目的:建立念珠菌血症小鼠模型，寻找辅助诊断念珠菌血症的差异多肽峰。方法:SPF级ICR雄性小鼠170只，体质量27~30 g，根据随机数字表法将小鼠完全随机分为白色念珠菌感染组（ n=80）、近平滑念珠菌感染组（ n=80）和对照组（ n=10），通过尾静脉注射的方法建立念珠菌血症小鼠模型。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测模型小鼠血清多肽谱，选择差异较为明显的多肽峰建立诊断模型。 结果:比较白色念珠菌感染组和对照组共得到65个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为1 100.4、1 581.0、3 808.0这3个差异多肽峰建立诊断模型，敏感度为95.24%（40/42），特异度为90.63%（29/32），准确率为93.24%（69/74），ROC曲线下面积为0.972（95 %CI：0.941~1.000）；比较近平滑念珠菌感染组和对照组共得到73个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为1 433.2、1 148.5、4 093.5、4 522.2、8 140.9、8 234.6这6个差异多肽峰建立诊断模型，敏感度为95%（38/40），特异度为81.25%（26/32），准确率为88.89%（64/72），ROC曲线下面积为0.953（95 %CI：0.903~1.000）。比较白色念珠菌感染组和近平滑念珠菌感染组，共得到78个差异多肽峰，组合质荷比（m/z）为2 736.9、8 091.5、8 153.7这3个差异多肽峰建立诊断模型，区分白色念珠菌感染和近平滑念珠菌感染的准确率为98.78%（81/82）。 结论:通过念珠菌血症小鼠模型筛选的差异多肽峰有利于寻找辅助念珠菌血症诊断的血清标志物，为临床早期诊断及合理用药提供了依据。

目的:验证基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术的B组链球菌（Group B streptococcus，GBS）在线血清型预测模型的分型效能，为临床GBS菌血清型快速分型提供参考。 方法:选取2015至2018年全国多中心新生儿侵袭感染分离GBS菌237株，均已经应用血清凝集试验结合PCR法确认血清型和多重PCR法多位点序列分型（MLST），包括Ⅰa型18株、Ⅰb型70株、Ⅲ型140株、Ⅴ型8株、Ⅵ型1株。运用乙醇灭活-甲酸（乙腈）提取法提取蛋白，用微生物质谱仪采集蛋白指纹图谱，将图谱以m/z和峰强度数据格式输入GBSTyper，以传统血清凝集法血清型为金标准，采用召回率、精确率、 F值（精确率和召回率的调和平均值）来评价GBSTyper分型效果。 结果:GBSTyper对120株（50.63%）GBS菌血清型分型正确，各血清型召回率从高到低依次为Ⅲ型（71.43%）、Ⅴ型（37.50%）、Ⅰb型（21.43%）、Ⅰa型（11.11%），Ⅲ型精确率最高（86.96%），血清型分型精确率仅为3.57%~46.88%，Ⅲ型 F值最高（78.43%），Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型等 F值仅为6.52%~29.41%。 结论:GBSTyper血清型快速分型模型对Ⅲ型血清型菌株分型有效性较高，而对Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ型分型有效性很低。该模型能快速识别高危Ⅲ型GBS，对于围产期新生儿GBS感染预防及患儿的临床管理有重要指导意义。

目的:探讨前列腺癌组织蛋白质组学及其差异表达蛋白分析。方法:选取2022年1月至2023年12月郑州大学附属肿瘤医院收治的12例前列腺癌组织和癌旁组织作为研究对象。12个癌旁组织和前列腺癌组织采用组织裂解液提取总蛋白，采用梯度重叠的固定化PH梯度胶对肿瘤样本和正常组织样本进行双向电泳，获得总蛋白质图谱，对两组图谱进行差异分析，选取差异表达的印迹点，切割后进行质谱鉴定和数据库检索，分析差异蛋白的生物学功能。采用蛋白质免疫印迹验证质谱筛选差异表达蛋白水平。计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:采用双向电泳共得到125个差异表达的蛋白质点，串联质谱分析，获得肽段指纹图谱，共获得54个显著表达的的蛋白，其中上调31个，下调23个。其中表达增加排名前5的蛋白分别为L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、内质网蛋白ERp29、转录激活因子6、高迁移率蛋白A2。表达下调排名前5的蛋白分别为蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29、乙醛脱氢酶。上述蛋白主要参与细胞中心碳代谢、蛋白质翻译、基因转录调控、内质网应激反应、细胞外基质重塑等生物过程。癌旁组织中L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、波形蛋白、转录激活因子6和高迁移率蛋白A2蛋白表达水平(0.87±0.09、1.05±0.15、0.75±0.06、0.76±0.09、0.62±0.09)明显低于前列腺癌组织(1.85±0.13、1.71±0.14、1.47±0.12、1.24±0.12、1.40±0.22)，差异有统计学意义( t＝21.530、11.090、18.930、11.450、11.460， P<0.05)。癌旁组织中蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29和乙醛脱氢酶蛋白表达水平(1.43±0.19、1.14±0.14、1.37±0.14、1.03±0.09、0.91±0.06)明显高于前列腺癌组织(0.42±0.12、0.74±0.11、0.79±0.07、0.69±0.07、0.60±0.13)，差异有统计学意义( t＝15.430、7.620、12.750、10.280、7.418， P<0.05)。 结论:前列腺癌组织细胞中心碳代谢、蛋白质翻译和基因转录调控等相关的蛋白表达异常，可能与前列腺癌的形成和进展密切相关。

