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模拟微重力环境下人HaCaT细胞热损伤效应研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨模拟微重力环境下人HaCaT细胞的热损伤效应。方法:取人HaCaT细胞,采用随机数字表法分为模拟微重力热损伤(SMGTI)组、正常重力热损伤(NGTI)组和正常重力假伤(NGFI)组。NGFI组和NGTI组细胞于培养瓶中常规培养,SMGTI组细胞应用旋转细胞培养系统模拟微重力培养。将SMGTI组和NGTI组细胞置于45 ℃热水中10 min制作热损伤模型,NGFI组细胞置于37 ℃温水中10 min致假伤。伤后12 h,倒置相差电子显微镜下观察3组细胞形态。伤后2、6、12 h,取3组单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量反转录PCR检测热休克蛋白70(HSP70)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达量,实验重复3次。伤后2、6、12 h,取3组细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定法检测肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)浓度,实验重复3次。各组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验、Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验。 结果:(1)伤后12 h,NGFI组细胞形态规则,细胞间排列规则,未见细胞碎片。NGTI组细胞形态较规则,细胞碎片较少,细胞间排列较NGFI组紧密。SMGTI组不规则形态细胞较多,大小不一,可见死亡细胞碎片。(2)NGTI组伤后2 h G1期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高( P<0.05),伤后6、12 h较NGFI组和SMGTI组明显降低( P<0.05)。NGTI组伤后2 h的G2/M期细胞百分比较SMGTI组明显降低( P<0.05),NGTI组伤后6、12 h G2/M期细胞百分比较NGFI组和SMGTI组明显升高( P<0.05)。NGTI组伤后2、6、12 h S期细胞百分比较SMGTI组明显升高( P<0.05),NGTI组伤后2、6 h S期细胞百分比较NGFI组明显降低( P<0.05)。(3)伤后2、6 h,NGTI组细胞HSP70 mRNA表达量为2.50±0.30、3.99±0.35,较NGFI组明显升高(1.14±0.15、0.82±0.27, P<0.05),较SMGTI组明显升高(1.17±0.53、1.65±0.59, P<0.05)。伤后2、6、12 h,SMGTI组细胞MMP-9 mRNA表达量较NGTI组明显升高( Z=-2.319、-2.882、-2.908, P<0.05)。伤后各时间点,NGTI组细胞caspase-3 mRNA表达量与NGFI组、SMGTI组相近( P>0.05)。(4)伤后2、6、12 h,NGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGFI组明显降低( P<0.01)。伤后2、6 h,SMGTI组细胞培养上清液中HB-EGF浓度较NGTI组明显升高( P<0.01)。 结论:模拟微重力条件下热损伤人HaCaT细胞的增殖、分泌功能以及创伤修复相关蛋白表达呈现复杂、多元的变化,这为进一步研究失重条件下损伤修复提供了理论基础。
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编辑人员丨6天前
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毛蕊异黄酮对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响及其与HB-EGF的关系
编辑人员丨6天前
目的:评价毛蕊异黄酮对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响及其与肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的关系。方法:清洁级雄性Wistar大鼠25只,6周龄,体重250~300 g,采用随机数字表法分为5组( n=5):假手术组(Sham组)、VILI组、毛蕊异黄酮5 mg/kg组(M1组)、毛蕊异黄酮10 mg/kg组(M2组)、毛蕊异黄酮20 mg/kg组(M3组)。于机械通气前7 d开始口饲药物,Sham组和VILI组口饲玉米油1 ml/d;M1组-M3组分别口饲毛蕊异黄酮溶液5、10、30 mg/kg,共7 d。之后禁食8 h,制备VILI模型。机械通气4 h后,行左肺肺泡支气管灌洗术,回收支气管肺泡灌洗液(BALF),采用BCA法检测总蛋白浓度,采用ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-10浓度,瑞氏染色后计算中性粒细胞比例;随后处死大鼠,取肺组织,计算湿重/干重(W/D)比值,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2及HB-EGF表达,免疫组化法检测HB-EGF染色面积,HE染色法观察肺病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,计算TUNEL阳性细胞密度。 结果:与Sham组比较,VILI组W/D比值、BALF中性粒细胞比例、总蛋白、TNF-α和IL-10浓度升高,HB-EGF表达下调,免疫组化染色面积增加,Bax和Bcl-2表达上调,TUNEL阳性细胞密度升高( P<0.05),肺组织病理学损伤加重。与VILI组比较,M1组BALF总蛋白、TNF-α和IL-1β浓度降低,HB-EGF表达上调,TUNEL阳性细胞密度降低;M2组W/D比值、BALF总蛋白、TNF-α和IL-1β浓度降低,M3组W/D比值、BALF中性粒细胞比例、总蛋白、TNF-α、IL-1β和IL-10浓度降低,M2组和M3组HB-EGF表达上调,免疫组化染色面积增加,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,TUNEL阳性细胞密度降低( P<0.05),肺组织病理学损伤减轻。 结论:毛蕊异黄酮可减轻大鼠VILI,机制可能与促进肺组织HB-EGF的表达,减轻炎症反应及细胞凋亡有关。
