目的:探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）表达对常规1型树突状细胞（conventional type 1 dendritic cell，cDC1）的瘤内富集及免疫应答功能的影响。方法:采用免疫荧光染色检测2016年1月至2017年6月北京大学人民医院行肝切除术的111例HCC患者肿瘤组织中cDC1瘤内富集及COX-2表达水平，将HCC患者分为cDC1浸润型与cDC1缺失型，分析HCC细胞表达COX-2与cDC1瘤内浸润的相关性。利用HCC单细胞转录组测序数据检验COX-2编码基因 PTGS2与cDC1亚群比例的相关性。回顾性分析HCC肿瘤组织中cDC1浸润情况与患者临床特征及预后的相关性。通过体外造血干细胞（HSC）向cDC1诱导分化及流式分选，获得HSC来源cDC1，与HCC细胞系共培养后进行转录组测序，并用COX-2选择性抑制剂塞来昔布抑制HCC细胞系的COX-2表达，通过FITC-葡聚糖摄取实验、流式检测、Luminex多因子检测探索HCC中COX-2表达对cDC1的抗原摄取、共刺激分子表达和细胞因子分泌功能的影响。 结果:免疫荧光染色提示cDC1缺失型（ n=73）的HCC肿瘤组织中COX-2表达水平显著高于cDC1浸润型（ n=38）（ P=0.004 2）。单细胞转录组测序数据分析提示 PTGS2高表达的HCC肿瘤组织中cDC1亚群比例显著降低。cDC1浸润型的HCC患者总体生存率（ P=0.037）、无瘤生存率（ P=0.048）优于cDC1缺失型。cDC1与HCC共培养后抗原摄取功能、共刺激分子表达、细胞因子分泌的免疫应答功能受到抑制，塞来昔布可改善cDC1的免疫应答功能。 结论:HCC中cDC1瘤内富集与患者预后良好相关。HCC中表达COX-2可能抑制cDC1向瘤内浸润，抑制cDC1抗原摄取、共刺激分子表达及细胞因子分泌的免疫应答功能。靶向COX-2的抑制剂可逆转HCC对cDC1的功能抑制。

cdc73基因编码粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces Pombe)RNA聚合酶Ⅱ辅助因子Cdc73,参与G2期检查点激活并调控细胞周期.但cdc73基因缺失对细胞有丝分裂动力学的调控尚不清楚.本研究采用活细胞成像、荧光蛋白标记技术探究粟酒裂殖酵母cdc73基因缺失后对细胞有性生殖和细胞有丝分裂中微管、肌动蛋白、线粒体和组蛋白动力学的影响.结果表明:在有性生殖中,cdc73基因缺失会导致子囊孢子长度增加14.23％,产4个孢子数量的细胞减少64.08％;活细胞成像结果分析发现,在有丝分裂中,分裂后期微管伸长的长度缩短11.21％,伸长时间减少17.39％;肌动蛋白环形成和收缩速率分别降低33.33％和26.09％,形成和收缩时间分别延长58.00％和40.38％;同时,肌动蛋白环、线粒体和组蛋白表达量都增加.本研究揭示了cdc73基因缺失可抑制有丝分裂中纺锤体的伸长,延缓肌动蛋白环的形成与收缩,为进一步探寻Cdc73蛋白在细胞分裂中参与调控微管和肌动蛋白动力学功能提供了一定的科学依据.

目的 探讨高细胞亚型甲状腺乳头状癌(TC-PTC)临床病理学特征,并研究高细胞亚型PTC蛋白质谱,通过生物信息学分析,筛选与鉴定高细胞亚型甲状腺乳头状癌差异表达蛋白,寻找TC-PTC潜在生物标志物.方法 收集2021年1月至2021年6月期间新疆医科大学附属肿瘤医院67例甲状腺乳头状癌患者术后标本,经病理诊断确诊,TC-PTC17例,经典型甲状腺乳头状癌(CPTC)50例,对比分析两组的临床病理学特征.同时收集其中17例TC-PTC,15例CPTC新鲜手术切除标本,另收集15例良性甲状腺结节(BTN)新鲜标本,应用蛋白质非标记定量技术(la-bel-free)结合液相色谱与串联质谱技术(LC-MS/MS),鉴定和筛选高细胞亚型甲状腺乳头状癌差异表达蛋白,GO及KEGG分析差异蛋白的生物学功能及富集的信号通路.结果 TC-PTC组更易出现多发病灶、侵犯甲状腺被膜及淋巴结转移,差异无统计学意义(P＞0.05),TC-PTC组具有更大的肿瘤体积,差异有统计学意义(P＜0.05).3组共分离和鉴定肽段数34 294个,蛋白质总数4 739个.与CPTC组及BTN组相比,TC-PTC组显著高表达的蛋白14个(FC≥1.3,P＜0.05),其中6个蛋白是TC-PTC特定表达蛋白,分别是:NRP1、MTM1、COG1、SRP19、PRR15、CDC2L5.利用GO及KEGG通路分析,发现差异蛋白主要参与代谢、基因表达及翻译、生物合成等生物学过程,发挥结合、酶调节活性、催化活性等分子功能;主要富集于核糖体生物合成、蛋白酶体系统、剪接体组成、磷酸戊糖途径等信号通路.进一步根据文献复习,我们筛选出4个可能与TC-PTC发生进展相关的蛋白,分别是:CD73、SNRPA1、NAPRT、NRP1.结论 TC-PTC临床生物学行为更具有侵袭性和更高的临床T分期;TC-PTC与CPTC、BTN间存在高表达的差异蛋白,筛选的差异蛋白可能成为高细胞亚型甲状腺乳头状癌潜在分子标志物和治疗靶点.

