胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的发生发展有关,而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱,进而影响卵泡发育及卵子质量.PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路,包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路;与炎症相关的通路包括Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等;氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途径和GTP酶免疫相关蛋白7(GTPase of immunity-associated protein 7,GIMAP7)/音猬因子(sonic hedgehog,SHH)途径;与脂质代谢相关的通路如激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路等.明确PCOS患者卵巢颗粒细胞中IR相关信号转导通路,增进PCOS病理生理机制的认识,进一步为PCOS的治疗提供新思路.

巴尔通氏体作为多种人类疾病的病原菌,可分泌多种毒力效应蛋白.其中的7个毒力效应蛋白BepA～BepG由一个Ⅳ型分泌系统VirB注入宿主细胞内,干扰宿主细胞的多种信号传递通路.在这7个效应蛋白中,BepD～F的N端含有特征的EPIYA基序.注入宿主细胞后,这些EPIYA基序上的酪氨酸残基被宿主细胞中的SFK激酶磷酸化,磷酸化后的EPIYA基序可与宿主细胞中含SH2结构域的蛋白结合并干扰宿主细胞的SH2蛋白相关信号通路.在此之前,已经有多种病原菌的效应蛋白被发现含有EPIYA基序,并且通过磷酸化的EPIYA干扰哺乳动物宿主的SH2信号通路.这些毒性效应蛋白除EPIYA基序之外并没有明显的序列同源性.与此相应,在人类蛋白质组中目前只发现了6种含有EPIYA基序的蛋白,这个基序出现的频率显著低于基于随机预测的频率,这可能是在人类进化过程中含有EPIYA基序的蛋白会干扰正常信号通路传导而被淘汰.JAM-A是已报道的6个人体内EPIYA蛋白之一,它存在于人血小板中,可通过招募Csk至血小板来避免血栓的形成.已有的报道证明了BepE可与人源Csk相互作用,通过影响Csk的功能进而干扰一系列信号通路.人源Csk蛋白作为一个可以同时被来自于病原菌毒力蛋白和内源蛋白中磷酸化EPIYA基序识别并结合的分子,为我们研究并对比这两种含EPIYA基序的蛋白质对人类细胞中SH2信号通路的作用提供了一个理想的靶标.本文报道了Csk与BepE及JAM-A 2种磷酸化多肽复合物高分辨率晶体结构并分别测定其亲和力.Csk与多肽复合物结构显示,Csk与2种多肽结合方式相似,都是通过SH2结构域与磷酸化酪氨酸结合,多肽链垂直于SH2结构域中的β片层.SPR实验结果显示,来源于巴尔通氏体的BepE比人源JAM-A与Csk亲和力高,这暗示毒力蛋白通过磷酸化的EPIYA基序以高亲和力结合人体内含SH2结构域的蛋白,进而干扰SH2蛋白所涉及的信号通路.

目的 分析与中性内肽酶(NEP)相互作用的蛋白质的功能.方法 利用在线蛋白质间相互作用的数据库PINA2获得与NEP相互作用的蛋白质,并利用基因本体(GO)和KEGG分析这些蛋白质的功能.结果 PINA2数据库显示与NEP相互作用的蛋白质有176个;GO分析显示这些蛋白质分布于细胞内的各个区域,一部分可以分泌出细胞发挥作用,可以与蛋白、核酸及酶类结合,参与细胞内蛋白质定位、多肽和RNA降解、大分子代谢及血管紧张素成熟.KEGG信号通路结果显示NEP相结合蛋白参与帕金森病、阿尔茨海默病等疾病过程,还参与蛋白降解及吞噬过程.结论 NEP及其相互作用蛋白可以通过调节蛋白定位和大分子降解参与帕金森病及阿尔茨海默病的疾病过程,并且一部分可以分泌到细胞外,为帕金森病和阿尔茨海默病的诊断和治疗提供潜在靶点.

目的 研究杜拉鲁肽(dulaglutide)对阿尔茨海默病(AD)样神经退行性变的保护作用及其机制.方法 应用糖尿病治疗新药杜拉鲁肽观察和探讨其对人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞AD样变的影响及机制.采用MTT方法检测各药物杜拉鲁肽、PI3K抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体拮抗剂Ex9-39对细胞活性的影响;采用蛋白免疫印迹方法检测各组细胞tau蛋白和神经丝(neurofilaments,NFs)蛋白以及PI3K/GSK-3β信号通路中关键酶磷酸化水平.结果 杜拉鲁肽改善wortmannin诱导的细胞活性损伤,减少神经细胞内tau和NFs蛋白的磷酸化水平,提高p-PI3K(p85)和p-GSK3β(S9)的表达水平.而Ex9-39则拮抗杜拉鲁肽的神经保护作用.结论 杜拉鲁肽可通过PI3K/GSK-3β胰岛素信号通路来保护SH-SY5Y神经细胞的AD样退行性变.

