目的:运用坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)新生小鼠模型，探讨β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤的作用。方法:选用5日龄C57BL/6新生小鼠15只，按随机数字法分为三组，每组5只。对照组：母鼠哺乳喂养，无其他任何干预；NEC组：通过对新生小鼠缺氧刺激，人工喂养及脂多糖干预诱导产生NEC；β-胡萝卜素干预组：在诱导产生NEC的同时，给予新生小鼠胃管灌注β-胡萝卜素(1 mg/kg)。于生后第9日收集各组新生小鼠末端回肠组织，分析比较NEC病理评分，肠道炎症反应，肠上皮细胞增殖、凋亡及氧化应激水平。结果:与对照组相比，NEC组肠道出现明显损伤(0/5比5/5， P<0.05)，炎症反应(1.0122±0.03比9.5367±3.025， P<0.01)及氧化应激水平(TBARS 6.9292±0.129比11.4420±0.074， P<0.01; GPx 25.21±7.113比17.5674±5.769， P<0.01)明显升高，肠上皮细胞增殖能力下降(5.36±0.308比1.48±0.212， P<0.01)，且凋亡增多(2.5683±0.39比5.4974±0.967， P<0.01)；与NEC组相比，β-胡萝卜素干预组的肠道组织损伤程度明显降低(5/5比1/5， P<0.05)，肠道组织炎症减轻(9.5367±3.025比5.7871±1.489， P<0.01)，氧化应激水平明显下降(TBARS 11.4420±0.074比8.1148±0.013， P<0.01；GPx 17.5674±5.769比35.1576±11.077， P<0.01)，肠道上皮细胞增殖能力增强(1.48±0.212比3.8±0.1， P<0.01)，凋亡减少(5.4974±0.967比3.7773±0.772， P<0.05)；干预组肠道组织损伤程度及凋亡水平较NEC组有所改善的同时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:β-胡萝卜素可通过降低肠道氧化应激水平来减轻NEC新生小鼠肠道损伤程度，缓解肠道炎症反应，促进肠上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。提示β-胡萝卜素对NEC新生小鼠肠道损伤具有保护作用。

目的:根据中医“异病同治”理论，运用网络药理学方法探讨参苓白术散治疗T2DM与溃疡性结肠炎的分子关联规律。方法:采用TCMSP、ETCM中药化学成分数据库获取参苓白术散的化学成分并预测其作用靶点；结合OMIM、GeneCards、DrugBank、TTD疾病数据库获取T2DM与溃疡性结肠炎的靶点，利用微生信平台获取参苓白术散化学成分、T2DM、溃疡性结肠炎的交集靶点，应用Cytoscape 3.8.2软件绘制“中药-化学成分-靶点”网络及“有效成分-交集靶点”网络。借助STRING数据库对交集靶点进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析。应用STRING数据库构建交集靶点PPI网络，应用Cytoscape 3.8.2软件的CytoNCA插件获取核心靶点。采用分子对接技术检验复方的核心成分与靶点的效应关系。结果:获得参苓白术散化学成分176个，对应靶点226个，T2DM靶点11 478个，溃疡性结肠炎靶点4 857个，药物化学成分与疾病交集靶点162个。GO功能及KEGG通路富集分析获得相关生物过程1 789个、分子功能163个、细胞组分92个，获得192条通路，主要涉及AGE-RAGE、TNF、IL-17、MAPK、PI3K-Akt信号通路等。参苓白术散核心成分主要为谷固醇、木犀草素、山柰酚、柚皮素、β-胡萝卜素等，核心靶点包括EGFR、ALB、IL1B、CASP3、ESR1、VEGFA、PTGS2、TNF、IL6、MYC、AKT1、JUN、TP53等。分子对接结果显示，核心化学成分与核心靶点具有较好的结合活性。结论:参苓白术散通过作用于TNF、IL1B、IL6、AKT1、VRGFA、PTGS2、MYC、JUN、TP53等核心靶点，调节IL-17信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路、AGE-RAGE信号通路等，改善组织炎症损伤、黏膜屏障损伤、免疫调节失衡、肠道菌群失调、胰岛素抵抗、细胞凋亡、氧化应激等生物进程，异病同治T2DM与溃疡性结肠炎。