采用生物信息学方法对人CDC73 (cell division cycle 73)基因编码蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域、信号肽区域、二级结构、三级结构、蛋白质之间的相互作用、亚细胞定位进行预测分析.使用多种分析软件对人CDC73基因编码蛋白进行预测分析.研究可知,人CDC73基因属于抑癌基因,该基因编码一个由531个氨基酸组成的肿瘤抑制因子Parafibromin,其等电点为9.63,半衰期为30 h且在哺乳动物中高度保守;二级结构预测发现13个α螺旋和10个β折叠片层,三级结构预测结果的可靠性达69.01％,亚细胞定位主要分布于细胞质及细胞核.由本研究可知,人CDC73基因编码蛋白是一个存在核定位序列的不稳定亲水蛋白,在细胞内广泛分布并参与多种生命活动过程,且能够抑制肿瘤的产生.对人CDC7基因编码蛋白结构和功能的预测分析,可为其进一步的研究提供一定的理论依据,也为相关疾病的诊治提供新的思路.

目的 阐述与CDC73基因突变相关的甲状旁腺疾病的临床特征与遗传学特点.方法 检索近年来CDC73基因突变及相关甲状旁腺疾病的相关文献并进行综述.结果 CDC73是编码parafibromin蛋白的抑癌基因,其突变可能导致parafibromin蛋白表达水平降低或缺失.CDC73基因突变与甲状旁腺功能亢进症-颌骨肿瘤综合征直接相关,有15％～20％的甲状旁腺功能亢进症-颌骨肿瘤综合征患者合并甲状旁腺癌,其一级亲属也可能携带CDC73基因突变.部分散发性甲状旁腺癌合并CDC73基因突变.结论 CDC73基因突变与多种甲状旁腺病变相关,CDC73基因检测及parafibromin蛋白免疫组化染色分析有助于甲状旁腺疾病的诊断.

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC),是口腔中最常见的癌症.研究表明,miR-155在OSCC中呈现高表达,而目前miR-155在OSCC发生的作用与机制尚未明确,本文拟讨论miR-155与肿瘤的关系及其在OSCC发生发展中可能起到的作用.文献复习结果表明miR-155作为致癌性的小RNA可抑制CDC73、BCL6、P27Kip1等具有抑癌作用的靶基因,促进OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭行为,抑制细胞凋亡;还可与生物因素(EB病毒、人乳头瘤病毒)共同作用促进OSCC的发生.

目的:应用生物信息学方法,分析食管鳞状细胞癌miRNA表达谱,筛选差异miRNA并预测其靶基因,分析其生物学功能.方法:下载GEO数据库食管鳞状细胞癌miRNA表达谱芯片数据GSE114110,应用GEO2R软件对数据进行处理分析,筛选差异表达miRNA;应用GEO数据库食管鳞状细胞癌miRNA表达谱芯片数据GSE97049、GSE59973、GSE55856、GSE43732对所筛选出的差异表达miRNA进行验证;应用miRNet预测其靶基因;采用DAVID进行生物功能富集分析;通过String、Cyto-scape构建靶基因的蛋白-蛋白互作网络并筛选Hub基因,进一步构建miRNA-Hub gene网络;利用star-Base在线分析工具分析Hub基因的表达情况.结果:分析GSE114110芯片数据共筛选出159个DE-miRNAs,在食管癌组织中表达上调的86个,下调的73个.预测上调幅度前三名和下调幅度前三名miRNA的靶基因1700个,它们参与癌症通路、黏着斑、p53信号通路等.在P P I网络中,靶基因连通度最高的前十名为Hub基因,如MAPK1等.通过构建miRNA-Hub gene网络,我们发现大部分Hub基因都可能被hsa-miR-196a-5p和hsa-miR-1调控.hsa-miR-1调控的7个靶基因CDC42、POLR2K、PIK3CA、POLR2I、HIST2H2AC、FN1、VEGFA的表达在ESCC组织中较正常组织明显上调,hsa-miR-1与靶基因之间存在着负相关关系.因此,显著上调的7个基因可能是下调hsa-miR-1的靶点.结论:通过生物信息学方法分析食管鳞癌组织和正常上皮组织的差异DE-miRNAs表达,最终筛选出2个差异显著的miRNA和7个关键的Hub基因为进一步研究食管鳞癌的分子标志物和分子机制提供指导.