目的 观察低密度脂蛋白受体(LDLr)表达失调在高糖腹膜透析液(PDS)诱导腹膜纤维化中的作用及可能机制.方法 以人腹膜间皮细胞(PMC)为研究对象.分别在含1.50％、2.50％及4.25％葡萄糖的PDS中培养PMC 6、12、24 h以筛选高糖PDS组的干扰条件.以4.25％甘露醇作为高渗对照.细胞分为对照组(PBS干预)和高糖PDS组(含4.25％葡萄糖的PDS干预24 h).倒置显微镜观察细胞形态变化;实时定量PCR和Western印迹分别检测平滑肌肌动蛋白0(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)、胶原Ⅰ的mRNA和蛋白表达;油红0染色及Filipin染色观察PMC中脂质沉积情况,高效液相色谱测定细胞内胆固醇酯含量;免疫荧光双重染色观察胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)与高尔基体共表达情况,实时定量PCR和Western印迹分别检测LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达;实时定量PCR和Western印迹分别检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、效应子核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的mRNA和蛋白表达.结果 (1)与1.50％PDS干预组比较,4.25％PDS刺激PMC 24 h后,细胞内LDLr表达明显升高(P＜0.05);各时间点高渗对照组细胞内LDLr表达无明显改变(P＞0.05).(2)与对照组比较,高糖PDS组细胞形态由圆形铺路石样向长梭形转变,而且胞外基质蛋白α-SMA、FSP-1及胶原Ⅰ的表达均增加(均P＜ 0.05),细胞内脂质沉积增多(P＜0.05),细胞内SCAP与高尔基的共表达明显增多,LDLr、SREBP-2及SCAP的mRNA和蛋白表达随之升高(均P＜0.05),mTOR、4EBP1及S6K1的mRNA和磷酸化蛋白表达升高(均P＜0.05).结论 高糖PDS可能通过激活PMC细胞内雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路,破坏LDLr负反馈调节,从而导致细胞内脂质沉积增加,胞外基质积聚,促进腹膜纤维化发生.

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对宫颈癌细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域3(NLRP3)表达的影响.方法 用PGE2、三种EP受体激动剂(17-phenyltrinor prostaglandin E2、Butaprost和Prostaglandin E1 Alcobol)处理Hela细胞,Western blot检测宫颈癌Hela细胞核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体家族(NLRs)含热蛋白结构域3(NLRP3)蛋白表达水平的变化.结果 PGE2明显上调Hela细胞NLRP3蛋白的表达水平,10 μmol/L PGE2处理Hela细胞后,NLRP3蛋白的表达水平与对照组相比升高50.27％(P＜0.05);10 μmol/L EP1、EP2、EP4受体激动剂处理Hela细胞后,NLRP3蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP4受体激动剂处理组上升了52.43％(P＜0.05).结论 PGE2可能通过EP4受体上调Hela细胞NLRP3蛋白的表达.

目的 研究苦瓜总皂苷对高盐饮食诱导的盐敏感肾脏损害大鼠的治疗作用并分析其可能机制.方法 50只SD大鼠适应性喂养10 d后随机分为正常组、模型组以及苦瓜总皂苷低、中、高剂量治疗组,每组10只,除正常组外,其余四组给予高盐饲料(4.0％高盐饲料)诱导盐敏感肾脏损害大鼠模型,4周后检验造模是否成功,造模成功后正常组和模型组给予1.0 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,苦瓜总皂苷三个剂量组分别给予苦瓜总皂苷10、20、40 mg/(kg·d)灌胃.治疗8周后处死大鼠,收集尿液检测24 h尿蛋白和尿肌酐,收集血清测定血肌酐、血清醛固醇、血清钠和血清钾变化特点,同时收集肾脏检测肾病组织病理学及肾脏中裂孔隔膜蛋白(podocin)和足细胞蛋白(nephrin)表达特点.结果 模型组病理学检测有明显肾小球硬化和肾间质纤维化,治疗组明显改善;正常组收缩压维持在120 mmHg左右,模型组则维持在170 mmHg左右,苦瓜总皂苷三个剂量治疗组相较于模型组明显降低(P＜0.05);各组间生化和尿检测相关指标比较,血清钠和血清钾差异无统计学意义(P＞0.05),与正常组比较,模型组血清肌酐和24 h蛋白尿/尿肌酐明显升高(P＜0.05),而肌酐清除率以及醛固醇明显降低(P＜0.05),苦瓜总皂苷治疗组上述指标较模型组明显改善;与正常组相比,模型组Podocin和Nephrin蛋白和mRNA表达均明显降低(P＜0.05),苦瓜总皂苷治疗组较模型组明显升高(P＜0.05).结论 苦瓜总皂苷可明显改善高盐诱导所致高血压肾脏损害大鼠的病理生理,这可能与其可调节肾脏组织podocin和nephrin表达,进而抑制肾小球硬化,改善肾脏间质纤维化有关.

