目的:研究利拉鲁肽(Li)对转化生长因子β 1(TGF-β 1)诱导的上皮间质转化(EMT)的作用及其可能机制。 方法:本研究为实验研究。培养人Ⅱ型肺泡上皮(A549)细胞，药物处理分为对照组、TGF-β 1组、TGF-β 1+Li(125 nmol/L)组和Li组(125 nmol/L)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力；显微镜下观察并分析细胞形态学变化；免疫荧光观察细胞内紧密连接蛋白1(ZO-1)、Vimentin表达情况；Western blot检测各组ZO-1、Vimentin和Fibronectin表达及p-p38、p38、p-Erk、Erk蛋白含量。 结果:Transwell实验结果显示，Li可以抑制TGF-β 1诱导的A549细胞迁移；细胞形态学结果显示，Li可以减轻TGF-β 1诱导的A549细胞伸长，呈间充质化细胞的"纺锤样"形态；免疫荧光双标结果显示，Li抑制TGF-β 1诱导的A549细胞ZO-1荧光强度下调以及Vimentin荧光强度的上调；Western blot结果显示，Li可以减少TGF-β 1诱导的A549细胞表型转化标志物ZO-1的下调，显著抑制Vimentin和Fibronectin水平上调及p38和Erk的磷酸化水平。 结论:Li可抑制TGF-β 1诱导的A549细胞EMT，其机制可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶通路p38、Erk的激活有关。

目的:探讨幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）根除后早期胃癌的临床病理学特征。方法:回顾性收集2013—2021年解放军联勤保障部队第九八九医院平顶山医疗区（原第一五二中心医院）26例HP根除后胃癌和45例HP未根除胃癌的临床资料，观察其组织形态学特征和免疫表型，比较2组患者的临床病理学特征，并结合文献进行探讨。结果:根除HP后胃癌患者男20例，女6例；中位年龄65岁（范围53~77岁）；胃上部12例，胃中部4例，胃下部10例。肿瘤中位最大径12 mm（范围4~29 mm）。巴黎分型0~Ⅱa型4例，0~Ⅱb型4例，0~Ⅱc型18例。白光内镜观察癌灶呈微红色至微黄色，12例癌灶边界清楚；14例癌灶边界欠清楚，并有胃炎样改变，但通过窄带成像放大观察，仍可发现不规则微血管结构和微表面结构异常，以及相对可见的棘状边界。形态学上，高分化管状腺癌20例，高~中分化管状腺癌4例，高分化管状腺癌伴乳头状腺癌2例。与HP未根除胃癌相比，HP根除后胃癌的主体病变癌细胞核质比<50%、癌表面正常上皮覆盖、癌表面轻度不典型性上皮覆盖、癌组织内非癌腺体伸长现象和癌性腺体上皮下进展的比例高（ P<0.05）。细胞表型为胃型6例，肠型4例，胃肠混合型16例。 结论:HP根除后早期胃癌临床上更为隐匿，多为分化型管状腺癌。癌细胞异型度降低和癌组织表面覆盖正常上皮或轻度不典型性上皮是HP根除后胃癌的重要形态学特征。理解和识别这些形态学特征有助于作出正确的内镜诊断和病理诊断。

