目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制.方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点.脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力.结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P＜0.05),迁移速率变快(P＜0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P＜0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P＜0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P＜0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性.结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC.

目的 探讨泛素样蛋白质2(UBQLN2)在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 选取2020年1月至2021年1月河北北方学院附属第一医院治疗的90例病人为研究对象,根据术中手术获取组织情况,分为正常组、癌旁组和肿瘤组.免疫组织化学法和免疫荧光评估UBQLN2在肿瘤组织、远端组织和正常组织中表达;分析UBQLN2与病人临床病理特征以及预后的相关性;蛋白质印迹法和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测UBQLN2在结直肠癌细胞系HT29、SW620、SW480、LOVO、HCT116以及人正常肠上皮细胞HIEC细胞中的表达;分别过表达和干扰UBQLN2在结肠癌细胞中的表达,随后CCK-8检测干扰前后细胞增殖能力变化.结果 UBQLN2在结直肠癌癌旁组织中阳性面积(32.57±12.44)％显著高于肿瘤组织(12.68±9.79)％;UBQLN2 mRNA表达在转移阴性病人肿瘤组织中0.98±0.15显著高于转移阳性病人肿瘤组织0.33±0.08;UBQLN2的表达与结直肠癌病人预后呈正相关;UBQLN2在人正常肠上皮细胞中表达显著高于结直肠癌细胞,且在HCT116中表达最低;HCT116过表达UBQLN2培养36 h后,与pcDNA3.1-NC组细胞增殖能力0.78±0.23比较,pcDNA3.1-UBQLN-2组细胞0.52±0.18增殖能力显著降低;SW480细胞敲减UBQLN2培养36 h后,与si-NC细胞0.65±0.37增殖能力比较,si-UBQLN-2组细胞0.89±0.36增殖能力显著增加.结论 UBQLN2在结直肠癌肿瘤组织和细胞中明显低表达并与转移呈负相关,UBQLN2可抑制结直肠癌增殖并与病人预后呈正相关.

目的 观察优化溃结方对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人结肠上皮细胞(HCoEpiC)白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的影响.方法 根据所给含药血清的不同将经LPS诱导的HCoEpiC分为模型组、SASP组和优化溃结方组,另将未经LPS诱导的HCoEpiC作为正常组.采用QPCR、ELISA法测各组细胞IL-4、IL-6的mRNA及蛋白表达.结果 与正常组相比,模型组IL-4的mRNA和蛋白表达减少、IL-6的mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05);与模型组相比,优化溃结方组和SASP组IL-4表达显著升高(P＜0.05),IL-6表达显著降低(P＜0.05),且两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 优化溃结方能够增加LPS诱导的HCoEpiC细胞抑炎因子IL-4的表达,减少促炎因子IL-6的表达,为该方的临床应用及后续实验研究提供科学依据.

目的:观察结肠癌组织及细胞中miR-30c-5p及Toll样受体4(Toll-like receptor4，TLR4)蛋白表达，探讨其与临床病理特征的关系及意义。方法:采用前瞻性研究，选取2016年5月至2017年5月于中国医科大学肿瘤医院手术切除的结肠癌手术标本及配对癌旁正常组织标本30例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测miR-30c-5 mRNA的表达，采用蛋白质印迹(western blot，WC)法检测TLR4蛋白的表达，观察miR-30c-5p mRNA及TLR4蛋白在肿瘤不同TNM分期、分化程度及直径中的表达差异，Pearson Rank法进行miR-30c-5p及TLR4蛋白表达的相关性分析。结果:在结肠癌组织中，miR-30c-5p表达(0.311±0.147)低于癌旁正常组织(0.881±0.266)( t＝10.613， P<0.001)。TLR4蛋白在结肠癌组织(0.729±0.274)中表达高于癌旁正常组织(0.361±0.168)( t＝6.310， P<0.001)。miR-30c-5p mRNA在结肠癌细胞株中表达(0.394±0.045、0.435±0.098、0.533±0.092、0.272±0.069)低于正常结肠上皮细胞(1.371±0.101)( t值分别为6.744、6.423、6.865、6.201， P均<0.001)。TLR4蛋白在结肠癌细胞株中表达(1.108±0.169、1.035±0.177、1.114±0.253、1.116±0.157)高于正常结肠上皮细胞(0.358±0.094)( t值分别为5.789、4.799、5.311、5.291， P均<0.001)。Pearson rank相关分析显示，在结肠癌组织中miR-30c-5p及TLR4蛋白表达量呈负相关( r＝-0.487，95% CI：-0.721～-0.154， P<0.01)。miR-30c-5p随着TNM分期升高呈现下降趋势( F＝31.406， P<0.001)，随着肿瘤分化程度下降呈现下降趋势( F＝9.960， P<0.001)，随着肿瘤直径增大呈现下降趋势( F＝10.267， P<0.001)。TLR4随着TNM分期升高呈现上升趋势( F＝37.634， P<0.001)。TLR4随着肿瘤分化程度下降呈现上升趋势( F＝38.027， P<0.001)。TLR4随着肿瘤直径增大呈现上升趋势( F＝20.717， P<0.001)。 结论:miR-30c-5p在结肠癌中低表达，TLR4在结肠癌中高表达，二者与结肠癌TNM分期及肿瘤体积等恶性临床病理特征具有相关性。

