目的:探讨肠道微生物来源的石胆酸（LCA）对脓毒症小鼠肝损伤的保护作用。方法:将15只C57BL/6J小鼠分为假手术组（Sham组）、脓毒症组（Sep组）、粪菌移植组（Sep-fmt组），每组各5只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）构建脓毒症小鼠模型，Sham组仅行腹壁开关手术；Sep-fmt组于CLP后第2天给予粪菌液连续灌胃3 d；Sham组和Sep组根据体质量给予等剂量含10%甘油的无菌磷酸盐缓冲液连续灌胃3 d。采用粪便进行16S核糖体RNA（rRNA）测序分析并筛选出胆汁酸代谢差异代谢产物。然后将30只C57BL/6J小鼠分为假手术组（Sham组，6只）、脓毒症组（Sep组，12只）、LCA组（LCA-Sep组，12只），各组分别保证6只大鼠进行后续实验分析。LCA-Sep组在脓毒症造模之前给予100 mg/kg的LCA灌胃，连续5 d；Sham组、Sep组根据体质量给予等剂量溶媒连续灌胃5 d。采用粪便进行16S rRNA测序分析，观察各组小鼠死亡情况并进行临床严重程度评分（CSS）。检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、IL-10水平并评估各组小鼠肝脏组织病理损伤。结果:Sham组、Sep组和Sep-fmt组小鼠各次级胆汁酸比较，差异均有统计学意义（P均< 0.001），且Sep-fmt组中LCA的增幅最大，故后续实验选取LCA对脓毒症小鼠进行灌胃。CLP术后24 h，Sham组小鼠无死亡，Sep组小鼠死亡4只，LCA-Sep组小鼠死亡2只；各组存活小鼠CSS比较，差异具有统计学意义[（1.0 ± 0.0）、（3.5 ± 0.5）、（2.5 ± 0.5）分，F = 47.500，P < 0.001]。α多样性分析显示，3组小鼠肠道菌群丰富度[Chao1指数和基于丰度的覆盖估计值（ACE）指数]和多样性（Shannon指数和Simpson指数）比较，差异均有统计学意义（H = 8.766、8.766、9.704、10.994，P均< 0.05），且LCA-Sep组肠道菌群多样性高于Sep组（P均< 0.05）。β多样性分析显示，3组小鼠的菌群结构存在显著差异（H = 18.322，P = 0.001）。3组小鼠拟杆菌门的平均相对丰度分别为62.17%、11.10%、34.47%，变形菌门的平均相对丰度分别为10.99%、62.81%、40.58%。3组血清TNF-α、IL-6、IL-10及肝脏切片中TUNEL阳性细胞数比较，差异均有统计学意义（H = 14.749、14.363、15.158，F = 131.688，P均< 0.001），且Sep组TNF-α、IL-6水平及肝脏切片中TUNEL阳性细胞数更高，LCA-Sep组IL-10水平更高（P均< 0.05）。免疫荧光结果显示，Sham组M2巨噬细胞数表达较多，Sep组M2巨噬细胞数表达有所减少；给予LCA预处理后，LCA-Sep组小鼠肝组织M2巨噬细胞数表达较Sep组增加。结论:脓毒症可导致小鼠肠道菌群失调、炎症因子升高和肝细胞损伤；肠道菌群代谢产物LCA可以下调脓毒症小鼠肠道菌群中的潜在致病菌丰度，促进M2巨噬细胞的极化，减轻全身炎症水平和肝细胞凋亡。

目的 研究构建合适的动物模型用于胰母细胞瘤(PBL)的化疗药物筛选及新药评估.方法 将手术切除的PBL肿瘤组织碎块移植到免疫缺陷的小鼠皮下组织,待移植瘤生长至1 500 mm3 时进行瘤体传代及保存.使用HE染色、免疫组织化学及PCR法对成功建立的PBL患儿起源的异种移植(PDX)模型进行人源性鉴定.结果 HE染色显示小鼠PDX中的肿瘤组织及细胞和患儿肿瘤细胞形态基本相同,免疫组化结果显示β-连环蛋白(β-Catenin)、细胞角蛋白7(CK7)和细胞角蛋白19(CK19)在PDX模型组织与人属源性肿瘤组织中有相同的免疫学特征.PCR分析显示PDX组织和原发肿瘤组织具有相同的个体来源.结论 所建立胰母细胞瘤来源PDX高度保留了原发胰母细胞瘤的生长模式及蛋白表达特性,为胰母细胞瘤患者的基础研究和临床用药指导提供了重要的实验模型工具,给推动疾病机制探索及制定个性化治疗方案提供了科学依据.

