患儿男，8岁，体重45 kg，因先天性小耳畸形来中国医学科学院整形外科医院耳再造二中心就诊。于2020年12月10日在全身麻醉下行右侧扩张皮瓣法全耳再造术。由于患儿健侧耳较大、肋软骨较薄，术中采取双侧第7、8肋软骨行耳支架雕刻；手术于10：00开始至14：00结束。术毕拔除气管导管后，患儿出现呼吸困难，呈憋喘状、面色发绀。立即行胸部CT平扫，提示双侧肺不张，左肺下叶为著。立即将鼻导管氧气吸入改为面罩氧气吸入，用简易呼吸器球囊给予适当呼吸压力，压力在25~30 cm H 2O，使塌陷肺泡以及通气不良的肺泡实现复张，患儿血氧饱和度恢复到98%；4 h后停止氧气吸入，患儿再次出现面色发绀，端坐呼吸，监测血氧饱和度65%。术后1 d停止吸氧，并继续进行肺部康复训练，术后2 d采用吹气球训练促进患儿肺部康复，患儿每日早、晚各吹小气球5次，训练完毕后无疲劳感，自觉呼吸顺畅，且训练完毕30 min内均有痰液排出。经过治疗后，患儿恢复良好，输注头孢呋辛钠0.75 g，每天3次预防肺部感染，住院15 d康复出院。

桉树因其优异的特性在我国拥有广大的种植面积,在其栽培和生产加工过程会产生大量的桉树皮和桉木屑等副产物,其剩余物资源较丰富.目前已有利用桉木屑栽培食用菌的报道,为了解桉树皮和桉木屑与杂木屑栽培的肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)代谢物的差异,该研究采用超高效液相色谱-串联质谱(Ultra-High Performance Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry,UHPLC-MS/MS)技术,结合正交偏最小二乘法-判别分析法(Orthogonal Projections to Latent Structures Discriminant Analysis,OPLS-DA)对不同栽培基质条件下肺形侧耳子实体的代谢物进行了非靶向代谢组学研究.以变量权重值(Value Importance in Projection,VIP)＞1结合T检验P＜0.05为标准进行筛选.结果表明:(1)处理组B(桉木屑)与对照组A(杂木屑)之间有45种差异代谢产物和8种差异代谢物通路,处理组C(桉树皮)与对照组A之间有53种差异代谢产物和15种差异代谢物通路,处理组B与处理组C之间有39种差异代谢产物和5种差异代谢物通路.(2)根据KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)代谢通路富集分析处理组C和对照组A得到4条显著的代谢通路,分别为精氨酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、泛酸和辅酶A生物合成和丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,处理组B和处理组C得到1条显著的代谢通路为组氨酸代谢,而处理组B和对照组A中无显著性代谢通路(P＞0.05).综上表明,利用桉树皮和桉木屑作为肺形侧耳的主要栽培基质(尤其是桉木屑),可以降本增效和实现资源再利用.该研究结果为桉树加工副产物应用于食用菌栽培提供了参考.

线粒体是能量转化与ATP形成的重要场所,已有多种食用真菌的线粒体基因组被相继组装注释,但肺形侧耳的线粒体基因组鲜有报道.本研究对野生肺形侧耳X2菌株的线粒体基因组进行组装并注释,由野生菌株X2与主栽菌株JX线粒体大片段差异序列,构建分子标记来鉴别野生和主栽肺形侧耳菌株.结果显示X2的线粒体基因组为大小75 709bp的闭合环状结构,含有rRNA的大小亚基基因,25个负责携带氨基酸的tRNA基因以及14个常见蛋白编码基因,在cox1基因上含有9个内含子.内含子主要为IB型,包含LAGLIDADG_1 superfamily、GIy-yIG_Cterm superfamily保守结构域.位于菌株X2与JX内含子和基因间区上的大片段差异序列,是造成种内线粒体多态性的主要因素.根据两菌株的差异片段构建系统进化树的结果显示,内含子、rnl-trnX、trnD-atp6序列能够将两株野生菌株和其他主栽菌株区分开,可用于野生肺形侧耳种内鉴定,而且trnD-atp6效果最佳.

本文以肺形侧耳栽培菌株X57为研究对象,利用高通量RNA测序技术对4℃低温处理0h、6h和12h后的肺形侧耳进行基因表达分析来探讨肺形侧耳低温应答机制.分析结果筛选出低温处理6h差异表达基因742个,其中上调表达基因374个,下调表达基因368个;低温处理12h差异表达基因1 489个,其中上调表达基因占53％,下调表达基因占47％.Gene Ontology (GO)功能聚类分析表明,差异表达基因主要富集在结合、催化分子功能组和代谢过程、细胞过程生物学过程中.KEGG功能富集分析结果显示,差异基因主要富集在氨基酸、核糖体和类固醇生物合成,及氮类物质代谢的通路上,富集到与低温胁迫相关通路MAPK signaling pathway-yeast上的基因表达随低温处理时间的增加呈上调趋势.已报道HOG-MAPK通路是MAPK途径研究较为明确、信号传递单一的真菌低温胁迫中重要的通路,本文运用生物信息学软件构建肺形侧耳的HOG-MAPK通路,并利用荧光定量PCR对相关基因表达进行验证,结果显示以低温处理0h为参照,随着低温胁迫时间增加通路上大部分基因的表达量持续上升,且差异显著,与RNA-Seq分析结果一致.本文通过全面分析肺形侧耳低温胁迫时期基因表达情况,为进一步研究肺形侧耳低温胁迫相关重要基因的功能鉴定与信号通路调控机理提供基础.