内膜系统构成了细胞及细胞器之间的天然屏障,保证重要的生命活动在相对独立的空间内进行.细胞内膜性细胞器之间的物质(如蛋白质、脂类)的运输主要是通过囊泡完成的.囊泡运输需要货物分子、运输复合体、动力蛋白和微管等的参与以及多种分子的调节,包括出芽、锚定和融合等过程.从上世纪60年代开始,人们认识到细胞分泌的蛋白需要先进入内质网,再到高尔基体,然后分泌到其作用部位.之后,信号肽假说被提出和证明.随后的研究完善了囊泡运输的过程,包括经内质网到高尔基体的蛋白质分泌运输过程中关键的调控基因及其作用环节、蛋白质复合物SNARE(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感的融合蛋白附着蛋白受体)在囊泡锚定和融合中的作用机制等.在囊泡运输中的具有代表性的神经细胞突触囊泡中,触发突触囊泡融合的钙感受器(synaptotagmin)能快速准确地将钙信号传递到突触囊泡,通过与SNARE复合体等作用,实现与细胞膜融合并释放神经递质,最终完成神经信息的传递.该文从囊泡运输的研究历史回顾、已有研究成果以及未来展望等三个方面对囊泡运输分子细胞机制进行了阐述.

目的 探讨微RNA-29b(miR-29b)在心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤过程中是否发挥保护作用并探讨其可能的调控机制.方法 通过100μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9C2心肌细胞损伤构建I/R细胞模型;分别设立正常对照组,TBHP处理组,NC miRNA处理组,miR-29b类似物(mimic)处理组.通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测各组心肌细胞内miR-29b表达量;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)检测各组心肌细胞的存活率;蛋白质印迹法(West-ern Blot)检测心肌细胞中凋亡蛋白和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化水平的改变.另一方面,将30只C57/B6小鼠(6～7周龄)逐个编号,通过随机数字表法抽样,随机分为三组,设立I/R组、NC miRNA处理组和miR-29b激动剂(agomir)处理组,其中miR-29b agomir组小鼠预先给予miR-29b agomir治疗.结扎冠状动脉左前降支30 min,然后再灌注4 h建立心肌缺血再灌注动物模型.通过埃文斯蓝(Evans)和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色评估三组小鼠心肌梗死面积;qPCR检测各组小鼠心肌组织内miR-29b表达量;蛋白质印迹法检测心肌组织内凋亡蛋白改变.结果 细胞层面:与TBHP处理组相比(65±3)％,上调miR-29b表达可增加心肌细胞的存活率(85±3)％,下调心肌细胞凋亡蛋白表达(0.86±0.07).进一步的蛋白质印迹法实验结果表明:与TBHP处理组(0.81±0.05)相比,上调miR-29b能够抑制Akt蛋白磷酸化(0.41±0.02).动物层面:miR-29b agomir处理组小鼠心肌梗死面积(24±3)％与I/R组(62±2)％相比明显减少,且心肌组织凋亡蛋白表达明显减少(0.32±0.04).结论 上调miR-29b表达可以减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡.miR-29b可能是通过调控靶基因Akt磷酸化水平,下调心肌细胞凋亡水平,从而保护心脏.

HLA-DPB1是MHC区域基因编码的跨膜糖蛋白,是人类免疫系统的重要组成部分.本研究采用生物信息数据库和分析软件对人HLA-DPB1基因的结构、单核苷酸多态性位点(SNP)、蛋白的理化特性、跨膜结构域、信号肽、亚细胞定位、二级结构、三级结构、磷酸化位点、组织表达情况及蛋白相互作用网络进行预测分析.结果 表明,人HLA-DPB1基因位于6号染色体,有8种可变剪接体,SNP位点132个,其中移码突变12个,同义突变33个,错义突变87个.人HLA-DPB1蛋白由258个氨基酸组成,含有一个跨膜区和一个信号肽的亲水蛋白,主要定位于细胞内.其二级结构主要元件为无规卷曲和延伸链,三级结构预测结果可信.人HLA-DPB1蛋白有18个磷酸化位点,其中丝氨酸的磷酸化位点最多.人HLA-DPB1蛋白在肺、肾上腺及骨髓等组织表达量较高,并且人HLA-DPB1蛋白存在相互作用的蛋白多数在免疫反应中起重要作用.