目的 探讨气腹压处理在宫颈癌手术治疗中对人子宫颈癌细胞(human cervical cancer cells,Hela)中Ki-67、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)表达量的影响.方法 通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库验证MMP9、Ki-67在宫颈癌中的表达量;收集2021年1月～2023年12月徐州医科大学附属妇幼保健院宫颈癌患者的组织标本,按手术方式分为开腹手术组10例与微创手术组30例,通过Western blot实验和免疫组化实验,检测MMP9、Ki-67在Hela细胞中的表达情况;构建宫颈癌裸小鼠移植瘤模型,分未经气腹压处理组8只与气腹压处理组8只,通过免疫组化实验比较未经气腹压处理的肿瘤组织与气腹压处理2 h后的肿瘤组织的MMP9、Ki-67的表达量.结果 ①MMP9、Ki-67在宫颈癌中的高表达,是宫颈癌的潜在性指标;②Western blot结果显示,微创手术组宫颈癌组织标本中的MMP9、Ki-67的表达水平较开腹手术组明显增高(P＜0.001),免疫组化结果显示微创手术组宫颈癌组织的MMP9以及Ki-67免疫组化染色的阳性率较开腹手术组明显增高(P＜0.001);③裸小鼠移植瘤模型实验中免疫组化结果显示,给予气腹压的瘤组织较未经气腹压的瘤组织的MMP9、Ki-67的表达量明显增高(P＜0.01;P＜0.001).结论 MMP9和Ki-67在肿瘤生物学行为中发挥协同作用,其表达水平可以作为宫颈癌进展的潜在生物标记,并有助于优化宫颈癌患者的治疗方案.

目的:探讨下调p21蛋白激活激酶1(PAK1)对血小板生成素受体(MPL)密码子515突变(MPLW515L)的MPN细胞(6133/MPL)增殖、分化、凋亡及移植小鼠存活的影响.方法:使用慢病毒介导的shRNA转染技术干扰6133/MPL细胞中PAK1的蛋白表达水平;CCK-8法检测下调PAK1对6133/MPL细胞增殖能力的影响,细胞计数法检测其集落形成能力;流式细胞术检测敲低PAK1对6133/MPL细胞中多倍体DNA形成能力和细胞凋亡的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和细胞凋亡相关蛋白Bax的表达;HE染色法观察移植小鼠脾脏和骨髓的肿瘤细胞浸润情况.结果:下调PAK1能显著抑制6133/MPL细胞的增殖并降低细胞集落形成能力;敲低PAK1后,6133/MPL细胞中多倍体DNA含量从31.8％增加到57.5％和48.0％,凋亡比例约增至10.8％;下调PAK1能够减少6133/MPL移植小鼠脾脏和骨髓肿瘤细胞的浸润,从而延长其生存期.结论:下调PAK1能显著抑制6133/MPL细胞生长,促进多倍体DNA的形成,诱导6133/MPL细胞凋亡,延长6133/MPL移植小鼠的生存时间.

