外泌体是由活细胞主动分泌的一种纳米级囊泡，内含蛋白质、核酸等生物活性物质，参与细胞间通讯，在肿瘤微环境调节、免疫识别、炎症反应等众多生理病理过程中发挥重要作用。作为一种运输载体，外泌体广泛存在于生物流体中，但由于其粒径小、内含物丰度低，能否获得高质量的外泌体成为后续研究成败的关键。虽然外泌体分离、纯化和鉴定方法日趋发展，但仍未达到成熟水平。本文就外泌体分离和纯化方法的研究进行综述，并比较不同方法的优缺点、适用范围及应用前景，以期为外泌体研究提供参考。

外泌体是一种机体内大多数细胞分泌的直径为30~150 nm，具有脂质双层膜的微小囊泡，可以直接反映分泌细胞的生理和功能状态，参与细胞间的物质运输和信息通讯，其作为肿瘤早期诊断和治疗评估的生物标志物具有重要意义。外泌体的检测方法有很多，在这些检测方法中，适配体传感器技术以其价廉易用、响应快、灵敏度高、特异性强等特点，帮助肿瘤患者早期发现，早期获得诊断，早期治疗，提高生存率，并为愈后效果的评价提供了重要依据。常见的适配体传感器有荧光、电化学、比色法、光致发光、横向流动带、表面增强拉曼散射和表面等离子体共振适配体传感器，不同的适配体传感器具有不同的特征，文章对几种常见适配体传感器检测肿瘤外泌体的研究进展进行阐述。

目的:探讨富含脯氨酸小蛋白2A(SPRR2A)在肺鳞癌中的表达及其可能的作用机制。方法:实验性研究。采用生物信息学方法，在GTEx数据库和TCGA数据库中检索分析SPRR2A在多种肿瘤组织和肺鳞癌中的表达，用ROC曲线分析SPRR2A诊断肺鳞癌的价值。收集2018年1月至2020年12月间于成都医学院第一附属医院外科手术的肺鳞癌标本及癌旁正常组织标本，通过RT-qPCR和Western blot技术进行实验验证，并进一步在4种肺鳞癌细胞株中再次验证。收集TCGA数据库中486例肺鳞癌患者基因表达谱数据及临床资料，根据SPRR2A表达水平的中位值，分为高、低表达组，采用GSEA4.1.0软件对差异基因富集的信号通路进行分析。采用Kaplan-Meier法分析SPRR2A高表达组和SPRR2A低表达组肺鳞癌患者的无疾病进展生存期和总生存期的差异。选用肺鳞癌SK-MES-1，构建SPRR2A表达载体shRNA SPRR2A质粒，应用Transwell方法验证干扰SPRR2A基因表达后，SK-MES-1细胞迁移和侵袭能力是否受到影响。结果:与癌旁正常组织比较，SPRR2A基因mRNA在肺鳞癌组织中的表达水平明显升高，且有较高的诊断价值(AUC＝0.899%)；临床标本及肺鳞癌细胞株验证结果与生物信息分析结果一致。肺鳞癌组织SPRR2A mRNA和SPRR2A蛋白均高于癌旁正常组织，分别为(128.45±12.44)和(36.88±2.77)比(10.11±1.32)和(1.46±0.04)，差异有统计学意义( P<0.05)。TCGA数据库中，SPRR2A高表达组和SPRR2A低表达组患者差异基因共有528个，包括348个下调的基因和180个上调的基因，这些基因主要富集于细胞黏附分子和囊泡运输的相互作用两个信号通路。预后分析显示，肺鳞癌患者SPRR2A mRNA高表达组的总生存时间和无疾病进展生存时间明显短于低表达组。Transwell实验结果显示，敲减了SPRR2A基因的肺鳞癌SK-MES-1的细胞迁移和侵袭能力均受到显著抑制( P<0.05)。 结论:肺鳞癌组织中SPRR2A基因的表达水平明显上调，高表达SPRR2A与肺鳞癌患者的预后不良有关，靶向敲减SK-MES-1细胞中的SPRR2A后能抑制其迁移和侵袭。