目的:鉴定天冬总皂苷提取物的主要化学成分,建立其HPLC指纹图谱,对天冬药材进行评价分类.方法:利用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对天冬总皂苷提取物的成分进行鉴定.采用HPLC-ELSD法建立10批广西产地天冬指纹图谱,并进行相似度评价.通过聚类分析对多产地天冬进行差异分析.结果:天冬总皂苷提取物中共鉴定出5个甾体皂苷类成分及3个环肽类成分.指纹图谱标定了 16个共有峰,相似度均在0.900以上,结合质谱数据对其中4个共有峰进行了结构指认.聚类分析可将不同产地天冬药材初步分为2大类.结论:该研究建立的指纹图谱方法稳定、可靠.通过指纹图谱结合质谱分析可对天冬总皂苷提取物进行化学成分鉴定,为天冬综合质量评价提供参考.

目的:研究并建立针对抗淀粉样肽(amyloid-β,Aβ)单克隆抗体的关键质量属性质量控制方法.方法:基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进行肽指纹图谱分析,分子排阻色谱法(SE-HPLC)进行单体聚体纯度分析,采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)进行大小变异体纯度分析,采用阳离子色谱法(CEX-HPLC)进行电荷变异体纯度分析,采用HILIC-UPLC法进行寡糖分析,采用ELISA法测定Aβ抗原相对结合活性.其他各项指标均应符合《中华人民共和国药典》2020年版以及其他相关要求.结果:肽指纹图谱起到良好的鉴别作用;SE-HPLC法中单体相对百分含量为(99.40±0.00)％,聚体的相对百分含量为(0.55±0.00)％;还原CE-SDS法中轻重链之和的相对百分含量为(98.11±0.08)％,非还原CE-SDS法的主峰相对百分含量为(96.57±0.15)％,HHL峰相对百分含量为(1.91±0.10)％;CEX-HPLC法中主成分相对百分含量为(75.08±0.06)％,酸性变异体的相对百分含量为(16.12±0.05)％,碱性变异体的相对百分含量为(8.80±0.05)％;HILIC-UPLC寡糖图谱分析的(G0F+G1F+G2F),Man5,G0 相对百分含量分别为(91.56±0.04)％,(1.21±0.03)％,(2.60±0.01)％;ELISA 法中与 Aβ 抗原的相对结合活性为(101.40±0.53)％.结论:针对抗Aβ单抗的质量属性,研究建立质控方法并进行质量研究,确保产品安全有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据.

目的 建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法.方法 阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region,CDR)特征肽段.建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价.结果 阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证.贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强.选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度.Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008％～1.097％之间,RPA的RSD在1.212％～7.951％之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD 在 0.010％～0.985％之间,RPA 的 RSD 在 2.306％～10.939％之间;酶切比例为 1∶35～1∶45,酶切时间为 3.5～4.5 h 时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求.Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好.不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异.结论 建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考.