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编辑人员丨6天前
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髋关节发育不良合并骨关节炎患者血清标志物表达
编辑人员丨2024/3/23
目的:探讨血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、CC类趋化因子配体5(CCL5)在髋关节发育不良(DDH)并发骨关节炎患者中表达情况及临床意义。方法:本研究纳入邢台市第三医院收治的180例DDH患者设为研究组,排除合并血液系统疾病、代谢性疾病、风湿性免疫疾病、重要脏器功能衰竭、恶性肿瘤、全身炎性疾病以及长期使用免疫抑制剂、糖皮质激素、非甾体类抗炎药的患者,根据有无并发骨关节炎将其分为并发组(72例)和未并发组(108例)。另同期选取180例健康体检者设为对照组。所有受试者均检测血清HB-EGF、CCL5水平。根据Tonnis分级标准判定骨关节炎严重程度,对比骨关节炎不同严重程度DDH患者的血清HB-EGF、CCL5水平,采用多因素logistic回归分析DDH患者并发骨关节炎的影响因素,并采用Spearman相关性分析法分析血清HB-EGF、CCL5表达水平与DDH患者骨关节炎严重程度的关系。结果:研究组血清HB-EGF、CCL5水平高于对照组(t=29.933、14.021,均为P<0.001);并发组年龄、Crowe分型Ⅲ~Ⅳ型患者占比及血清HB-EGF、CCL5水平均高于未并发组(t=8.857、χ2=7.018、t=12.025、t=8.536,均为P<0.05);年龄[比值比(OR)=1.504,95%置信区间(CI)(1.132,2.457),P=0.014]、Crowe分型[OR=2.347,95%CI(1.568,3.742),P<0.001]、血清HB-EGF水平[OR=1.994,95%CI(1.472,2.993),P<0.001]、血清CCL5水平[OR=1.548,95%CI(1.055,2.602),P=0.007]均是DDH患者并发骨关节炎的独立影响因素;骨关节炎不同严重程度DDH患者血清HB-EGF、CCL5水平差异有统计学意义(F=27.255、12.855,均为P<0.05),2级和3级均高于1级(2级t=5.599、5.749,3级t=3.669、3.803,均为P<0.05),3级高于2级(t=2.157、2.232,均为P<0.05);血清HB-EGF、CCL5表达水平与DDH患者骨关节炎严重程度呈正相关(r=0.628、0.497,均为P<0.05)。结论:血清HB-EGF、CCL5在DDH患者中表达上调,在DDH并发骨关节炎中表达水平更高,与骨关节炎严重程度呈正相关,且是DDH患者并发骨关节炎的独立影响因素。
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编辑人员丨2024/3/23
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血清HB-EGF和SAA水平对高血压患者颈动脉粥样硬化的诊断价值
编辑人员丨2023/11/11
[目的]研究血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、血清淀粉样蛋白A(SAA)对高血压患者颈动脉粥样硬化(CAS)的诊断价值.[方法]选取高血压患者100例,根据颈动脉内膜中膜厚度(CIMT)诊断结果将其分为高血压组(n=42)、高血压CAS组(n=58);另选取同期体检的健康受试者50例,设为健康对照组.比较健康对照组、高血压组和高血压CAS组血清HB-EGF、SAA水平及CIMT;采用Pearson相关分析法分析100例高血压患者血清HB-EGF、SAA水平与CIMT的相关性;采用Logistic回归分析法分析CAS的危险因素;采用ROC曲线分析血清HB-EGF、SAA水平对高血压患者CAS的诊断价值.[结果]与健康对照组比较,高血压组和高血压CAS组血清HB-EGF、SAA水平显著升高(P<0.05),CIMT显著增加(P<0.05).与高血压组比较,高血压CAS组血清HB-EGF、SAA水平显著升高(P<0.05),CIMT显著增加(P<0.05).Pearson相关分析显示,血清HB-EGF、SAA水平与 CIMT 均表现为正相关(r=0.807,95%CI:0.7257~0.8662,P<0.001;r=0.765,95%CI:0.6688~0.8357,P<0.001).Logistic回归分析显示,高HB-EGF、高SAA均是高血压患者发生CAS的危险因素(P<0.05).ROC曲线分析显示,血清HB-EGF、SAA水平诊断CAS的最佳截断点分别为19.84 μg/L、8.97 mg/L,两者单独及联合诊断CAS的AUC分别为0.811、0.810、0.875,两者联合诊断的价值高于单独诊断.[结论]血清HB-EGF、SAA水平在高血压CAS患者中显著升高,两者与CIMT均为正相关,且对高血压CAS具有较高的诊断效能.
