目的 探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强小鼠 4T1 乳腺癌原位瘤化学免疫疗法敏感性的影响.方法 构建 4T1 乳腺癌原位瘤模型,将 15 只小鼠随机均分为 3 组,空白组:无干预;对照组:多柔比星(DOX)+PD-1 抑制剂(a-PD-1)治疗,腹腔注射DOX 5 mg·kg-1、1 次/周,腹腔注射PD-1 抑制剂12.5 mg·kg-1、1 次/周;实验组:DOX+a-PD-1+PolyCHb治疗,DOX和a-PD-1 用法同上,PolyCHb:尾静脉注射600 mg·kg-1、3 次/周;给药周期为4 周.给药期间记录肿瘤体积 3 次/周,绘制各组肿瘤生长曲线并计算抑瘤率.29d处死小鼠,剥瘤后称瘤重;免疫荧光法检测肿瘤组织中HIF-1α的含量;HE染色观察肿瘤组织病理变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤增殖指标Ki67 表达情况.结果 与空白组和对照组相比,实验组组肿瘤体积显著减小(P<0.05)、抑瘤率(％)显著提高(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α含量降低(P<0.05);实验组肿瘤组织生长区减少,并伴坏死区增加;各组肿瘤组织细胞凋亡阳性率(％)分别为 18.79±0.62、20.68±1.19、41.65±2.99(F=135.2,P<0.001);此外肿瘤增殖指标Ki67 结果显示对照组与实验组比较有统计学差异(P<0.05).结论 PolyCHb可以增加乳腺原位瘤小鼠化学免疫疗法的敏感性,其作用机制可能与降低HIF-1α表达,促进细胞凋亡和坏死,抑制肿瘤细胞增殖有关.

目的 通过交联血红蛋白、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,制备具有抗氧化特性的人源性聚合血红蛋白,表征其基本理化性质,并对其抗氧化特性进行初步研究.方法 使用戊二醛(GDA)交联血红蛋白(Hb)和抗氧化酶,分别通过圆二色谱和氧解离曲线分析蛋白质二级结构及血红蛋白携氧功能的变化;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;通过体外保存实验初步评估其抗氧化性.结果 制备的抗氧化酶交联的聚合人脐带血红蛋白溶液Hb浓度(20±1)g/L,高铁血红蛋白浓度(MetHb,％)(4.98±0.61)％,SOD活性(23 601.91±2 421.14) U/gHb,CAT活性(536.06±42.43) U/gHb;圆二色谱结果显示,戊二醛交联未使蛋白二级结构发生明显改变;氧解离曲线结果显示,戊二醛交联提高了血红蛋白的氧亲和力;PolyPHb-SOD-CAT与聚合人胎盘血红蛋白(PolyPHb)相比,在25℃保存期间,前者MetHb含量更低.结论 制备出具有抗氧化酶活性的PolyPHb-SOD-CAT,其蛋白二级结构发生改变氧亲和力增加,在体外实验中表现出了抗氧化特性,可作为1种具有抗氧化特性的血红蛋白类载氧体.

目的 采用PolyCHb携氧复苏液救治失血性休克大鼠,观察复苏效果并研究其对血浆EPO含量以及肾组织EPO,EPOR mRNA表达的影响,为休克复苏后氧供恢复状态及HBOCs制品开发提供评价依据.方法 采用大鼠重度失血性休克-复苏模型,将64只成年雄性SD大鼠随机分为:1)假手术组:仅进行大鼠股动/静脉插管;2)PolyCHb组:大鼠股动/静脉插管,制备失血性休克模型,用PolyCHb复苏液进行复苏;3)红细胞组:用红细胞复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同;4)白蛋白组:用5％白蛋白复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同.在放血前(基础值)、休克时、复苏液回输完成(复苏后0h)观察大鼠血压、心率变化,并进行血细胞计数;复苏后24 h和72 h分别取32只大鼠腹主动脉血,离心取血浆,测定血浆EPO含量;取大鼠肾组织,应用实时荧光定量PCR检测24h与72 h组织中EPO与EPOR mRNA的表达情况.结果 PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组复苏后0 h MAP (mmHg)分别为(122.27± 17.25)vs (98.38±18.70)、(90.93±11.58) (P＜0.001);Hb(g/L)含量分别为(78.33±3.61)、(88.50±0.71) vs (64.83±9.72) (P＜0.05);红细胞(1012/L)数量为(3.21±0.30)vs(4.78±0.38) vs (3.23±0.40) (P＜0.05);复苏后24 h PolyCHb组、红细胞组组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量(ng/mL)分别为(7.04±0.51) vs (2.86±0.60) vs(10.4±0.86) (P＜0.05);肾组织EPO mRNA表达值分别为(32.43±3.25) vs (21.69±5.03) (P＜0.01) vs(35.17±17.10) (P＞0.05);肾组织EPOR mRNA表达值分别为(0.20±0.04) vs (0.16±0.02) vs (0.24±0.05)(P＞0.05);复苏后72 h PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量(ng/mL)分别为(1.88±0.30) vs (0.79±0.19)vs(3.10±0.51)(P＜O.05);肾组织EPO mRNA表达值分别为(9.76±2.50)vs(7.59±1.48) (P＞0.05)、(15.27±1.67)(P＜0.05);肾组织EPOR mRNA表达值分别(0.32±0.06) vs (0.29±0.07) vs (0.30±0.15)(P＞0.05).结论 PolyCHb用于复苏重度失血性休克大鼠,通过给缺氧组织供氧,使血浆EPO水平及肾组织EPO mRNA表达降低,但对肾组织EPOR mRNA表达无明显影响.PolyCHb可能可作为1种新型携氧体,早期纠正急性失血性休克大鼠氧供平衡.