目的:通过分析基于靶点网络及临床数据挖掘探究名中医贾跃进治疗冠心病合并抑郁症的用药规律及核心中药处方。方法:通过GeneCards、OMIM、TTD数据库分别获取冠心病及抑郁症的靶点，构建2种疾病靶点的PPI网络，并进一步筛选核心靶点；利用Metascape平台对交集靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析，分析冠心病合并抑郁症的作用机制；通过TCMSP查询作用于靶点的有效成分及包含这些有效成分的中药，将数据导入Cytoscape 3.9.0构建核心靶点-有效成分-中药网络，进行网络拓朴学分析；采集贾跃进老中医2015年1月1日－2021年1月1日的门诊临床数据，运用古今医案云平台（V2.3.5）进行数据挖掘，得到其常用处方，将结果与靶点网络分析得到的中药进行核心处方拟合，并对核心处方中的药物进行分析。结果:冠心病合并抑郁症靶点PPI网络分析获得1 501个交集靶点，可分为4个核心靶点聚类，包括炎症因子类、肿瘤因子类、脂质代谢类因子、纤维化类因子；通过TCMSP获得作用于靶点的有效成分480个，分属181味中药，其中核心成分包括槲皮素、山柰酚、木犀草素、异鼠李素、β-胡萝卜素、金合欢素、刺芒柄花素、鞣花酸。GO富集分析共得61条结果，主要有蛋白质磷酸化的正调控、信号受体激动剂活性、膜面等；KEGG通路富集分析共获得20条结果，主要有癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、JAK-STAT通路等。临床数据挖掘纳入验案120例，方剂148首，涉及中药135味，药性以平、温、微寒、寒为主；药味以甘、苦、辛、淡为主、药物主要归肺、脾、肝、心、肾经等；通过药物关联分析、聚类分析和复杂网络分析综合得出常用组方。将常用组方与靶点网络分析得到的中药拟合出核心处方：半夏、甘草、柴胡、香附、丹参、延胡索、党参、黄芪、石菖蒲。结论:贾跃进老中医治疗冠心病合并抑郁症的用药规律及符合中西医机制的核心处方，本研究为冠心病合并抑郁症的临床治疗和进一步研究提供指导。

目的:基于网络药理学及实验验证探讨红花-白芍药对治疗偏头痛的作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库中筛选红花、白芍的有效成分，使用Swiss Target Prediction预测有效成分的作用靶点；运用GeneCards获取偏头痛的疾病靶点，利用Venny 2.1获取交集靶点。使用STRING进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析并使用Cytoscape构建网络图，利用Metascape进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。使用Cytoscape软件构建"药物-靶点-通路"网络图。采用硝酸甘油法建立偏头痛大鼠模型，依据随机数字表法将造模成功的大鼠分为模型组和观察组（每组5只）。观察组灌胃1.8 g/kg红花-白芍溶液，模型组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液，1次/d，连续给药2周。治疗后评估症状改善情况及检测大鼠血清核心靶点V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A（RELA）、蛋白激酶B1（Akt1）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、肿瘤坏死因子（TNF）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、白细胞介素-6（IL-6）表达情况。结果:红花-白芍药对中的24个有效成分通过多条通路直接作用于178个疾病靶点治疗偏头痛，其中6-羟基山柰酚、β-胡萝卜素、黄芩苷、β-谷甾醇、山柰酚等是核心成分，RELA、Akt1、MAPK1、TNF、Caspase-3、IL-6是至关重要的靶点。GO分析显示，细胞组成（CC）有85个，生物过程（BP）有228个，分子功能（MF）有119个。KEGG信号通路富集分析提示红花-白芍药对主要参与晚期糖基化终末产物（AGE）-晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-Akt和MAPK等信号通路。动物实验验证显示，与模型组比较，红花-白芍药对在0～30、60～90、120～150 min 3个时间段内评分均降低（均 P<0.01），大鼠机械性刺激和热刺激痛阈均增加（均 P<0.01），血清RELA、Akt1、MAPK1、TNF、Caspase-3和IL-6水平均降低（均 P<0.01）。 结论:红花-白芍药对主要通过调节IL-17、TNF、Toll受体、T细胞受体、AGE-RAGE、HIF-1、PI3K/Akt和MAPK等信号通路的RELA、Akt1、MAPK1、TNF、Caspase-3和IL-6等疾病靶点治疗偏头痛。