目的 测定仲景古方百合地黄汤水煎液成分,并对鲜百合和鲜地黄的水煎液所含成分进行对比,为优化百合地黄汤提取工艺提供初步依据.方法 以液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术为基础,定性分析百合地黄汤水煎液所含化学成分并进行归属及聚类分析,同时对百合水煎液、地黄汁所含化学成分进行比对.结果 百合水煎液、鲜地黄汁中分别检测到35种、36种化学成分;古法煎煮后,在百合地黄汤水煎液中发现69种化学成分,其中有机酸类16种、糖类及苷类共6种、氨基酸及多肽类共8种、生物碱类3种;其中有8种物质为原百合水煎液与地黄汁共有,较两种原煎液新产生36种物质,且抗抑郁有效成分毛蕊花糖苷仅存在于共煎液中.结论 古法百合地黄汤共煎液中抗抑郁有效成分比单煎液丰富,有助于抗抑郁有效成分的提取,LC-MS技术适用于复方提取液的含量测定,通过此研究,构建了基于质谱技术的中药复方化学物质组成表征的指纹图谱.

目的 建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法.方法 根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肱指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量.结果 PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)％、(46.44±0.35)％、(4.28±0.04)％;"重链+轻链"峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)％、(4.11±0.76)％、(0.85±0.20)％,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)％、(2.85±0.08)％、(2.88±0.15)％;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)％、(0.75+0.01)％、(0.96±0.02)％;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)％、(34.69+0.41)％、(9.09±0.14)％、(12.61±0.50)％;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)％;聚山梨酯20含量为(0.012±0.000 3)％.结论 本研究建立了 PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控.

目的:探寻周围神经感觉和运动束损伤后不同时间点的蛋白变化,为周围神经再生研究提供标志蛋白.方法:制备SD大鼠股神经运动束和隐神经(感觉束)在正常状态、Sunderland V损伤8h和8d时间点模型;神经断端远侧5mm样本取材,6种样本共18组;分离、提取、纯化及定量蛋白后,应用差异凝胶电泳技术荧光标记蛋白质,凝胶图像扫描,选择差异表达＞1.5倍的蛋白点定义为高差异表达蛋白;用图像分析软件BVA分析显示9块凝胶平均分离1586个蛋白点,胶上切割、酶切、点靶,质谱仪进行肽质量指纹谱(PMF)分析鉴定,识别各组间的高差异表达蛋白质图谱.应用逆转录PCR(RT-PCR)技术分析验证蛋白质组学研究的结果.结果:共有12个高差异表达蛋白点被确切鉴定:TPM1、Serpina10、NF-L、DRP-2、CaBP1、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、Gng7、HSP70、LDHB、Enolase2、PDIA3.其中,Serpina10、TPM1、NF-L、DRP-2、CaBP1是隐神经正常状态、损伤8h和8d时间点时比较蛋白质组学高差异蛋白;Serpina10、Serpina3n、Peroxiredoxin-2、Gng7、HSP70、LDHB、Enolase2、CaBP1、PDIA3是股神经运动束正常状态、损伤8h和8d时间点时比较蛋白质组学的高差异蛋白.Serpina10 和CaBP1是隐神经和股神经运动束损伤后多时间点比较蛋白质组学均出现的高差异表达的蛋白.蛋白质组学的结果与RT-PCR检测的mRNA转录水平相一致.结论:周围神经感觉束、运动束损伤后不同时间的比较蛋白质组学表达存在明显差异,Serpina10 和CaBP1作为高差异表达蛋白,可能为周围神经再生研究提供新的方法.

该研究开发经典名方瓜蒌薤白半夏汤(Gualou Xiebai Banxia Decoction,GXBD)基准物质最优前处理技术,建立GXBD基准物质全面质量控制方法,为其整体质量评价提供参考.作者制备15批GXBD样品并创新性地采用基峰色谱图模式下的提取离子色谱图建立液相色谱-质谱联用(LC-MS)指纹图谱,鉴别其特征峰,对其进行归属,并对指标性成分进行定量分析.15批GXBD样品的出膏率50.28％～76.20％.在正离子模式下,LC-MS指纹图谱共检测到12个共有特征峰,通过与对照品比对,鉴定了其中5个共有峰的结构,不同批次样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.920～0.984.最后,采用液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(LC-QQQ/MS)以多反应监测(MRM)模式对GXBD中8个指标性成分黑麦草内酯、金圣草黄素、芦丁、葫芦素D、薤白皂苷Ⅰ、25S-知母皂苷B Ⅱ、25R-知母皂苷B Ⅱ和五肽脯氨酸-色氨酸-缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸(proline-trypto-phan-valine-proline-glycine,PWVPG)进行了含量测定.该研究所建立的方法能降低复方中基质干扰,准确性、稳定性良好,具有较大实用价值,有效地反映出GXBD样品的质量属性,可用于GXBD全面整体的质量控制.