哺乳动物睾丸中产生的精子缺乏运动性，而且不具备受精能力，因此在功能上尚不成熟。附睾是男性生殖道中一段非常特别、高度盘绕折叠的小管，附睾各段通过上皮细胞分泌和吸收活动的共同协作用，实现高度区域化，保证不同区段精确的功能划分。精子在附睾近端完成功能上的成熟，在远端以静息状态储存以备射精，这一过程依赖于附睾管腔特殊的微环境。附睾管腔的微环境极为复杂，目前已证实其中含有多种无机离子、蛋白质和胞外囊泡（附睾小体）。附睾小体中包含多种蛋白和sncRNA，可直接或间接促进精子成熟。本文综述了附睾管腔微环境的特点，特别关注了附睾上皮细胞产生的附睾小体对精子成熟的影响。

目的:评价围术期认知功能紊乱(PND)小鼠海马蛋白质组学的变化及生物信息学分析。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠，15月龄，体重30~35 g，采用随机数字表法分为2组( n＝9)：对照组(C组)和PND组。采用异氟烷麻醉下行胫骨骨折切开复位内固定术构建PND模型。分别于术前1 d和术后1、3、7 d时行Morris水迷宫实验、旷场实验和条件恐惧实验。分别于术后1、3和7 d时，P组处死每次认知功能测试最差的3只小鼠、C组随机处死3只小鼠，取海马组织，采用高效液相色谱-质谱法筛选差异表达蛋白，并对差异表达蛋白进行Gene Ontology生物学过程富集分析(GO分析)和KEGG通路富集分析(KEGG分析)。 结果:与C组相比，P组术后各时点逃避潜伏期延长，靶象限停留时间百分比降低，场景恐惧记忆实验僵直时间百分降低( P<0.05)。采用高效液相色谱-质谱法筛选出21个差异表达的蛋白，其中有12个蛋白表达上调，有9个蛋白表达下调。GO分析结果表明，差异表达蛋白参与了代谢、信号传递、生物过程的调节等过程，构成了细胞器、突触等结构，并与结合、运输等分子功能有关。KEGG分析结果表明，MAPK信号通路、ErBb信号通路、AMPK信号通路、SNARE蛋白囊泡运输等存在差异。 结论:PND小鼠海马存在21个差异表达的蛋白，这些蛋白参与了神经炎症反应、突触结构异常、线粒体功能异常、自噬能力下降等可能与PND有关的病理过程。

目的:采用多组学方法探究多嘧啶束结合蛋白1（PTBP1）在肾透明细胞癌中的作用以及机制。方法:通过慢病毒载体导入CRISPR-Cas9方法构建PTBP1条件性敲除的人肾透明细胞癌细胞（786-O-PTBP1 KO），该细胞系购自中国典型培养物保藏中心。细胞计数试剂盒（CCK-8），迁移和侵袭实验（Transwell）评估PTBP1敲除对于肾透明细胞癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。对照组786-O细胞（786-O-WT）和PTBP1条件性敲除786-O细胞（786-O-PTBP1 KO）分别进行全长转录组测序（RNA-Seq）和液相色谱-质谱联用分析（LC-MS/MS），检测肾透明细胞癌细胞在敲除PTBP1后出现的差异表达基因、转录本与蛋白；交联免疫共沉淀结合高通量测序（CLIP-Seq）检测剪切因子PTBP1在肾透明细胞癌中发挥作用的结合靶点RNA。通过Human Protein Atlas和Gene card数据库分析6个靶点的临床相关性。统计分析组间比较采用独立样本 t检验。 结果:KO组迁移细胞计数明显低于WT组（116比182， t＝14.73， P<0.01）；KO组侵袭细胞计数低于WT组（199比179， t＝4.34， P<0.01）；KO组细胞增殖倍数在24、48、72、96时均低于WT组细胞（0.438比0.493， t＝2.78， P<0.05；0.831比1.070， t＝10.86， P<0.01；1.354比1.804， t＝20.15， P<0.01；2.127比2.280， t＝8.91， P<0.01），差异有统计学意义。1 876个RNA-Seq差异基因与132个质谱分析差异基因的交集基因为78个，从中筛选出在352个CLIP-Seq结合峰中有显著结合的6个靶点基因RNA；临床数据库提示6个靶标中，N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF）是PTBP1发挥促癌作用的目标靶点。 结论:PTBP1明显促进肾透明细胞癌的增殖、迁移和侵袭，其机制可能与下游靶点之一的NSF及可溶性NSF附着蛋白受体（SNARE）介导的囊泡运输与自噬有关。