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的条件培养基对人永生化Müller细胞系MIO-M1细胞增生、黏附和分化的作用。方法:BMSCs传至第3代进行成骨、成软骨及成脂诱导培养基诱导分化，并分别使用茜素红、阿利辛蓝及油红O染色进行分化鉴定；采用流式细胞仪检测细胞中间充质干细胞标志物CD73、CD90和CD105以及造血干细胞标志物CD34、CD45和人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达。采用免疫荧光染色法检测MIO-M1细胞中Müller细胞标志物SOX9、谷氨酰胺合成酶(GS)、vimentin和胞内视黄醛结合蛋白(CRALBP)，视网膜干细胞标志物SOX2、nestin和CHX10，以及细胞增生标志物细胞周期蛋白D3(CCND3)的表达。将MIO-M1细胞分为标准培养基组、293T条件培养基组和BMSC条件培养基组，分别在标准培养基、293T培养上清液和BMSC培养上清液中培养。定量分析各组细胞面积、圆度、伸长系数、周长等形态参数；采用流式细胞仪检测细胞周期，采用成球实验和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测细胞增生情况。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组培养上清液中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的表达；采用荧光定量PCR法检测各组细胞中VCAM-1 mRNA表达。采用免疫荧光染色法和荧光定量PCR法分别检测各组细胞诱导分化培养后视网膜神经元标志物蛋白激酶C(PKCα)、Rhodopsin、微管相关蛋白2(MAP2)和β-微管蛋白(Tuj1)的表达变化。结果:培养的BMSCs高表达CD73、CD90和CD105，低表达CD34、CD45和HLA-DR，并可成功诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。MIO-M1细胞表达SOX9、GS、vimentin、CRALBP、SOX2、CHX10、nestin和CCND3。与标准培养基和293T条件培养基组比较，BMSC条件培养基组的MIO-M1细胞形态发生改变，形成细长的纺锤形或多极形态，且细胞面积减少，伸长系数增加，圆度降低，差异均有统计学意义( F＝6.973、12.370、6.311，均 P<0.01)；与标准培养基和293T条件培养基组比较，不同时间点BMSC条件培养基组MIO-M1细胞形成的神经球面积明显增大，差异均有统计学意义( F组别＝134.300， P＝<0.001； F时间＝82.910， P<0.001)；与标准培养基和293T条件培养基组比较，BMSC条件培养基组MIO-M1细胞的EdU阳性率和细胞增生指数均显著提高，差异均有统计学意义( F＝6.973、74.110，均 P<0.05)；与标准培养基和293T条件培养基组比较，BMSC条件培养基组的细胞上清液中VCAM-1蛋白质量浓度和细胞中的VCAM-1 mRNA相对表达量均显著升高，差异均有统计学意义( F＝13.720、7.896，均 P<0.05)；MIO-M1细胞在分化条件下，BMSC条件培养基组的MIO-M1细胞在mRNA水平的PKCα、Rhodopsin、Tuj1和MAP2相对表达量较标准培养基组和293T条件培养基组均明显升高，差异均有统计学意义( F＝14.490、5.424、14.330、7.405，均 P<0.05)。 结论:BMSC条件培养基可以改变Müller细胞的形态，并促进其增生、黏附和向视网膜神经元的分化。

例1 　男，34岁，因右腹部环状红斑后色素脱失伴痒5个月于2020年7月7日就诊。就诊前5个月，患者右腹部出现小片状红斑，自觉瘙痒，红斑逐渐向周围缓慢扩大，中间红斑消退呈白斑，白斑处瘙痒消失，无感觉减退或麻木感。起疹前局部皮肤无外伤、药物注射及化学试剂接触史。既往体健。母亲及外祖父有寻常型白癜风病史。体检：各系统检查无异常。皮肤科情况：右腹部见一约6.0 cm × 7.5 cm色素脱失斑，表面无鳞屑，质软；白斑两侧及下方边缘见条索状隆起性红斑，上覆少许鳞屑，Auspitz征阴性（图1A）。取红斑和白斑交界处皮损行组织病理检查，显示表皮角化过度伴角化不全，棘层增生肥厚，表皮突伸长增宽，棘细胞间明显水肿，较多淋巴样细胞外渗，基底细胞灶状液化变性，黑素细胞明显减少；真皮浅层及毛囊周围见片状淋巴细胞及组织细胞浸润，未见异形淋巴细胞（图1B、1C）。免疫组化：白斑处Melan-A（-），红斑处Melan-A灶状（+）；CD4表皮内散在（+），真皮浅层（++）（图1D）；CD8表皮内（++），真皮浅层及毛囊周围（+）（图1E）。诊断：伴有炎症性隆起边缘的白癜风（vitiligo with inflammatory raised borders，VIRB）。治疗：给予0.1%他克莫司软膏及丙酸氟替卡松乳膏交替外用，1周后红斑全部消退，瘙痒消失。治疗2个月后红斑未复发，白斑无明显变化（图1F）。