目的 探讨抗坏血酸降低聚合血红蛋白输注引起的大鼠氧化损伤的效果.方法 采用动物70％换血模型,将30只健康雄性成年SD大鼠随机均分为假手术组(S组)、对照组(C组)、低浓度抗坏血酸组(L组)、中浓度抗坏血酸组(M组)、高浓度抗坏血酸组(H组),每组6只.C组、L组、M组和H组分别静脉输注2％ PolyHCBH、2％PolyHCBH+0.025％ AA、2％ PolyHCBH+0.05％ AA、2％ PolyHCBH+0.1％ AA进行换血实验;S组仅做股动/静脉插管处理不进行换血.大鼠换血完成后记录平均动脉压(MAP)、心率(HR),并立刻股动脉取血分析血气(PCO2、PO2、Lac、Hct、BEecf)和检测血浆中氧化损伤特征值,包括还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活力及总抗氧化能力(T-AOC).结果 大鼠70％换血后:1)H组与C组相比,GSH浓度(μmol/L)显著降低:(39.16+1.76) vs (43.78±2.73) (P＜ 0.01);2)抗坏血酸组与C组相比,SOD活力(U/mL)无明显改变,分别为(250.54±21.25) vs (258.36±15.59) vs (247.99±12.40) vs (243.61±15.09)(P＞0.05);3) T-AOC随抗坏血酸浓度增加而增加,H组T-AOC较C组相比显著升高:(20.01±4.00) vs (13.09±1.58) (P＜0.01);4)抗坏血酸组与C组相比,MDA浓度均降低,其中M、H组较对照组显著性减少:(34.10±1.18)vs (32.30±1.07) vs (36.20±0.88) (P＜0.01);5)H组与C组相比,8-OHDG含量显著性降低:(3.86±0.45)vs(4.36±0.22) (P＜ 0.05).结论 抗坏血酸能有效降低大鼠脂质过氧化损伤和DNA损伤,高浓度抗坏血酸对上述损伤有显著抑制作用.