目的 探讨鼓室内接种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)建立大鼠鼓室硬化模型的可行性.方法 34只SD大鼠被随机分为实验组(n=17)和对照组(n=17),实验组大鼠左耳鼓室内接种MRSA,右耳不予处理,对照组大鼠双耳都不予处理.于造模后第1、2、4、6周观察两组大鼠双耳鼓膜变化,并于造模后第6周取对照组大鼠左耳听泡及实验组大鼠双耳听泡行石蜡切片,HE染色后观察两组大鼠鼓膜及鼓室粘膜的形态学变化.结果 造模后1周,实验组大鼠均存活,无鼓室硬化形成;造模后2周,实验组大鼠因肺部感染死亡1只,余下大鼠中有4只左耳发生鼓室硬化;造模后4周,实验组大鼠因肺部感染死亡2只,因麻醉过量死亡1只,余下大鼠中有10耳发生鼓室硬化,左侧7耳,右侧3耳;造模后6周,实验组大鼠因肺部感染死亡2只,余下大鼠中有12耳发生鼓室硬化(12/22,54.5％),左侧7耳,右侧5耳;粘膜增厚、炎性细胞浸润、纤维组织增生以及间质组织增厚等形态学改变不仅见于实验组接种细菌耳,亦可见于对侧耳.对照组大鼠因麻醉过量死亡2只,余15只存活至6周末,各大鼠双耳均未出现任何异常.结论 大鼠鼓室内接种MRSA是一种新的构建鼓室硬化模型的方法,可成功建立大鼠鼓室硬化模型.

本研究通过杂交构建肺形侧耳同核异质菌株N1M1、N1M2和同质异核菌株N1M1、N2M1,比较菌丝形态与生长速度、营养成分以及常见的细胞核基因与线粒体基因的表达量,分析线粒体基因对肺形侧耳菌丝的影响,探讨线粒体基因与核基因的相互作用.由菌丝生长情况可知N1M1和N1M2菌丝形态相似,生长速度差异不显著,N1M1和N2M1菌丝形态差异大,生长速度差异极显著,在菌丝形态与生长速度上细胞核基因作用大于线粒体基因.进一步检测菌株中的主要营养成分发现必需氨基酸与总水解氨基酸含量差异显著,菌株N1M2蛋白含量显著高于N1M1,N1M1维生素C含量是N1M2的1.67倍,菌株N2M1多糖和蛋白含量显著高于N1M1,铁和维生素C含量显著低于N1M1.所以细胞核基因、线粒体基因都能影响肺形侧耳营养成分含量.检测同核异质菌株N1M1、N1M2的7个细胞核常见基因的表达情况发现,N1M2菌丝中6个细胞核基因的表达量都显著高于N1M1,这表明肺形侧耳线粒体基因的不同会影响核基因的表达;同质异核菌株N1M1、N2M1的14个线粒体普通编码蛋白基因表达差异显著,这说明线粒体基因的表达量会因核基因的不同有所差异.综上,肺形侧耳线粒体基因和细胞核基因能够相互影响,共同作用于生命活动.

患者,女性,48岁,左眼上睑长肿物4个月,双眼睫毛部痒1年,就诊于首都医科大学附属北京同仁医院眼科. 患者自述肿物曾破溃2次,并曾流出血水;2018年9月于外院行上睑结膜肿物活检,组织病理学检查结果 显示为色素性肿物. 既往曾患左肺小细胞肺癌,已痊愈;高血压史,长期服用抗高血压药物维持;否认家族遗传病史. 眼科常规检查:裸眼视力右眼为1. 2,左眼1. 0,眼压右眼为15. 0 mmHg(1 mmHg=0. 133 kPa),左眼为13 mmHg;左眼上睑皮肤肿胀微隆起,睑裂缩小,上睑结膜面可见弥漫棕黑褐色隆起肿物,表面呈结节状生长,肿物大小约为28 mm×10 mm×3 mm,其内可见新生血管长入,病变累及上穹窿部结膜(图1A),肿物质软,固定,下睑结膜鼻侧及颞侧均可见片状棕黑色肿物生长,轻微隆起,鼻侧睑结膜病变约为8 mm × 4 mm×1 mm,颞侧病变约9 mm×3 mm×1 mm(图1B),病变未及双侧耳前及颌下腺. 角膜透明,球结膜轻微充血,未见肿物生长. 住院后完善全身检查:血常规未见明显异常,尿常规细菌556个/μl,提示有尿道感染,颈部超声未见明显异常. 临床诊断:(1)左眼上下睑结膜色素性肿物(色素痣恶变?);(2)尿路感染. 于首诊后1周行左眼上睑结膜大范围肿物切除+自体硬腭移植+眼睑重建术,扩大切除上睑肿物后送组织病理学检查,送检组织大小约28 mm×10 mm×3 mm. 由于下睑结膜病变面积较小,未进行切除. 该患者未发现其他部位有明显的肿瘤,区域未见明显淋巴结转移和远处转移,根据美国2010年美国癌症联合委员( AJCC)和国际抗癌联盟( UICC)制定的第7版肿瘤的TNM分期[1] ,属于T0N0M0. 半年后复诊,左眼上睑未见黑色素瘤复发,下睑肿瘤明显扩大(图2),行下睑结膜大范围肿物切除+自体硬腭移植+眼睑重建术,肿瘤组织病理学检查结果 显示肿瘤组织部分呈巢状分布,细胞增生活跃,异型性明显,肿瘤组织内可见梭形细胞及上皮样细胞(图3). 免疫组织化学染色显示melan-A (+)、S-100 (+)、vimentin (+)、CK (+)、CD99 (-)、desmin(-)、p53(-)、SMA(-)和ki-67index(占30％). 综合以上结果 ,诊断为结膜恶性黑色素瘤.