目的:探究 18F-脱氧葡萄糖(FDG)PET/CT影像组学特征预测肺腺癌患者程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)表达水平的临床应用价值。 方法:回顾性纳入2017年1月至2019年1月间北京大学肿瘤医院核医学科101例病理确诊且治疗前行 18F-FDG PET/CT检查的肺腺癌患者(男43例、女58例，中位年龄60岁)。免疫组织化学检测PD-L1表达阳性44例，阴性57例；分为训练组(71例)和验证组(30例)。分别提取患者临床病理资料、PET/CT影像组学特征、PET传统代谢参数、CT征象，将其纳入模型，使用过滤法和嵌入法进行特征选择。基于logistic回归、随机森林、XGBoost与轻量梯度提升机(LightGBM)，分别进行训练并评估预测效果，优化得出预测PD-L1水平的最佳模型参数及相应受试者工作特征曲线下面积(AUC)。 结果:对于PD-L1表达，各模型均有一定的预测效果，以LightGBM模型最优，其对阳性和阴性的预测精确率分别为0.85和0.76。将临床资料+CT信息纳入LightGBM，精确率、召回率、F1指数在阳性组和阴性组中分别为0.71、0.67、0.69和0.69、0.73、0.72，准确性为0.70，AUC为0.79；相应地，临床资料+PET预测模型的精确率、召回率、F1指数在阳性组和阴性组中分别为0.79、0.73、0.76和0.75、0.80、0.77，准确性为0.77，AUC为0.80；临床资料+CT+PET预测模型的精确率、召回率、F1指数在阳性组和阴性组中分别为0.85、0.73、0.79和0.76、0.87、0.81，准确性为0.80，AUC为0.83。从最佳预测模型(临床资料+CT+PET)中筛选出的重要特征包括最大标准摄取值(SUV max)、标准摄取峰值(SUV peak)、CT特征_二维最大径、PET特征_形状伸长、PET特征_灰度共生矩阵相关等。 结论:联合临床资料、PET/CT影像组学特征、传统代谢参数可以有效预测PD-L1表达水平，辅助临床筛选免疫治疗获益人群。

肥胖的病因研究和干预目前已逐渐聚焦于中枢，尝试从源头上遏制肥胖的发生，下丘脑炎症在肥胖发生中一直是比较关注和悬而未决的科学问题。近期研究发现下丘脑炎症不仅可以导致能量失衡，同时也加重中枢胰岛素抵抗和瘦素抵抗，进而使周围组织脂肪蓄积，导致肥胖发生发展。同时高脂饮食诱导的下丘脑炎症先于体重增加和外周组织炎症发生，可能是饮食诱导的机体代谢异常的启动因素和助燃器。而下丘脑炎症的发生主要伴随着一系列复杂的能够快速激活的神经细胞，其中主要包括小胶质细胞、星型胶质细胞及伸长细胞，这些细胞是维持下丘脑代谢稳态及复杂调节网络的重要组成部分。并且研究也发现多种减重手段(减重手术、靶向药物、粪菌移植等)都能改善下丘脑炎症水平，因此，了解下丘脑炎症的作用机制以及不同神经细胞对肥胖的调控至关重要，有望将来找到干预和治疗肥胖更加有效和安全的方法。