目的 探讨不同浓度聚合人脐带血红蛋白 (PolyCHb) 复苏对失血性休克大鼠肺组织的影响.方法 建立Wistar大鼠失血性休克控压模型:将40只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术 (sham) 组、生理盐水 (对照) 组、2％、4％及6％PolyCHb组 (8只/组).sham组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管;后4组建立大鼠失血性休克控压模型, 分别给予生理盐水、生理盐水加相应浓度的PolyCHb复苏.分别在大鼠放血前 (基础值) 、休克、液体回输后0 h (复苏后0 h) 、6 h (复苏后6 h) 观测各组大鼠平均动脉压 (MAP) 、动脉二氧化碳分压 (PaCO2) 、肺氧合指数 (PaO2/FiO2);复苏后6 h以放血法处死大鼠, 收集支气管肺泡灌洗液 (BALF), 测定蛋白含量, 取肺组织, 测定湿/干重比 (W/D) 值, 另取肺组织制备成10％的组织匀浆, 测定丙二醛 (MDA) 、髓过氧化物酶 (MPO) 、超氧化物歧化酶 (SOD) 的含量.结果 1) 复苏后0 h, 2％、4％、6％PolyCHb组与对照组的MAP (mmHg) 为117.25±5.97 vs 132.00±5.98 vs 147.75±5.82 vs 101.13±6.15 (P<0.05).2) 复苏后6 h, 4％、6％PolyCHb组与对照组相比, MAP (mmHg) 分别为114.75±5.26 vs 118.63±13.81 vs 88.38±8.00 (P<0.05);2％、4％PolyCHb组和对照组的PaCO2 (mmHg) 为37.62±3.62 vs 37.13±4.70 vs 25.38±4.10 (P<0.05);2％PolyCHb组和对照组的PaO2/FiO2值为463.69±44.74 vs 403.57±59.73, BALF蛋白浓度值 (mg/mL) 为0.13±0.04 vs 0.23±0.06 (P<0.05), MDA (nmol/mg protein) 为1.17±0.11 vs 1.47±0.20, MPO (U/g tissue) 为0.37±0.08 vs 0.76±0.23 (均为P<0.05);2％、4％、6％PolyCHb组和对照组的SOD (U/mg protein) 为2.04±0.27 vs 1.87±0.30 vs 1.63±0.10 vs 1.83±0.04 (均为P>0.05).结论 具有携氧功能的低浓度PolyCHb可以减轻失血性休克大鼠肺损伤;但随着PolyCHb浓度的升高, 大鼠氧化应激增强, 反而加重肺损伤.

目的 探讨聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)对动物心肌组织的影响.方法 取18只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术(Sham)组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管,颈静脉及右侧颈总动脉插管;NaCl组及PolyCHb组:除同Sham组一样麻醉、插管后,分别输注生理盐水或PolyCHb(800 mg/kg);连续监测基础值、输注后0、10、20、30、60min 3组大鼠的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、左心室收缩末期压力(pes)、左心室舒张末期压力(ped)、室内压最大上升速率(dp/dt max)、室内压最大下降速率(dp/dt min)、等容舒张时间常数(Tau).另取18只大鼠同样分作3组,麻醉、插管后按分组做相应处理,取输后1、3、6h血样于EDTA抗凝管中,离心取血浆,测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白Ⅰ(cTn Ⅰ)含量,6h时处死大鼠,取心脏做病理学检测.结果 PolyCHb组、NaCl组与sham组比较:1)术(输)后0-60 min MAP(mmHg)及pes (mmHg)持续升高,至输注后60 min时,分别为128.50±7.26 vs115.67±4.72 vs 106.5±14.84(P＜0.05)与148.30±18.16 vs 122.83±13.57 vs 122.07±19.00(P＜0.05);术(输)后HR(次/min):0 min时分别为302.83±20.76vs 371.00±43.36 vs 387.50±47.27 (P＜0.05),60 min时分别为391.50±34.26 vs 416.83±33.47vs431.50±33.76 (P＞0.05);ped (mmHg):60 min时分别为11.34±11.58 vs6.83±4.79vs8.14±4.25(P＞0.05);2) dp/dt max(mmHg/s)与dp/dt min(mmHg/s)术(输)注0min分别为6 530.50±418.63 vs8341.50±1 095.00 vs8 242.17±1 579.38与5 352.83±449.02 vs7 687.00±1 111.87 vs7 799.50±2 246.39(P＜0.05),至术(输)后60 min分别为8 139.00±758.26 vs 10 083.33±1 256.59 vs 10 032.17±1 779.30与7 457.33±915.62 vs9192.00±892.90 vs9 069.50±2 104.49(P＜0.05);3)Tau术(输)后0min分别为17.01±3.72 vs 12.69±3.32 vs 12.57±2.07(P＜0.05);4) CK-MB(pg/mL)术(输)后1、3h术(输)后1、3h时分别为63.41±13.15 vs 49.67±20.10 vs 38.20±6.02与101.88±28.08 vs 37.80±18.21 vs 37.94±10.71(P＜0.05);5)cTnⅠ (pg/mL)术(输)后3h分别为14.61±7.03vs 5.32±2.96 vs 5.72±2.90(P＜0.05).PolyCHb组大鼠术(输)后6h病理检查未见心肌损伤.结论 输注PolyCHb可影响心肌功能,酶学水平升高,但不会造成病理损伤.