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编辑人员丨2023/11/11
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肝素非抗凝作用在肝病应用中的研究进展
编辑人员丨2023/8/19
肝素作为一种广泛应用于临床的抗凝剂,常被用作体外循环,以及体内高凝状态时抗凝.通过不断研究发现,肝素除具有抗凝作用外,还可通过Toll样受体、肝细胞生长因子、肝素结合性表皮生长因子、肝素酶、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖等多种信号机制发挥抗炎、抗纤维化、抗肿瘤作用.本文就肝素的非抗凝作用在病毒性肝炎、肝纤维化、肝细胞癌中的潜在应用价值与相关机制作一综述.
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编辑人员丨2023/8/19
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白树毒素融合蛋白的筛选及其抗肿瘤作用和凋亡途径研究
编辑人员丨2023/8/6
通过白树毒素(Gelonin)与多种穿膜肽(Cell-Penetrating Peptide,CPP)融合,获得一种抗肿瘤活性最高的Gelonin-HBP重组蛋白并研究其抑制肿瘤细胞增长的分子机制.以大肠杆菌BL21(DE3)重组表达及NI-NTA亲和纯化4种CPP(R9、TAT、HBD和HBP)与Gelonin融合的重组蛋白,通过超螺旋切割和体外翻译抑制实验检测其生物活性;激光共聚焦显微镜观察Gelonin重组蛋白穿膜效率、以MTT法检测其对肿瘤细胞的作用、并用流式细胞术及Western blot法观察其细胞凋亡的分子机制.结果显示,获得了保留Gelonin原有生物活性的4种Gelonin重组蛋白,连接CPP的Gelonin均能促进Gelonin的穿膜及抑杀肿瘤细胞效应,其中Gelonin-HBP活性最强,对于HeLa、B16、MCF-7和HepG2四种肿瘤细胞比单独的Gelonin活性分别提升16.4倍、9.6倍、14.0倍和24.6倍;免疫印迹分析表明Gelonin-HBP诱导了肿瘤细胞Caspas 3、Caspas 8及Caspas 9的活性、Bax表达量显著增加,而Bcl-2的表达量显著降低.CPP促进了Gelonin对肿瘤细胞的抑杀和促凋亡作用,其中来源于人肝素结合表皮生长因子样生长因子的HBP连接Gelonin的抗肿瘤作用最强,其诱导肿瘤细胞凋亡的机制与线粒体和死亡受体介导的凋亡信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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促性腺激素释放激素激动剂控制性超促排卵对小鼠胚胎着床的作用及其机制
编辑人员丨2023/8/6
本研究旨在探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormone agonist,GnRHa)控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)对小鼠胚胎着床的作用及机制.40只9周龄昆明雌性小鼠随机分为两组:COH组腹腔注射GnRHa醋酸丙氨瑞林+人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin,HMG)+人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG),对照组腹腔注射等体积生理盐水.注射hCG日16:00雌雄小鼠合笼,妊娠第4天每组处死10只小鼠,用放射免疫法检测血清雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progestrone,P)的水平;用HE染色观察卵巢、子宫内膜组织形态;用Western blot和免疫组织化学法检测子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)和glycodelin A蛋白的变化.妊娠第8天每组处死10只小鼠,观察胚胎着床情况.结果显示,与对照组比较,COH组小鼠妊娠第4天(胚胎着床期)血清E2水平降低(P<0.05),P水平升高(P<0.05);卵巢组织各级卵泡少见,可见多个黄体,子宫内膜变薄,腺体数量减少(P<0.05);子宫内膜LIF、p-STAT3、HB-EGF和glycodelin A蛋白表达下降(P<0.05);妊娠第8天胚泡发育缓慢,数量减少(P<0.05).以上结果提示,GnRHa COH可影响小鼠胚胎着床,其机制可能与着床期内源性激素失衡,子宫内膜结构和LIF、p-STAT3、HB-EGF、glycodelinA蛋白表达改变,导致子宫内膜容受性降低、胚胎-子宫对话异常有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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在Prrx1+骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子抑制小鼠骨发育
编辑人员丨2023/8/6
背景:肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨骼的发育十分重要,但目前尚未报道过体内骨髓间充质干细胞来源的肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发育的影响.目的:探究在骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发育的影响并初步分析相关机制.方法:利用 Cre-LoxP 系统构建在 Prrx1+骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子(ROSA26tm1(HB-EGF); Prrx1-Cre)的小鼠模型,取骨组织切片染色进行组织学分析.取小鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养,进行分化能力检测和分子机制研究.实验于2015年经上海交通大学实验动物管理、学术、伦理与使用委员会批准,批准号为A2015027.结果和结论:①Prrx1在成年小鼠股骨关节头、生长板、骨小梁表面和骨膜上均有表达;②ROSA26tm1(HB-EGF);Prrx1-Cre小鼠股骨变短,骨量明显减少,软骨形态和结构异常,出现骨关节炎样表型;③ROSA26tm1(HB-EGF);Prrx1-Cre小鼠骨髓间充质干细胞体外成骨、软骨分化减弱.结果提示在骨髓间充质干细胞中过表达HB-EGF可能通过削弱骨髓间充质干细胞成骨、软骨分化抑制小鼠骨发育.