目的:探究细胞分裂周期蛋白42（cell division cycle 42，CDC42）对牙根发育的影响及其对上皮根鞘（Hertwig root sheath，HERS）细胞增殖与迁移的调控作用。方法:采用免疫荧光追踪CDC42在小鼠出生后5 d（postnatal day 5，P5；P3、P7、P14含义依此类推）、P7、P14磨牙牙根的表达情况。将9只8周龄C57BL/6J雄鼠按简单随机抽样法分为3组（每组3只），取P3 C57BL/6J乳鼠牙胚于气-液环境下培养1 d后植入小鼠肾被膜下观察牙根发育情况。对照组在小鼠肾被膜下仅植入牙胚，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）组植入牙胚及吸附PBS的凝胶珠，ML141组植入牙胚及吸附CDC42抑制剂ML141的凝胶珠。通过慢病毒转染敲低HERS细胞中Cdc42表达，进行细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测、胸腺嘧啶核苷类似物（5-ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU）检测以及划痕实验。对迁移的细胞进行高尔基体（GM130）和细胞骨架（F-actin）免疫荧光染色。通过CCK-8和EdU检测比较对照组和敲低组的细胞增殖活性，通过划痕实验比较对照组和敲低组的细胞迁移率。结果:CDC42在牙根发育中表达于HERS上皮、高度极化的成釉上皮和成牙本质细胞，以及临近的牙乳头和牙囊细胞中。肾被膜移植结果显示，ML141组牙根长度［（0.61±0.09）mm］显著短于对照组［（1.03±0.19）mm］（ P=0.007）和PBS组［（0.98±0.10）mm］（ P=0.021）。慢病毒转染后，敲低组Cdc42相对表达量（0.31±0.33）显著低于对照组（1.05±0.08）（ t=15.38， P<0.001），敲低效率接近70%。转染后3、4、5 d，敲低组细胞活性（分别为0.87±0.04、0.96±0.10、0.59±0.06）均显著低于对照组（分别为1.09±0.13、1.55±0.32、1.10±0.09）（ t=3.16， P=0.016； t=4.23， P=0.002； t=5.08， P<0.01），敲低组细胞增殖率［（1.65±0.64）%］显著低于对照组［（4.02±1.12）%］（ t=5.21， P<0.001）。Cdc42敲低后，敲低组24和48 h细胞迁移率［分别为（45.1±4.2）%、（56.4±8.3）%］均显著低于对照组［分别为（63.8±7.4）%、（80.2±7.8）%］（ t=3.78， P=0.019； t=3.62， P=0.023）。对照组中迁移细胞中高尔基体沿迁移方向定向分布，而在敲低组中高尔基体沿细胞核周围分布。 结论:CDC42在牙根发育中对牙根长度调节具有重要作用，其可能通过影响HERS细胞的迁移与增殖介导牙根伸长。

cdc73基因编码粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces Pombe)RNA聚合酶Ⅱ辅助因子Cdc73,参与G2期检查点激活并调控细胞周期.但cdc73基因缺失对细胞有丝分裂动力学的调控尚不清楚.本研究采用活细胞成像、荧光蛋白标记技术探究粟酒裂殖酵母cdc73基因缺失后对细胞有性生殖和细胞有丝分裂中微管、肌动蛋白、线粒体和组蛋白动力学的影响.结果表明:在有性生殖中,cdc73基因缺失会导致子囊孢子长度增加14.23％,产4个孢子数量的细胞减少64.08％;活细胞成像结果分析发现,在有丝分裂中,分裂后期微管伸长的长度缩短11.21％,伸长时间减少17.39％;肌动蛋白环形成和收缩速率分别降低33.33％和26.09％,形成和收缩时间分别延长58.00％和40.38％;同时,肌动蛋白环、线粒体和组蛋白表达量都增加.本研究揭示了cdc73基因缺失可抑制有丝分裂中纺锤体的伸长,延缓肌动蛋白环的形成与收缩,为进一步探寻Cdc73蛋白在细胞分裂中参与调控微管和肌动蛋白动力学功能提供了一定的科学依据.