患者男,44岁,因"颈部肿大伴双侧耳前包块半年"就诊.半年前自觉颈部逐渐肿大伴耳前出现包块,无疼痛、吞咽困难、呼吸困难等不适.既往高血压病史10年,饮酒史20年,100～200 ml/d,无吸烟史,否认糖尿病、病毒性肝炎、特殊药物服用史及类似疾病家族史.体格检查:血压159/85 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),颈前后、颏下、颌下、腮腺区弥漫性对称性肿大,边界不清,质软,无压痛感;全身浅表淋巴结未触及肿大;心、肺、腹未见明显异常.肝功能实验室检查:白蛋白39.9 g/L,球蛋白30.8 g/L,谷草转氨酶89 U/L,谷氨酰转肽酶129 U/L,谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶正常.血常规、甲状腺功能正常.超声检查:甲状腺大小、形态正常,实质回声均匀,未见明显占位(图1A);颈部皮下脂肪组织对称性、弥漫性增厚,未见明显包膜,其内可见线状或网状的纤维间隔,边界不清,向颈后肌间隙广泛浸润(图1B);超声弹性成像提示增厚的脂肪组织质地较软(图1C);颈部大血管未见受压;颈动脉血流流速、阻力均正常(图1D);腹部皮下脂肪组织未见弥漫性增厚.综合患者病史、体格检查、实验室检查及超声检查诊断为马德龙综合征.患者拒绝手术治疗,采取戒酒、保肝等保守治疗.3个月后电话随访脂肪堆积无明显进行性增多,无吞咽困难、呼吸困难等表现,病情尚稳定.

本文以肺形侧耳栽培菌株X57为研究对象,对其低温胁迫时期进行转录组分析,发现差异基因显著地富集到麦角甾醇合成通路.根据麦角甾醇合成通路的相关信息,在肺形侧耳中筛选出该通路的17个基因,并推测了肺形侧耳的麦角甾醇合成通路.利用荧光定量研究了X57栽培袋在低温处理下该通路上各个基因的表达,结果显示随着低温胁迫时间的增加,该通路上大部分基因的表达量持续上升,且差异显著.检测栽培袋中菌丝麦角甾醇含量发现,低温胁迫显著提高麦角甾醇的含量,与RNA-Seq分析结果一致.此外,以无需打冷也能整齐出菇的野生菌株X1为对照,比较X57与X1的麦角甾醇基因对冷胁迫的响应情况,探究麦角甾醇合成通路是否在肺形侧耳低温诱导形成原基时期具有关键性作用.将X57与X1菌株置于PDA平板上培养并进行低温胁迫,利用荧光定量PCR对各个基因表达进行验证,结果显示两个菌株的麦角甾醇合成通路相关基因均对低温胁迫有响应,X57低温胁迫时通路中绝大多数基因的表达量上升,且大部分基因表达量提高2倍以上;X1菌株的通路中的表达量变化较小.由此推测麦角甾醇通路在肺形侧耳变温结实中低温刺激形成原基有一定作用,为深入研究肺形侧耳低温胁迫调控分子机理提供了重要的基础.

肺形侧耳味道鲜美,营养丰富,深受广大消费者喜爱.它属于四极性异宗结合担子菌,但其交配型位点结构仍未被解析.本研究利用二代测序技术对肺形侧耳的基因组进行测序,通过生物信息学方法找到了肺形侧耳野生菌株X1菌株后代单核菌株的交配型位点.结果 显示肺形侧耳的A交配型位点较为特异,2株原生质体单核化菌株(X1-1和X1-15)的A交配型位点结构差异较大,X1-1含一对保守的HD1和HD2基因,而X1-15除了一对HD1和HD2基因外,还含有额外的2个HD2基因和1个HD1基因.肺形侧耳的B交配型位点与其他担子菌的交配型位点相似,含有8个信息素受体基因和1个信息素前体基因.本研究揭示的肺形侧耳特异的交配型位点结构为后期的遗传育种提供了理论依据.