目的 探究脑靶向肽Angiopep2包载si-WDR4对胶质母细胞瘤的影响及其潜在机制.方法 制备Angiopep2/si-RNA,并检测其包封率和摄取率;在体外,分别对U87细胞进行磷酸盐缓冲液(PBS),Angiopep2/si-NC,si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4处理,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测WDR4的mRNA含量,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测WDR4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测U87细胞活力,通过5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测U87细胞的增殖;在体内,通过U87-Luc细胞构建异种原位移植瘤模型,7 d后,分别通过尾静脉注射PBS、Angiopep2/si-NC、si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4.第28天,通过小动物活体成像检测肿瘤双荧光素酶活性,通过苏木精-伊红(HE)染色检测肿瘤大小.计量资料比较采用t检验.结果 Angiopep2对si-WDR4具有良好的结合能力,在N/P比为3∶1时形成完整复合物,并能够促进肿瘤细胞对si-RNA的摄取;在体外,与Angiopep2/si-NC 比较,Angiopep2/si-WDR4 处理能降低 U87 细胞内 WDR4 的 mRNA(0.21±0.14,t=4.13,P＜0.05)和蛋白水平(0.42±0.17,t=3.53,P＜0.05),减少 PI3K(0.34±0.19,t=5.17,P＜0.05)和 Akt(0.24±0.17,4.26,P＜0.05)的表达,降低 U87 细胞活性(52.00±11.33,t=4.59,P＜0.05),减少 EdU 阳性细胞数(23.00±7.28,t=12.12,P＜0.05);在体内,Angiopep2/si-WDR4 处理后裸鼠脑组织双荧光素酶活性降低(10.02±2.06,t=6.14,P＜0.05),肿瘤相对体积减小(0.38±0.17,t=7.42,P＜0.05).结论 Angiopep2/si-WDR4能促进肿瘤细胞对si-WDR4的摄取,抑制胶质母细胞瘤的增殖.

目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响.方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况.通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体外杀伤功能.构建NOD/SCID小鼠异种移植肠癌肿瘤模型,设置空白对照组、NK细胞组和扩增NK细胞组,检测扩增NK细胞体内肿瘤杀伤功能.结果:通过电转法成功构建了膜表达IL-21的K562细胞.与膜表达IL-21的K562细胞共培养17 d后,NK细胞的扩增倍数可达700倍,与对照组相比扩增能力明显增强(P＜0.001).体外肿瘤细胞杀伤实验检测结果显示,NK细胞和扩增后的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用无明显差异,对小鼠体内肿瘤的杀伤效果也无明显差异.结论:膜表达IL-21的K562细胞可显著增强NK细胞的体外扩增能力,但不影响NK细胞的体内外杀伤功能,可用于后续NK细胞的体外规模化扩增.

胰腺癌是一种恶性程度极高,发病隐匿,预后极差的恶性肿瘤,目前以化疗为代表的全身综合治疗仍是改善胰腺癌患者术后预后的主要手段.但胰腺癌耐药机制复杂,可选择的化疗方案较多,患者对每种化疗方案的敏感性不同,疗效也不同,因此需要一种临床前模型检测每种化疗药物的有效性,为患者筛选出最合适的药物.人源性肿瘤异种移植(PDX)通过将患者肿瘤组织植入到免疫缺陷鼠体内从而获得个体化肿瘤模型,指导患者临床用药.本文将在回顾胰腺癌PDX模型建立方法的基础上,对PDX模型在胰腺癌治疗领域的应用进展进行综述,旨在为胰腺癌的个体化治疗提供新的方向.

目的 探讨芍药苷通过靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)对宫颈癌移植瘤小鼠肿瘤组织病理变化的影响.方法 将小鼠随机分为模型组(构建宫颈癌移植瘤小鼠模型)、芍药苷组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷)、Vector组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷+瘤体注射Vector质粒)、VEGF组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷+瘤体注射过表达VEGF质粒),建模成功后每隔7 d测量肿瘤体积,用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),用蛋白质印迹法检测肿瘤组织增殖、凋亡及转移相关蛋白的表达水平,用原位末端转移酶标记法检测肿瘤组织的细胞凋亡率.结果 模型组、芍药苷组、Vector组和VEGF组建模成功后第28天的肿瘤体积分别为(1 025.50±81.38)、(722.89±49.67)、(720.36±64.01)和(946.79±89.77)mm3,CD34-MVD 水平分别为118.92±6.93、71.67±7.45、72.14±5.55和 86.74±8.86,VEGF 蛋白相对表达水平分别为 1.08±0.09、0.56±0.09、0.54±0.06 和 0.88±0.13,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白相对表达水平分别为 0.93±0.14、0.44±0.03、0.46±0.07和0.81±0.09,基质金属蛋白9(MMP-9)蛋白相对表达水平分别为1.17±0.12、0.62±0.07、0.64±0.08 和 0.90±0.07,细胞凋亡率分别为(4.13±0.47)％、(22.16±2.84)％、(21.24±3.42)和(8.60±0.96)％;芍药苷组的上述指标与VEGF组和模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 芍药苷可能通过调节VEGF的表达来抑制血管生成,改变肿瘤组织病理学变化,抑制肿瘤生长,从而缓解小鼠宫颈癌进程.