目的:沉默调节蛋白家族(sirtuins,SIRT)是一类以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)为辅酶的第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶.YME1样三磷酸腺苷酶(YME1 like 1 ATPase,YME1L1)对于维持线粒体形态、功能和可塑性至关重要.视神经萎缩相关蛋白 1(optic atrophy 1,OPA1)主要介导线粒体融合.本研究拟探索乳腺癌内分泌治疗耐药中SIRT3的表达变化,SIRT3与YME1L1、OPA1之间的关系及在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用机制.方法:使用4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)诱导耐他莫昔芬(tamoxifen,TAM)的MCF-7/TAM.采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,验证耐药性.采用透射电镜和免疫荧光染色(immunofluorescence staining,IF)实验观察线粒体形态.通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测SIRT3、OPA1的基因表达和蛋白水平.采用JC-1染色检测线粒体膜电位,采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色检测活性氧,验证线粒体功能.采用RNA干扰技术在耐药细胞中敲低SIRT3,采用过表达质粒在亲本细胞中过表达SIRT3及YME1L1基因野生型(wild type,WT)、模拟乙酰化状态突变型(mutant,MUT K237Q)、模拟去乙酰化状态突变型(MUT K237R).采用免疫沉淀技术(immunoprecipitation assay,IP)及IF分析SIRT3与YME1L1之间的相互作用.结果:RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示,SIRT3在耐药细胞中的表达显著高于亲本细胞.在亲本细胞中过表达SIRT3,乳腺癌细胞对TAM的敏感性出现下降.在耐药细胞中敲低SIRT3,耐药细胞对TAM的敏感性增强.DHE染色结果显示,在相同浓度的TAM处理下,耐药细胞中ROS水平低于亲本细胞;透射电镜及IF结果显示,相较于亲本细胞,耐药细胞的线粒体伸长;Western blot检测结果显示,耐药细胞L-OPA1蛋白表达水平高于亲本细胞.在亲本细胞中过表达SIRT3,线粒体功能增强,其形态较对照组更长;此外,L-OPA1表达上调;而在耐药细胞中敲低SIRT3后,得到相反结果.为了进一步验证SIRT3如何调控OPA1蛋白,影响线粒体的形态及功能,促进乳腺癌耐药,我们在亲本细胞中过表达YME1L1(野生型及突变型质粒),结果显示,过表达模拟去乙酰化状态的YME1L1与过表达SIRT3结果相似,过表达乙酰化状态的YME1L1得到与敲低SIRT3相似的结果.IP实验证实,SIRT3与YME1L1在乳腺癌细胞中存在相互作用;在SIRT3不同表达水平下,YME1L1乙酰化水平不同.IF实验显示,在MCF-7细胞中YME1L1与SIRT3存在共定位.结论:SIRT3在耐TAM的乳腺癌细胞中高表达.SIRT3通过去乙酰化YME1L1上调L-OPA1表达,进而促使线粒体融合并增强线粒体功能,促进乳腺癌对TAM耐药.

为探究七叶一枝花的种子萌发生理机制,该文从种胚形态上对七叶一枝花种子萌发过程的时期进行了划分,并分析了不同时期种子内源激素含量及相关酶活性的变化规律.结果表明:(1)根据种胚形态可将种子萌发过程细分为 8 个时期,即种胚未萌动时期(S1 期)、心形胚时期(S2 期)、种胚膨大时期(S3 期)、胚根未突破种皮时期(S4 期)、子叶柄伸长和胚根突破种皮时期(S5 期)、下胚轴突破种皮时期(S6 期)、上胚轴伸长时期(S7 期)、胚根伸长时期(S8 期).(2)不同萌发时期种子的α-淀粉酶活性均明显高于β-淀粉酶.(3)超氧化物歧化酶(SOD)活性在S5 期最高,S1 期最低;过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性随种子萌发进程总体呈上升趋势,可溶性蛋白含量随种子萌发进程先下降后升高.(4)吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)含量随种子萌发进程整体呈下降趋势;1-氨基环丙烷羧酸(ACC)、茉莉酸(JA)、油菜素内酯(BRs)随种子萌发进程整体呈上升趋势;细胞分裂素类(CTKs)含量无显著变化;IAA/ABA和GA3/ABA随种子萌发进程呈先下降后上升趋势,而 CTKs/ABA 则不断升高.(5)ABA、IAA、GA3含量与胚率呈负相关,而ACC、JA、BRs、POD、CAT、β-淀粉酶活性与胚率呈正相关.综上认为,七叶一枝花在不同时期种子内源激素含量及相关酶活性各不相同,其中α-淀粉酶活性、POD活性可能与种胚胚根伸长有关,GA3可能影响种胚形成,而ABA则可能抑制种胚的生长发育.