外泌体是机体内细胞分泌的具有脂质双分子层的微小囊泡。外泌体可运输蛋白质、脂质和核酸进入受体细胞而参与细胞间通讯。最新研究表明，外泌体参与了草酸钙肾结石形成的病理生理过程和发病机制。肾小管上皮细胞、巨噬细胞、脂肪基质细胞来源的外泌体参与了草酸钙肾结石形成机制中的免疫过程、炎症反应和细胞自噬。本文将综述不同细胞来源的外泌体在草酸钙肾结石形成过程中的作用，为肾结石的临床防治提供新思路。

目的:定量分析SD大鼠非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)模型中视神经组织蛋白表达变化，并对差异蛋白进行生物信息学分析。方法:选取10只8周龄体质量200~250 g的SPF级雄性SD大鼠，采用孟加拉玫瑰红联合激光光动力方法建立NAION模型，最终选取4只造模成功的大鼠作为NAION模型组，同时取4只体质量和周龄相匹配的健康、无眼疾SD大鼠作为正常对照组。于造模后7 d，分离各组大鼠球后视神经，采用酶切法进行样本制备，采用同位素标记相对和绝对定量标记结合液相色谱-串联质谱技术对组织蛋白进行质谱鉴定和定量检测，选取组间表达倍数大于1.5倍且差异有统计学意义( P<0.05)的蛋白为差异蛋白，并对差异蛋白进行生物信息学分析。 结果:造模后3 d，NAION模型组大鼠视盘隆起，荧光素眼底血管造影图像显示视盘区有荧光素钠渗漏，模型建立成功。共鉴定出1 291个可定量蛋白，其中差异蛋白80个。与正常对照组比较，NAION模型组中表达上调的蛋白5个，表达下调的蛋白75个。V型胶原α1链(Col5A1)和cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基β(Prkacb)、G蛋白相关支架蛋白(Dlg1)等蛋白表达升高；神经微丝蛋白(Nefm)、微管相关蛋白1b(Map1b)、Ras相关蛋白(Rala)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(Pkn2)、血小板活化因子乙酰水解酶IB亚基(Pafah1b1)等蛋白表达降低。差异蛋白主要参与细胞骨架的调节、细胞对缺氧的反应、轴突生成及延伸、突触调节、神经元凋亡调控、轴浆运输等生物学进程。京都基因与基因组通路富集分析结果显示，差异蛋白主要参与代谢通路、突触囊泡循环、血小板活化等信号通路。结论:神经生长、能量代谢、轴浆运输及凋亡等信号通路相关蛋白的表达共同参与NAION中神经细胞的凋亡。

脂肪干细胞外泌体是脂肪干细胞分泌的亚细胞结构，是一种可以运输多种细胞成分并通过旁分泌作用于靶细胞的纳米级膜囊泡，在细胞间的物质交换及信息交流中起着重要作用。瘢痕愈合是皮肤组织损伤后最常见的愈合方式，病理性瘢痕不仅会造成运动功能障碍，还会导致畸形，影响患者外观，给患者带来生活及精神上的压力。近年来，许多研究表明脂肪干细胞外泌体内含有多种生物活性分子，这些分子通过影响成纤维细胞的增殖与迁移及细胞外基质的成分，从而对减少瘢痕形成及无瘢痕创面愈合起重要作用。该文主要对近年来关于脂肪干细胞外泌体在瘢痕形成中的作用及其机制的文献进行综述，并对未来脂肪干细胞外泌体在瘢痕治疗中的应用发展进行展望。

血管钙化(VC)是慢性肾脏病(CKD)患者的常见并发症，是心血管疾病和全因死亡率的重要预测指标。除羟基磷灰石在血管壁的内膜和中膜层沉积以外，血管平滑肌细胞表型的转化也是VC发生过程中的关键环节。外泌体是一种具有脂质双分子层结构的细胞外囊泡，含有多种特异性脂质、核酸和蛋白质，参与细胞间通讯，在不同生理和病理过程中起着重要作用。近年来，已有研究证明外泌体通过诱导矿物质沉积、在细胞间运输微小RNAs(miRs)、将钙化信号扩展至相邻正常血管平滑肌细胞等途径参与调控VC。本文以血管平滑肌细胞为桥梁，对外泌体在VC中的作用及机制展开综述，为预防和治疗VC提供一些新思路。