目的:探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法:采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07)，并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control，并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO：(51.590±6.018)%]。使用两样本 t检验进行统计分析，结果以均数±标准差( ± s)表示，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞，其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组：0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝17.811， P<0.0001；DLD1： t＝5.372， P<0.01)。RKO转染后，mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝8.764， P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030，48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020，72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010，96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019)，差异有统计学意义(RKO： t＝10.821， P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18)，差异有统计学意义(RKO： t＝4.581， P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%]，差异有统计学意义( t＝23.491， P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760，侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76)，差异有统计学意义(Transwell迁移 t＝16.931， P<0.01)、(Transwell侵袭 t＝20.641， P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因，并通过qRT-PCR及Western blot验证，mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00]，差异有统计学意义[mRNA(RKO： t＝27.951， P<0.0001)；Western blot(RKO： t＝13.931， P<0.001)]。 结论:miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达，过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力，并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平，说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨环状RNA circ0025847对结直肠癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法:即时聚合酶链锁反应（real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测人结直肠癌细胞（HCT116，SW480）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中circ0025847和QK1的表达水平。CCK-8检测circ0025847和QK1对结直肠癌细胞增殖的影响。采用生物信息学方法筛选可与circ0025847结合的RNA结合蛋白（RNA-binding protein，RBP）。RNA pulldown和RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）实验检测circ0025847是否与QK1结合。蛋白免疫印迹法（western blot）分析过表达circ0025847后QK1的表达水平。设置阴性对照组（NC组），circ0025847过表达组和circ0025847过表达组+ QK1抑制组，CCK8法观察结直肠癌细胞增殖。结果:circ0025847在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（1.01±0.05）、（0.49±0.08）和（0.45±0.10），QK1在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（0.98±0.07）、（0.50±0.07）和（0.47±0.09），二者均在结直肠癌细胞中低表达。过表达circ0025847和QK1可抑制结直肠癌细胞的增殖。RNA pulldown和RIP实验证实circ0025847和QK1可直接结合。circ0025847可正调控QK1的表达（7 199.20±12.44 vs 3 889.80±11.03）。circ0025847通过促进QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖。结论:circ0025847通过正调控QK1表达来抑制结直肠癌细胞的增殖，circ0025847可能是治疗结直肠癌的潜在作用靶点。

