背景:脊髓损伤有氧化应激、炎症、凋亡、自噬等机制参与其中,激活自噬可改善脊髓损伤后的神经运动功能,对脊髓起保护作用.目的:探讨美洲大蠊研粉对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬蛋白Beclin-1的影响.方法:取30只6-8周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,每组10只:假手术组仅打开椎板,暴露脊髓后缝合;生理盐水组与美洲大蠊组均建立左侧脊髓半横断损伤模型,术后第1天开始分别灌胃给予生理盐水与美洲大蠊研粉,连续给药14 d.术后6 h及1,3,7,14 d 行BBB评分,观察后肢运动功能的情况;给药14 d后处死大鼠,采用免疫组化染色、Western Blot检测、免疫荧光染色检测脊髓半横断损伤区域自噬蛋白Beclin-1的表达情况.结果与结论:①随着术后时间的延长,生理盐水组、美洲大蠊组大鼠BBB评分逐渐升高;与假手术组比较,生理盐水组、美洲大蠊组术后6 h及1,3,7,14 d 的BBB评分均降低(P<0.05);美洲大蠊组术后7,14 d 的BBB评分高于生理盐水组(P<0.05);②免疫组化染色显示,假手术组Beclin-1呈弱阳性表达,主要位于胞浆;生理盐水组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;美洲大蠊组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于生理盐水组(P<0.05);③Western Blot检测与免疫荧光染色显示,生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于生理盐水组(P<0.05);④结果表明,美洲大蠊研粉能够改善脊髓半横断损伤大鼠的后肢运动功能,机制可能是美洲大蠊研粉中的多糖类物质增加了自噬蛋白Beclin-1的表达.

目的 寻找快速鉴别美洲大蠊的方法,并鉴别不同来源美洲大蠊药材的真伪性.方法 采用显微鉴别和薄层色谱对不同来源的美洲大蠊药材进行真伪性考察.结果 美洲大蠊粉末显微鉴别局部特征明显,可明显观察到足部碎片,刚毛,体表碎片,翅部碎片.以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇(19∶5∶5∶3)为展开剂,0.5％茚三酮105℃共热,15批次不同来源的美洲大蠊药材所得薄层色谱点斑点清晰,在相同位置有5个共有斑点.结论 粉末显微鉴别和薄层色谱可作为快速鉴别美洲大蠊的方法,15批次不同来源的美洲大蠊药材均为真品.

目的 研究美洲大蠊Periplaneta americana精粉对高脂饮食小鼠体质量、血糖和肌酐的影响.方法 高脂饮食小鼠分为对照组和实验组(给予美洲大蠊精粉:低剂量100 mg·kg-1、中剂量200 mg·kg-1、高剂量400 mg·kg-1).灌胃第42天和第49天取血后,用试剂盒测定血清血糖和肌酐的含量,实时荧光定量PCR法检测肝脏中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和肾脏中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,中、高剂量组体质量增长率在第42天和第49天均显著低于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).第42天实验组小鼠的血糖、肌酐和MCP-1 mRNA水平与对照组相比有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05),中、高剂量组的G-6-Pase mRNA水平极显著低于对照组(P＜0.01),GLUT2 mRNA水平的差异无统计学意义(P＞0.05).第49天,低、高剂量组小鼠的血糖和肌酐水平显著低于对照组(P＜0.05),且低、中、高剂量组的G-6-Pase、GLUT2和MCP-1 mRNA水平显著低于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).结论 美洲大蠊精粉可降低高脂饮食小鼠的体质量增长率以及血糖、血清肌酐水平,减少肝脏中G-6-Pase mRNA表达和调节GLUT2 mRNA表达水平可能是美洲大蠊精粉降血糖机制之一,并且可能通过降低肾脏中MCP-1 mRNA的表达减轻肾脏损伤.

