PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1 mRNA和蛋白表达水平均下降(均P＜0.01).结论 lncRNA Hotair在CKD小鼠模型中表达升高,敲低Hotair可缓解肾脏纤维化,可能与Hotair作为PRC2和LSD1的分子支架介导的表观遗传修饰相关.

组蛋白的共价修饰包括乙酰化、甲基化在基因表达调控上起着重要的作用. 组蛋白H3 的N端赖氨酸(Lysine,K)修饰最为多样和重要,K4(代表 4位赖氨酸)、K9 和K27 等为甲基化修饰位点,而K9、K14 和K27 等为乙酰化修饰位点. 组蛋白乙酰化修饰拥有基因激活效应,而甲基化修饰则存在位点差异[1] . 甲基化的赖氨酸的残基以及甲基化的状态(单甲基化、二甲基化、三甲基化)能够促进或者抑制基因的转录[2] . 甲基转移酶和去甲基化酶动态调控组蛋白甲基化.