目的:探讨克罗恩病患者小肠黏膜上皮细胞Piezo1的表达情况及其与克罗恩病患者的临床相关性。方法:回顾性收集2010年1月1日至2020年11月30日于安徽医科大学第一附属医院行手术治疗的57例克罗恩病患者(克罗恩病组)的临床资料，包括年龄、性别、疾病部位和生物学行为的分类情况等，同期收集10名行肠镜检查的健康体检人群末端回肠(距回盲瓣20 cm处)的正常小肠黏膜上皮组织作为健康对照组。采用免疫荧光染色和苏木精-伊红染色法观察Piezo1在克罗恩病患者不同的疾病部位、疾病生物学行为、疾病活动性的小肠黏膜上皮细胞中的表达情况，采用克罗恩病黏膜活体组织检查标本组织学评分系统和肠道纤维化评分分析CD患者肠道组织炎症和纤维化情况。应用ImageJ软件对小肠黏膜上皮细胞Piezo1进行半定量分析，并分析Piezo1相对表达水平与临床特征和小肠病理特征的相关性。统计学方法采用独立样本 t检验和方差分析。 结果:克罗恩病组中男37例(64.9%)，女20例(35.1%)；年龄为(39.1±14.2)岁，范围为18～71岁；患病时间为(26.5±24.1)个月；疾病部位为回肠型29例(50.9%)，回结肠型26例(45.6%)，结肠型2例(3.5%)；疾病生物学行为为非穿透非狭窄型12例(21.1%)，狭窄型31例(54.4%)，穿透型14例(24.6%)；疾病中度活动期47例(82.5%)，重度活动期10例(17.5%)；中度肠道炎症17例(29.8%)，重度40例(70.2%)；6例(10.5%)肠道纤维化评分为1分，28例(49.1%)为2分，18例(31.6%)为3分，5例(8.8%)为4分。克罗恩病组小肠黏膜上皮细胞Piezo1的相对表达水平高于健康对照组(12.9±4.6比8.5±1.1)，狭窄型和穿透型克罗恩病患者的小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平均高于非穿透非狭窄型克罗恩病患者(12.6±3.8、9.8±2.4比6.0±1.3)，差异均有统计学意义( t＝3.00、-3.66、-3.32， P均<0.01)。重度肠道炎症克罗恩病患者小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平高于中度肠道炎症克罗恩病患者(13.1±4.2比9.7±3.1)，差异有统计学意义( t＝-2.65， P<0.05)；肠道纤维化评分为4、3、2、1分患者的小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平分别为17.6±5.2、12.6±1.7、9.1±2.1、5.8±1.1，4分患者的小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平均高于3、2和1分患者，3分患者均高于2和1分患者，2分患者高于1分患者，差异均有统计学意义( t＝-2.98、-5.10、-3.84、4.60、6.55、2.56， P均<0.05)；小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平与肠道组织炎症严重程度和纤维化严重程度均有关，肠道炎症或纤维化越严重，小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平越高。 结论:小肠黏膜上皮细胞Piezo1相对表达水平与克罗恩病生物学行为，肠道炎症、纤维化的严重程度均有关，推测小肠黏膜上皮细胞表达的Piezo1可能与克罗恩病的肠壁纤维化过程存在一定程度的临床关联，但是否在克罗恩病肠壁纤维化过程中发挥重要作用及其具体机制需要进一步研究。

目的:研究结直肠癌细胞中Lnczc3h7a的表达及对肿瘤细胞增殖和迁移的作用机制。方法:选择6种结直肠癌细胞株人结肠癌细胞(HT-29)，人结直肠癌细胞(HCT-116)，人结肠癌细胞(SW-60)，人结直肠腺癌细胞(COLO320DM)，人结肠癌细胞(Lovo)和人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)与正常结直肠上皮细胞系。以Lnczc3h7a模拟物(mimics)、Lnczc3h7a抑制剂(inhibitor)及空白对照分别转染结直肠癌细胞SW60，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和细胞划痕实验分别检测转染Lnczc3h7a mimics和Lnczc3h7a inhibitor后结直肠癌细胞的增殖和迁移能力，免疫印迹试验(Western blot)法检测结直肠癌细胞SW60中胶原三股螺旋重复蛋白6(CTHRC6)的表达。分别使用过表达体系和siRNA分别改变细胞系中Lnczc3h7a和CTHRC6)的表达，检测结直肠癌细胞的增殖和迁移能力。再采用CRISP-Cas9技术敲除Lnczc3h7a和CTHRC6)，检测结直肠癌细胞的增殖和迁移能力。结果:HT-29、HCT-116、SW-60、COLO320DM、Lovo和DLD-1中的Lnczc3h7a表达水平分别为0.65±0.02、0.67±0.02、0.84±0.04、0.58±0.02、0.70±0.02、0.52±0.30，均显著低于正常结直肠上皮细胞系(1.00±0.00， F＝5.298、5.462、8.172、4.698、7.012、4.463， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。细胞转染后第3、4、5天，模拟物组(0.33±0.02、0.58±0.01、0.65±0.02)及对照组(0.41±0.05、0.71±0.02、0.90±0.04)结直肠癌细胞增殖能力均低于抑制剂组(0.51±0.03、0.88±0.04、1.07±0.08)，且模拟物组结直肠癌细胞增殖能力低于对照组( F＝5.104、6.873、8.284， P<0.05)，差异均有统计学意义。细胞培养24、48 h时，模拟物组(184.92±34.82、157.71±27.47)及对照组(411.86±62.35、412.94±63.19)的结直肠癌细胞迁移能力低于抑制剂组(466.92±47.37、470.83±47.82)，且模拟物组结直肠癌细胞迁移能力低于对照组( F＝1.482、5.104， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。细胞转染24 h时模拟物组及对照组的CTHRC6蛋白表达分别为0.31±0.04、0.62±0.13，均低于抑制剂组(0.86±0.17)，且模拟物组细胞CTHRC6蛋白表达低于对照组( t＝41.772， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中Lnczc3h7a存在明显低表达，其可能具有抑制结直肠癌细胞增殖、迁移的作用，且作用机制可能和抑制CTHRC6蛋白表达密切相关。