目的 基于红外光谱法结合化学计量学建立美洲大蠊及其他虫类药材(全蝎、水蛭)粉末的鉴别方法,为美洲大蠊的鉴别提供一定的依据.方法 运用傅里叶变换红外光谱仪采集3种虫药药粉的红外光谱数据,对已得光谱数据二阶求导后运用纵坐标归一化法、标准化法等预处理方法对光谱进行优化,采用化学计量学,包括系统聚类分析(hierar chicalcluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)以及偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)进一步对光谱数据进行分析.结果 美洲大蠊与全蝎、水蛭的红外指纹图谱有差异.美洲大蠊在1 711、1 410、712 cm-1处吸收峰明显,全蝎在1 753、1 400、1 168、717 cm-1处吸收峰明显,水蛭在1 558、1 457、1 400、669 cm-1处吸收峰明显,且水蛭在1 753～1 711cm-1处明显无吸收峰.3种虫类药材在1 800～1 700 cm-1处峰形差异明显较大.二阶导数图谱中,主要峰的位置相同,但共有峰的强度不同.运用HCA分析方法发现3种虫类药材能够被快速区分,运用PCA与PLS-DA分析方法发现3种虫类药材分布在不同区域.结论 本研究能够简便、快速的鉴别美洲大蠊与全蝎、水蛭等虫类药材,为美洲大蠊的质量控制及评价提供参考.

目的 以C57BL/6小鼠为动物模型,观察美洲大蠊Periplaneta americana胸腺素对小鼠毛发生长及生长周期的影响.方法 将背部脱毛的C57BL/6小鼠分为PBS组(空白处理)、THY1组(给药浓度500μg·mL-1)、THY2组(给药浓度500μg·mL-1)、THY3组(给药浓度500μg·mL-1)和Tβ4组(给药浓度500μg·mL-1),连续给药18 d,记录小鼠皮肤颜色变化时间、脱毛区毛发生长状况以及毛囊组织学特征和毛囊数目的变化.通过实时荧光定量PCR法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、β-连环蛋白(β-catenin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平.结果 与PBS组相比,给药组小鼠脱毛后皮肤颜色由粉红变黑的时间更短,毛囊数量均明显更多,且给药组小鼠毛发生长更快.在给药第6天,THY1组和THY3组的β-catenin表达明显高于PBS组;给药第18天,THY2组的MMP-2表达明显高于PBS组,且THY1组的IGF-1表达明显高于PBS组.结论 美洲大蠊胸腺素可以促进C57BL/6小鼠的毛发生长,可能通过提高β-catenin、MMP-2和IGF-1的表达来调控小鼠的毛囊发育与毛发生长.

昆虫肠道菌是重要的微生物资源.为拓展微生物酶资源菌种来源,本研究以含Na2 CO3和脱脂奶粉的培养基从美洲大蠊Periplaneta americana(L.)肠道中筛选产碱性蛋白酶的嗜碱细菌,进行形态学和16S rDNA序列鉴定,并分析温度、pH和Na2 CO3对菌株生长的影响;采用福林-酚法和SDS-PAGE酶谱法测定温度、pH对菌株所产蛋白酶活性和稳定性的影响.结果显示,从美洲大蠊肠道分离到一株嗜碱细菌PaGA523-1,革兰氏阳性,具芽孢,经鉴定为列城芽孢杆菌Bacillus lehensis,其最适生长pH范围为9～11,最适生长温度为37℃,可在含0.03～0.09 mol/L Na2 CO3的肉汤蛋白胨液体培养基中生长.在含Na2 CO3的玉米粉-黄豆饼粉发酵培养基中,菌株PaGA523-1可产生蛋白酶.该蛋白酶的最适反应温度为62℃,最适反应pH范围为9～11.蛋白酶在不同pH缓冲液(7～11)和热处理(40～60℃)后仍具有一定活性,在60℃处理1 h后,仍保留其初始活性的62.68％.SDS-PAGE酶谱法检测结果也定性说明菌株可产生具有一定程度热稳定性的碱性蛋白酶.本研究获得了一株嗜碱性的昆虫肠道芽孢杆菌,该菌可分泌热稳定碱性蛋白酶,在蛋白质水解方面具有潜在应用价值.