目的:系统回顾有关营养素、食物和膳食模式对机体炎症因子或氧化应激标记物水平的影响。方法:以营养素、食物、膳食、膳食结构、膳食模式、蛋白质、脂肪、维生素、膳食纤维、炎症、炎性、氧化应激、免疫力、免疫等作为中文检索词，以nutrients、nutrition、food、diet、dietary structure、dietary patterns、protein、fat、vitamin、dietary fiber、immune、immunity、inflammatory、inflammation、oxidative stress等作为英文检索词，分别对万方数据库、中国知网、PubMed和Web of Science等数据库从建库至2020年1月10日收录文献进行系统检索，对符合要求的文献进行系统综述。结果:共纳入3篇中文文献和46篇英文文献。β-胡萝卜素、维生素C、维生素D、多不饱和脂肪酸、部分氨基酸、膳食纤维、异黄酮、胆碱、甜菜碱和白藜芦醇等营养素可降低血浆炎症因子或氧化应激标记物水平，而胆固醇、反式脂肪酸等营养素则可升高其水平。鱼类、精瘦肉、水果、大豆、十字花科蔬菜和坚果等食物可降低血浆炎症因子或氧化应激标记物水平，而牛奶、含糖饮料等食物可提高其水平。地中海膳食模式和其他健康化膳食模式均可降低血浆炎症因子或氧化应激标记物水平，而西方膳食模式可升高其水平。结论:营养素、食物和膳食模式均可对血浆炎症因子或氧化应激标记物水平产生影响。

视黄醇是维生素A的主要活性形式之一,对于机体的生长发育、眼部和皮肤功能维持至关重要,被广泛应用于化妆品、医药和饲料添加领域.动物体内不具备完整的维生素A合成途径,但可通过膳食直接摄入或将膳食中获得的β-胡萝卜素转化获得.为了推进视黄醇的生物法合成研究,首先以β-胡萝卜素合成平台CAR?1 为基础,筛选了 3 种不同来源的醇脱氢酶,确定了大肠杆菌来源的ybbO具有最高的催化活性,转化率可达 95.6%.为了进一步提高反应速率和产量,采用蛋白质融合技术将视黄醇合成模块中 2 个相邻酶blh和ybbO进行融合后,在高产β-胡萝卜素工程菌株CAR?3 中进行评估,获得了最优组合blh-GGGS-ybbO,其产量较融合前提高了 44.9%,达到(111.1±3.5)mg·L-1.进一步工作中,通过引入人源的视黄醇结合蛋白(RBP4)以及转甲状腺素蛋白(TTR),在酿酒酵母中模拟了人体肝脏细胞分泌视黄醇的过程,视黄醇产量增加至(158.0±13.1)mg·L-1.最后,采用过表达INO2 扩张β-胡萝卜素合成途径反应区室,提高血红蛋白VHb表达量以增强氧气的供给,强化PDR3m表达促进视黄醇的转运和开发 2 个阶段发酵工艺等方法,在 5 L发酵罐中成功将视黄醇的产量提升至(2 320.0±26.0)mg·L-1,为视黄醇产业化发展提供了重要基础.

[背景]CrgA是三孢布拉霉(Blakeslea trispora,Bt)中调控类胡萝卜素合成的关键负调控因子,其表达水平会影响类胡萝卜素的合成.[目的]克隆三孢布拉霉crgA启动子并分析其活性,为进一步解析CrgA表达调控机制奠定基础.[方法]通过综合微生物基因组(integrated microbial genomes,IMG)数据库提供的基因组序列,克隆crgA翻译起始位点上游 2 000 bp序列,分析其顺式调控元件和转录起始区域预测,通过 RT-qPCR 分析不同光照时间对三孢布拉霉crgA相对转录水平的影响;构建 4 个不同长度的 crgA 启动子截短序列驱动的 GUS-mGFP5 重组表达载体p1303-procrgAF、F1、F2 和F3,利用农杆菌侵染整合到三孢布拉霉基因组中,在黑暗和光照条件下测定 β-D-葡萄糖苷酸酶(β-D-glucuronidase,GUS)酶活性并观察荧光信号.[结果]crgA启动子不仅包含基础的 TATA-box和 CAAT-box元件,还包括多个与光响应相关的元件.观察荧光结果显示CaMV35S和构建的 4 个突变启动子均能在三孢布拉霉体内驱动下游基因表达,检测GUS酶活性发现 procrgAF3 活性最强,且截短的启动子活性均强于 CaMV35S,btcrgA 启动子序列在1 499-989 bp范围内有激活下游基因表达的光响应元件.[结论]三孢布拉霉的crgA表达具有"光激活"和"光适应"现象,crgA启动子核心区位于procrgAF3 序列,btcrgA启动子上具有响应光调控的顺式作用元件位于 1 499-989 bp.