目的:探讨miRNA-541-5p（miR-541-5p）负调控细胞周期蛋白D1（CCND1）对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其相关机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-541-5p在结肠癌细胞株HT29、SW480、SW620、HCT116和正常人肠上皮细胞株HIEC以及2017年4月至2020年3月河北北方学院附属第一医院112例结肠癌手术患者肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平。采用TargetScan生物信息学软件预测miR-541-5p的潜在靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法进行验证。检测CCND1在结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平。将miR-541-5p表达水平最低的细胞分为miR-NC组（转染对照质粒）、miR-541-5p组（转染miR-541-5p模拟物）、miR-541-5p+ CCND1组（共转染miR-541-5p模拟物和CCND1），使用CCK-8法、Transwell法检测miR-541-5p和CCND1对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响。通过构建结肠癌裸鼠移植瘤模型观察miR-541-5p对肿瘤生长的影响。结果:结肠癌患者肿瘤组织中miR-541-5p相对表达量低于癌旁正常组织（0.45±0.06比1.00±0.12， t=43.385， P<0.01）。结肠癌细胞株HT29、SW480、SW620、HCT116和正常人肠上皮细胞株HIEC中的miR-541-5p相对表达量分别为0.46±0.03、0.67±0.04、0.57±0.06、0.17±0.02和1.00±0.15，差异有统计学意义（ F=5.621， P<0.01），各结肠癌细胞株miR-541-5p相对表达量均低于正常人肠上皮细胞株HIEC。选择HCT116细胞进行后续实验。TargetScan软件预测CCND1的3'UTR可能存在与miR-541-5p互补位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示，CCND1是miR-541-5p的潜在靶基因，miR-541-5p可负调控CCND1表达。CCK-8法检测结果显示，miR-NC组、miR-541-5p组、miR-541-5p+CCND1组HCT116细胞增殖率分别为（2.00±0.16）%、（0.89±0.08）%、（2.56±0.23）%，差异有统计学意义（ F=6.715， P<0.01），在miR-541-5p过表达的HCT116细胞中转染CCND1能逆转miR-541-5p对细胞增殖的抑制作用。Transwell检测结果显示，过表达miR-541-5p能抑制HCT116细胞的迁移能力，但共转染miR-541-5p模拟物和CCND1后，可逆转这种抑制作用。结肠癌裸鼠移植瘤模型中，miR-541-5p组裸鼠肿瘤质量和体积均较对照组低（均 P<0.05）。 结论:miR-541-5p通过负调控CCND1抑制结肠癌细胞增殖和迁移，抑制结肠癌裸鼠移植瘤模型中肿瘤生长，在结肠癌中发挥抑癌因子的作用。

目的:运用坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)新生小鼠模型，探讨β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤的作用。方法:选用5日龄C57BL/6新生小鼠15只，按随机数字法分为三组，每组5只。对照组：母鼠哺乳喂养，无其他任何干预；NEC组：通过对新生小鼠缺氧刺激，人工喂养及脂多糖干预诱导产生NEC；β-胡萝卜素干预组：在诱导产生NEC的同时，给予新生小鼠胃管灌注β-胡萝卜素(1 mg/kg)。于生后第9日收集各组新生小鼠末端回肠组织，分析比较NEC病理评分，肠道炎症反应，肠上皮细胞增殖、凋亡及氧化应激水平。结果:与对照组相比，NEC组肠道出现明显损伤(0/5比5/5， P<0.05)，炎症反应(1.0122±0.03比9.5367±3.025， P<0.01)及氧化应激水平(TBARS 6.9292±0.129比11.4420±0.074， P<0.01; GPx 25.21±7.113比17.5674±5.769， P<0.01)明显升高，肠上皮细胞增殖能力下降(5.36±0.308比1.48±0.212， P<0.01)，且凋亡增多(2.5683±0.39比5.4974±0.967， P<0.01)；与NEC组相比，β-胡萝卜素干预组的肠道组织损伤程度明显降低(5/5比1/5， P<0.05)，肠道组织炎症减轻(9.5367±3.025比5.7871±1.489， P<0.01)，氧化应激水平明显下降(TBARS 11.4420±0.074比8.1148±0.013， P<0.01；GPx 17.5674±5.769比35.1576±11.077， P<0.01)，肠道上皮细胞增殖能力增强(1.48±0.212比3.8±0.1， P<0.01)，凋亡减少(5.4974±0.967比3.7773±0.772， P<0.05)；干预组肠道组织损伤程度及凋亡水平较NEC组有所改善的同时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:β-胡萝卜素可通过降低肠道氧化应激水平来减轻NEC新生小鼠肠道损伤程度，缓解肠道炎症反应，促进肠上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。提示β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤具有保护作用。