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编辑人员丨2023/8/6
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肝素结合样表皮生长因子在机体各组织器官损伤中的修复作用研究进展
编辑人员丨2023/8/5
肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)是表皮生长因子(EGF)家族中的一员,是一种高效的有丝分裂原和趋化蛋白.HB-EGF主要表达皮肤表皮基底层,可通过刺激角质细胞迁移、基底细胞增殖促进皮肤伤口的愈合.HB-EGF可通过促进人角膜上皮细胞的增殖与迁移,激活EGFR,促进角膜上皮细胞的创面愈合;可刺激视网膜中Müller神经胶质细胞去分化和增殖,促进视网膜的再生.HB-EGF是一种由缺氧诱导的神经保护蛋白,能刺激神经元前体细胞的增殖,具有神经营养功能.HB-EGF是Ⅱ型肺泡上皮细胞的有丝分裂原,可通过促进Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并分化为Ⅰ型肺泡上皮细胞,为肺泡结构重建提供基础;同时激活EGFR信号通路,促进细胞的增殖,抑制细胞凋亡,减轻肺部的炎症和损伤.HB-EGF可制肠上皮细胞凋亡、减少炎症因子浸润、促进肠细胞间黏附、促进肠细胞迁移与增殖,参与胃肠道上皮的损伤修复.HB-EGF是肝细胞的有丝分裂原,有肝细胞营养作用,促进肝细胞的增殖.
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编辑人员丨2023/8/5
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血清LIF、HB-EGF与冻融胚胎移植术后妊娠结局的相关性及对妊娠成功预测价值分析
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨血清白血病抑制因子(LIF)、肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)与冻融胚胎移植术后妊娠结局的相关性及对妊娠成功预测价值分析.方法:选取2019年3月至2019年12月拟进行冻融胚胎移植术患者的92个周期,随访根据妊娠结局分为妊娠组(32周期)和非妊娠组(60周期),比较两组年龄、不孕年限、子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度等可能影响妊娠结局的因素;比较2组移植日血清LIF、HB-EGF水平,并采用Logistic回归分析法明确可能导致妊娠失败的危险因素;通过绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清LIF、HB-EGF水平对妊娠成功的预测价值.结果:妊娠组与未妊娠组子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度比较,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠组移植日血清LIF质量浓度[(24.45±2.91)pg/mL]高于未妊娠组[(19.32±2.04)pg/mL],HB-EGF质量浓度[(3 320.59±300.74)pg/mL]高于未妊娠组[(2 430.55±261.37)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析,子宫内膜形态、移植日子宫内膜厚度、血清LIF、HB-EGF水平均是导致冻融胚胎移植术后妊娠失败的危险因素(OR=3.074、2.563、4.437、3.881,P<0.05);经ROC曲线分析,血清LIF预测冻融胚胎移植术后妊娠成功的灵敏度、特异度、准确度和AUC分别为84.38%、76.67%、79.35%、0.760;血清HB-EGF水平预测的灵敏度、特异度、准确度和AUC分别为78.13%、73.33%、75.00%、0.722.结论:血清LIF、HB-EGF水平与冻融胚胎移植术后妊娠结局关系密切,且两者对冻融胚胎移植术后妊娠成功有较高预测价值.
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编辑人员丨2023/8/5