目的 了解聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏液对失血性休克大鼠肝脏组织的影响.方法 用改良wiggers法建立大鼠失血性休克模型,将32只健康SD雄性大鼠随机均分为4组:麻醉后大鼠仅行股动/静脉插管的假手术(Sham)组,以及在行股动/静脉插管后分别用羟乙基淀粉(HES)、含20 g/L Hb(2％PolyCHb)、60 g/L Hb(6％PolyCHb)的HES做复苏液行液体复苏的3个实验组.用多通道生理记录仪监测大鼠放血前(基础值)、休克时、复苏后即刻(0 h)的平均动脉压(MAP)和心率(HR);复苏后6h通过腹主动脉取血处死大鼠,立即检测血液中Hb、Hct、ALT和AST,并随即取右叶肝脏组织制备成10％组织匀浆,用商品化试剂盒测定活性氧簇(ROS)含量和总抗氧化能力(T-AOC),另取左叶肝脏组织固定于10％中性甲醛做病理切片并做病理损伤定性分析.结果 2％及6％PolyCHb组与HES组大鼠失血性休克复苏后0 h:MAP(mmHg)分别为111±10.66 vs 132±6.09 vs 85.71±5.25 (P＜0.01),HR (b/min)分别为329.38±20.71 vs 282.75±48.03 (P＜0.05)vs 308.71±33.11 (P＞0.05);复苏后6h:血液中Hb(g/L)分别为70.75±5.92 vs 84.13±9.33 vs 60.63±8.45 (P＜0.05),Hct(％)分别为18.75±1.68 vs 18.00±3.20 vs18.15±2.42 (P＞0.05),ALT(U/L)分别为197.44±42.08 vs 162.75±44.06 vs 183.96±40.53(P＞0.05),AST(U/L)分别为732.41±101.17 vs 737.86±113.90 vs 826.89±78.44(P＞0.05),肝脏组织匀浆中ROS (U/ml)分别为419.84±17.76 vs 428.08±17.84 (P＞0.05)vs 396.21±3.72 (P＜0.05),T-AOC (mmol/L)分别为0.63±0.01 vs 0.60±0.02 vs0.67±0.01 (P ＜0.05);病理切片:2％PolyCHb组有中央内皮静脉和免疫细胞浸润方面的损伤,6％PolyCHb组有中央内皮静脉、肝窦和免疫细胞浸润方面的损伤,HES组有中央内皮静脉、内皮细胞、脂肪变性和免疫细胞浸润方面的损伤.结论 中、低浓度PolyCHb复苏液和HES一样均能对危重失血性休克大鼠模型有效复苏;降低PolyCHb浓度能减轻肝脏组织在失血性休克液体复苏过程中的病理损伤.

目的 比较聚合人脐带血红蛋白(polymerized human cord hemoglobin,P olyCHb)与游离血红蛋白(free hemoglobin,FHb)部分体外凝血指标的异同,以分析PolyCHb对凝血功能障碍的影响.方法 使用生理盐水,2种浓度的FHb和PolyCHb及含36％高铁血红蛋白的PolyCHb分别与新鲜全血或富血小板血浆(PRP)等比混合,于37℃孵育30 min检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅱ活性(FⅡ∶C)、凝血因子Ⅴ活性(FⅤ∶C)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ∶C)、血管性血友病因子(vWF)以及血小板P选择素(CD62P).结果 1)NaCl组:PT(22.68±1.76)s;APTT (59.58±7.52)s;FⅡ∶C(45.91±3.27)％;FⅤ∶C(30.86±4.43)％;FⅧ∶C(41.32±12.94)％;FⅨ∶C(23.96±5.10)％;vWF(2.14±0.54) mg/L;CD62P (7.44±4.47)％,该组结果作为稀释对照;2)2％FHb组与7％FHb组相比:FⅧ∶C(42.16±12.31)％vs(56.64±12.22)％ (P＜0.05),其余指标无差异(P＞0.05);3) 2％ PolyCHb组与7％ PolyCHb组相比无差异(P＞0.05);4) 2％FHb组与2％ PolyCHb组相比无差异(P＞0.05);5) 7％FHb组与7％ PolyCHb组相比:PT(23.31±1.34)svs(21.97±1.56)s (P＜0.05);APTT(50.12±5.72)svs(55.43±5.43)s(P＜0.05);FⅧ∶C(56.64±12.22) ％vs(42.37±13.00)％(P＜0.05);vWF(1.41±0.30) mg/Lvs(2.25±0.41) mg/L(P＜0.05),其余指标无差异(P＞0.05);6)7％ PolyCHb组与Met-PolyCHb组相比:APTT(55.43±5.43) svs(46.33±4.86)s(P＜0.05);FⅧ∶C(42.37±13)％vs(60.51±10.16)％(P＜0.05),其余指标无差异(P＞0.05).结论 PolyCHb对部分凝血指标的影响与FHb不同,在本研究的浓度下不会造成凝血障碍.但Met-PolyCHb含量过高,会影响凝血功能.