目的 探讨敲减辅酶Q10B(COQ10B)表达对裸鼠食管鳞状细胞癌(鳞癌)皮下移植瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 利用慢病毒转染技术将COQ10B的干扰慢病毒及其阴性对照转染至食管鳞癌细胞(KYSE150细胞)中,构建敲减COQ10B表达的KYSE150细胞(sh-COQ10B组)和阴性对照KYSE150细胞(sh-NC组).选择雌性BALB/c裸鼠20只,随机分入sh-COQ10B组和sh-NC组各10只,分别于裸鼠右前肩胛处皮下接种转染sh-COQ10B和sh-NC的KYSE150细胞,以此构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察接种后不同时间皮下移植瘤生长情况并测量瘤体的体积和质量.接种第26天实验结束后取瘤体组织,采用HE、免疫组化、TUNEL染色法观察裸鼠皮下移植瘤中细胞增殖和凋亡的情况,以Western blotting法检测移植瘤中EMT相关蛋白(E-cadherin和Vimentin)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达.结果 与sh-NC组比较,sh-COQ10B组中COQ10B蛋白表达量低(P<0.05);皮下移植瘤模型构建成功且裸鼠均无死亡.sh-COQ10B组移植后不同时间瘤体体积和质量均小于sh-NC组(P均<0.05).与sh-NC组比较,sh-COQ10B组肿瘤细胞凋亡率高,瘤体组织内Bcl-2、Vimentin蛋白表达低,Bax、E-cadherin表达高,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 敲减COQ10B表达可抑制裸鼠食管鳞癌皮下移植瘤细胞增殖和EMT的发生,促进肿瘤细胞凋亡.

目的:探讨竹节香附素A(RA)对前列腺癌移植瘤模型小鼠的治疗效果及潜在作用机制.方法:(1)采用Western blot实验检测不同浓度RA(0、0.5、1、2和4 μmol/L)对前列腺癌细胞系PC-3、DU145和RM-1中程序性细胞死亡配体1(PD-L1)蛋白表达的影响.(2)将30只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、低剂量RA组和高剂量RA组,每组10只.低、高剂量RA组小鼠分别腹腔注射2和4 mg/kg RA,连续给药24 d.记录小鼠体重,统计各组小鼠肿瘤体积和瘤重;采用免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中Ki67和PD-L1蛋白表达;通过流式细胞术检测肿瘤组织中CD8+T细胞、CD4+T细胞和调节性T细胞(Treg)比例,以及干扰素γ(IFN-γ)和颗粒酶B(GzmB)水平.结果:(1)RA处理显著降低PC-3、DU145和RM-1细胞中PD-L1表达水平(P<0.05或P<0.01).(2)在体内实验中,RA处理组小鼠的肿瘤体积和重量显著减小,同时肿瘤组织中Ki67和PD-L1的表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01).此外,RA处理显著增加小鼠肿瘤内CD8+T细胞和CD4+T细胞的比例,提高IFN-γ和GzmB水平,同时减少活化的Treg数量(P<0.05或P<0.01).结论:RA对前列腺癌小鼠肿瘤生长具有较好抑制作用,其机制可能与抑制PD-L1表达、增加肿瘤浸润T细胞及抑制Treg有关.