目的 分析lncRNA KIZ-AS1在膀胱癌组织中表达,探讨KIZ-AS1通过调控miR-1290/CDC73轴对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测膀胱癌组织和不同膀胱癌细胞系中KIZ-AS1的表达水平.选择KIZ-AS1表达最低的细胞系分为对照组(感染阴性对照慢病毒)和KIZ-AS1组(感染KIZ-AS1慢病毒),采用细胞增殖实验(MTT法)和Transwell实验分别检测膀胱癌细胞增殖情况和迁移能力.采用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验验证KIZ-AS1与miR-1290的靶向关系.qPCR和Western blot法分别检测miR-1290与CDC73(cell division cycle 73)基因的表达水平.结果 与癌旁组织比较,膀胱癌组织中KIZ-AS1表达水平明显降低(P<0.01).与膀胱上皮永生化细胞比较,膀胱癌细胞中KIZ-AS1表达明显降低(P<0.05),KIZ-AS1表达最低的细胞是5637细胞(P<0.01).与对照组比较,KIZ-AS1组5637细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞迁移数目显著减少(P<0.01).KIZ-AS1与miR-1290存在结合位点(P<0.01).与对照组比较,KIZ-AS1组5637细胞中miR-1290表达水平降低(P<0.01),CDC73表达水平增加(P<0.01).结论 KIZ-AS1在膀胱癌组织和细胞系中呈低表达,KIZ-AS1通过调控miR-1290/CDC73轴表达,抑制膀胱癌5637细胞增殖和迁移.

内复制是影响玉米胚乳发育的关键因素.通过降低CDK(周期蛋白依赖性激酶)活性,胚乳细胞可实现有丝分裂向内复制转变,进而推动籽粒快速灌浆.该研究以玉米微染色体维持蛋白ZmMCM基因家族为对象,对其基本生物信息学特征和非生物胁迫条件下的表达特征进行系统分析,并对其中低温胁迫响应明显的ZmMCM2通过转基因和酵母双杂的方法进行功能验证和分子互作分析.结果表明:(1)在玉米基因组中共鉴定到17个MCM家族成员,分布于6条染色体,而且部分基因间存在串联重复基因和片段复制基因;不同物种MCM蛋白的系统进化树可分为6个亚组,玉米、水稻和拟南芥的MCM2蛋白同属于第Ⅳ亚组;启动子序列分析显示,MCM家族基因启动子序列含有许多与激素响应、胁迫应答以及生长发育调节相关的顺式作用元件.(2)逆境胁迫响应分析表明,MCM基因表达受到NaCl和ABA抑制,对PEG、高温以及低温表现出不同程度的应答,尤其对低温具有明显响应.(3)ZmMCM2基因的过表达会对内复制产生一定的抑制作用,进而导致拟南芥植株矮小、莲座叶数减少以及种子体积缩小.(4)亚细胞定位结果显示,ZmMCM2基因定位于细胞核内;cDNA文库筛选和回转验证发现,MCM2与CDC73相互作用.该研究结果为进一步深入了解MCM2蛋白的分子作用机理奠定了基础.

为研究钩藤不同部位中最适管家基因与钩藤生物碱上游合成途径中关键酶基因的表达模式.以钩藤根、茎钩、叶片、蒴果为实验材料,通过RT-qPCR技术、GeNorm、NormFinder、Bestkeeper软件及△Ct程序、RefFinder在线网站分析了12个候选管家基因(18S、SAM、TUA、TUB、EF-1β、EF-1α、RNA L13、GAPDH、Actin6、PAL、CYP、cdc73)表达稳定性.结果表明,最适管家基因为SAM.再以SAM为管家基因,基于"基因组+转录组+代谢组"共表达分析筛选出钩藤生物碱上游合成途径中的15个重点候选相关基因(G8H、8-HGO、IS、CYP76A26、7-DLGT、7-DLH、LAMT、SLS、AS、AnPRT、IGPS、TSA、TSB、TDC、STR)进行表达分析,结果显示这些基因的表达量与含量趋势较为一致,很可能参与钩藤中TIAs的合成.