目的 通过网络药理学、分子对接技术和动物实验探讨桃红四物汤对缺血性脑卒中的调控机制.方法 运用数据库整理分析桃红四物汤与疾病的交集靶点,进行网络拓扑分析及蛋白质相互作用分析并获取核心成分和核心靶点;对交集靶点进行GO和KEGG富集分析;利用分子对接技术获得通路蛋白与核心成分结合能;采用线拴法建立小鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型,利用神经行为学评分、TTC染色技术考察桃红四物汤防治缺血性脑卒中的药效作用,利用Western blot技术考察桃红四物汤对MCAO/R小鼠脑中PI3K、AKT蛋白和炎症因子IL-1β、IL-18表达的影响.结果 桃红四物汤抗缺血性脑卒中的核心成分可能为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、黄芩素、杨梅酮、β-胡萝卜素及常春藤苷,核心靶点可 能 为MAPK14、RELA、TNF、TR53、MAPK1、MYC、FOS、HSP9AA1、ESR1、AKT1、HF1A、CTNNB1.交集靶点主要富集在脂质和动脉粥样硬化、PI3K/AKT 等信号通路,涉及氧化应激、对脂多糖的反应等生物进程.分子对接预测核心成分与通路蛋白具有较好的结合能力.动物实验表明桃红四物汤可降低MCAO/R小鼠神经功能评分,减小脑梗死体积,降低脑内IL-1β、IL-18 的表达,提高PI3K、AKT的表达.结论 桃红四物汤可能通过激活PI3K/AKT信号通路,调节神经炎症,防治缺血性脑卒中.

目的 调查复合膳食抗氧化指数(composite dietary antioxidant index,CDAI)和超额心脏年龄(excess heart age,EHA)之间的关系,为心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的营养预防提供一定的理论参考.方法 本横断面研究数据来源于2007-2020年美国国家健康和营养检查调查(National Health and Nutrition Examination Survey,NHANES)数据库,包括30～74岁、无CVD病史的16 442名参与者.采用Framingham风险评分函数估算心脏年龄,进一步计算出EHA.根据维生素A、C、E,锌,硒和类胡萝卜素的摄入量,构建了代表整体抗氧化水平的CDAI.通过多元线性回归、多元logistic回归和限制性3次样条(restricted cubic splines,RCS)评估CDAI与EHA之间的关联.结果 多元回归分析结果表明,CDAI 与 EHA(β=-0.07,95％CI:-0.14～-0.01)及高 CVD 风险(EHA≥10年)呈负相关(OR=0.98,95％CI:0.96～1.00),RCS分析表明这种关联是非线性的,呈倒L型.在女性中,CDAI与EHA(β=-0.10,95％CI:-0.12～0.00)及高CVD风险(OR=0.97,95％CI:0.94～0.99)也表现出负性非线性相关;而男性中这种负相关无统计学意义.结论 CDAI依从性越高的个体患CVD的风险越低,这种负相关具有性别差异.这一发现为CVD的营养预防提供了新的理论参考,未来需要进一步的临床和基础研究来更深入地探索这种关联.

目的 旨在评估不同潮气量机械通气对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠早期肺纤维化的影响,并初步探讨可能的相关机制.方法 通过尾静脉注射油酸来构建ARDS大鼠模型.对照组(n=10)大鼠给予等量等渗盐水.将建模成功的ARDS模型大鼠根据随机数字表法分为模型组、小潮气量组和大潮气量组,每组10 只.采用HE染色和Masson染色评估肺组织损伤和肺组织纤维化.采用酶联免疫吸附实验检测肺组织I型胶原蛋白(COL I)、羟脯氨酸(HYP)和转化生长因子(TGF-β1)的含量.采用蛋白免疫印迹检测核因子类胡萝卜素 2 相关因子 2(Nrf2)信号通路相关蛋白.结果 与对照组相比,模型组大鼠的PaO2/FiO2 明显降低,而肺W/D值明显升高(P<0.05).与模型组相比,小潮气量组和大潮气量组大鼠的PaO2/FiO2 和肺W/D值均明显升高(P<0.05).模型组大鼠的肺组织损伤评分、肺纤维化评分、COL I、Hyp和TGF-β1 水平、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达均明显升高(P<0.05),而 E-cadherin、Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白表达均明显降低(P<0.05).与模型组相比,大潮气量组大鼠的肺组织损伤评分、肺纤维化评分、COL I、Hyp和TGF-β1 水平、α-SMA蛋白表达均明显升高(P<0.05),而E-cadherin、Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白表达均明显降低(P<0.05).结论 大潮气量机械通气加重ARDS大鼠的肺组织损伤和早期肺纤维化可能是通过抑制Nrf2 信号通路的活化来诱导氧化应激、促进上皮间充质转变来实现.小潮气量机械通气可能更有益于ARDS急性期的治疗.