目的 探讨输注聚合人脐带血血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强肝癌荷瘤裸鼠对仑伐替尼治疗敏感牲的作用机制.方法 建立Hep3B肝癌细胞系裸鼠皮下移植瘤模型,将18只荷瘤小鼠随机均分为对照组:生理盐水灌胃90 mg·kg-1·d-1;单药组:仑伐替尼灌胃10 mg·kg-1·d-1;增敏组:仑伐替尼灌胃10 mg·kg-1·d-1,PolyCHb尾静脉注射600 mg·kg-1,2次/周;3组均连续给药28 d,定时测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线,在29 d处死裸鼠,剥瘤称取肿瘤重量并做苏木精-伊红染色法(HE)切片评价各组肿瘤的病理形态学;免疫组化(IHC)法测定各组肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)、CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、CD44、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的表达量;二氢乙锭法测定各组肿瘤组织中活性氧(ROS)的含量.结果 29 d(给药28 d结束后24 h),对照组、单药组及增敏组分别为肝癌荷瘤裸鼠肿瘤体积(mm3):2 076.46±350.25 vs 1 035.96±84.16 vs 892.66±104.46(P＜0.05);肿瘤重量(g):1.61±0.52 vs 0.45±0.10 vs 0.34±0.13(P＜0.05);IHC 评分(分):HIF-1α 分别为75±23 vs 45±18vs 18±11,VEGF 分别为52±8 vs 67±16 vs 35±4,CD34分别为40±7 vs 50±13 vs 28±7,CD44分别为37±15 vs 30±7 vs 15±3,GLUT-1 分别为74±41 vs 51±30 vs 14±18,MMP-9分别为51±7 vs 62±20 vs 33±3(均为 P＜0.05);HE切片染色评价:增敏组的肿瘤恶性程度明显低于单药组和对照组;肿瘤组织的ROS含量评价:增敏组较单药组、对照组有所提高.结论 PolyCHb的氧合作用,降低了裸鼠肝癌移植瘤模型中HIF-1α及其下游通路相关分子的表达,在一定时间内延缓了肿瘤生长,提升增强了仑伐替尼的疗效.

目的 本研究旨在探讨miR-103b在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)孕妇外周血、脐血中的表达水平及对糖代谢指标的影响.方法 选取2018年1月至2021年1月于沧州市人民医院住院分娩的175例GDM孕妇作为研究对象(GDM孕妇组),并纳入同期在本院分娩的180例健康孕妇作为健康对照组.收集孕妇分娩前外周血和分娩后脐带血,记录一般资料和糖代谢指标.采用实时定量聚合酶链反应检测外周血和脐血中miR-103b和分泌型卷曲相关蛋白4(secreted frizzled-related protein 4,SFRP4)mRNA表达量.结果 GDM孕妇组的新生儿体重、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)和糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)水平均显著高于健康对照组(P均<0.05).GDM孕妇组外周血中miR-103b相对表达量显著低于健康对照组的表达量(t=5.324,P<0.001);GDM孕妇组外周血中SFRP4 mRNA相对表达量显著高于健康对照组的表达量(t=4.836,P<0.001).GDM孕妇组新生儿脐血中miR-103b相对表达量显著低于健康对照组的表达量(t=4.724,P<0.001);新生儿脐血中SFRP4 mRNA相对表达量显著高于健康对照组的表达量(t=4.862,P<0.001).GDM孕妇组外周血中miR-103b表达量与新生儿体重、FPG、FINS、HOMA-IR和HbA1c均呈显著负相关关系(P均<0.05);新生儿脐血中miR-103b表达量与新生儿体重、FINS、HOMA-IR和HbA1c均呈显著负相关关系(P均<0.05).GDM孕妇组外周血和新生儿脐血中miR-103b表达水平的Pearson相关性分析结果显示两者呈显著正相关关系(r=0.716,P<0.001).结论 miR-103b在GDM孕妇外周血、脐血中的表达显著降低,且具有一致性,可能参与到GDM的糖代谢调控机制中.