女，16岁，2017年3月诊断急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）；行化疗后（具体方案不详）达到缓解，至2019年12月24日停用6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤，停药时骨髓为缓解状态。2020年3月2日血常规：WBC 3.87×10 9/L，HGB 108 g/L，PLT 69×10 9/L。2020年3月30日入我院，骨髓象：增生活跃，幼稚淋巴细胞占有核细胞1%。免疫分型：①未见恶性幼稚B淋巴细胞。②CD34 +、CD117 +髓系原始细胞占有核细胞0.25%。HLA-DR、CD33表达减低，部分异常表达CD7、CD96。融合基因筛查阴性（常规检测未包括KMT2A::MAML2融合基因）。白血病少见融合基因及融合基因家族成员分析：KMT2A::MAML2融合基因阳性，融合方式1为KMT2A基因的9号外显子与MAML2基因的3号外显子发生融合；融合方式2为KMT2A基因的10号外显子与MAML2基因的3号外显子发生融合。血液系统遗传病相关基因筛查：CFD、MCM4突变基因阳性。骨髓染色体核型：46,XX,del（6）（p23）,add（10）（p13）,inv（11）（q21q23.3）×2[27]，外周血染色体核型正常。骨髓FISH检测KMT2A双色断裂分离探针：KMT2A基因分离信号间期核占85%（单基因分离间期核35个，占7%，双基因同时分离间期核390个，占78%），提示染色体水平inv（11）（q21q23.3）累及KMT2A基因结构异常。初诊时骨髓涂片FISH检测KMT2A双色断裂分离探针：未见KMT2A基因重排。外周血先天骨髓衰竭综合征基因突变分析检查：阴性。骨髓活检：白血病治疗后，骨髓纤维化，幼稚前体细胞比例未见明显升高，巨核细胞增生较活跃伴发育异常。免疫组化：CD20（少量B淋巴细胞+），CD3（少量T淋巴细胞+），CD138（少量浆细胞+），CD117（少量+），CD163（散在+），CD34（个别+），MPO（粒系+），CD61（巨核细胞+），TdT（少量+），CD71（红系+）。患者未应用升白细胞药物等治疗，门诊监测血常规指标逐步恢复。2020年5月19日血常规：WBC 4.25×10 9/L，HGB 115.8 g/L，PLT 404×10 9/L，中性粒细胞2.3×10 9/L。2020年5月25日复查骨髓免疫残留：未见恶性幼稚细胞。白血病融合基因筛查：阴性。染色体核型：46,XX,del（6）（p23）,add（10）（p13）,inv（11）（q21q23.3）×2[2]/46,XX[28]。FISH检测KMT2A双色断裂分离探针：KMT2A双基因分离间期核3个，占0.6%，异常比例较前显著降低。骨髓象：增生活跃，局部增生明显活跃，幼稚淋巴细胞1%。2020年7月19日复查血常规：WBC 3.18×10 9/L，HGB 111 g/L，PLT 75×10 9/L。骨髓象：增生活跃，原始粒细胞21%，诊断AML-M 2。白血病融合基因筛查：KMT2A-PTD阳性。骨髓免疫分型：未见恶性幼稚B淋巴细胞，33.27%恶性幼稚髓细胞。血液肿瘤突变组分析（86种）：CBL A758D突变阳性。2020年7月28日FISH检测KMT2A双色断裂分离探针：KMT2A基因分离信号间期核占80%，单基因分离（1R1G1F）间期核占8%，双基因分离（2R2G）的间期核占72%。染色体核型：46,XX,del（6）（p23）,add（10）（p13）,inv（11）（q21q23.3）×2[8]/46,XX,del（6）（p23）,del（6）（q13q23）,add（10）（p13）,inv（11）（q21q23.3）×2[11]/46,XX[1]。予地西他滨20 mg/m 2（第1～5天）+阿糖胞苷10 mg/m 2每12 h 1次（第3～16天）+阿克拉霉素7 mg/m 2（第4～11天）+重组人G-CSF 200 μg/m 2（第3～16天）+维纳妥拉口服化疗治疗。过程中出现过敏反应暂停化疗，予抗过敏等治疗。病情好转继续化疗。2020年8月5日患者出现发热，考虑感染，予其加左氧氟沙星、头孢曲松、美罗培南抗感染治疗。血培养汇报：生长大肠埃希菌。2020年8月17日骨髓流式细胞术检测：未见恶性幼稚细胞。KMT2A-PTD基因定量阴性。2020年9月5日开始行供者为非血缘的异基因造血干细胞移植治疗，HLA分辨率10/10，血型A供O，预处理方案为Ara-c/Bu/Cy/ATG/Me-CCCNU，应用米芙+他克莫司+甲氨蝶呤预防GVHD。2020年9月17日回输供者外周干细胞，共回输单个核细胞4.72×10 8/kg，CD34 +细胞2.79×10 6/kg。2020年9月18日回输第三方脐带血。+12 d白细胞植活，+9 d血小板植活。移植后定期复查骨髓，均为完全缓解状态。移植后出现急性GVHDⅢ度（肝脏3级，肺部），移植6个月后死亡。

目的:探讨黄芪甲苷对人内皮祖细胞(EPC)分泌外泌体及外泌体中微小RNA-126(miRNA-126)表达的影响。方法:取湖南中医药大学第一附属医院妇产科2019年出生的1名足月健康新生儿脐带血，采用密度梯度离心法分离单个核细胞并培养7 d，其间行形态学观察；取第3代细胞，采用CD31免疫磁珠分选法和双荧光染色法鉴定。将鉴定成功的EPC按照随机数字表法分为黄芪甲苷组和磷酸盐缓冲液(PBS)组。黄芪甲苷组细胞加入终质量浓度100 mg/L的黄芪甲苷培养24 h，PBS组细胞加入等体积的PBS培养24 h。培养结束后收集2组细胞培养上清液中的外泌体，采用蛋白质印迹法检测外泌体特征性标志物CD9、CD63和CD81表达，于透射电子显微镜下观察EPC外泌体(EPC-Exo)形态，采用纳米颗粒跟踪分析技术检测EPC-Exo的粒径，采用二辛丁酸法测定EPC-Exo的浓度(样本数为3)，采用反转录PCR法测定EPC-Exo中与血管新生相关miRNA-126-3p和miRNA-126-5p的表达(样本数为3)。对数据行独立样本 t检验。 结果:(1)培养第4天，细胞开始贴壁生长，圆形、梭形、条形等多形态同时出现；继续培养至第7天时，细胞边缘清晰，呈铺路石样排列，中央细胞呈圆形，周边细胞呈梭形。(2)CD31免疫磁珠分选法显示细胞膜染绿色，细胞核染蓝色；双荧光染色法显示细胞呈橙黄色。经以上鉴定，细胞被证实为EPC。(3)培养24 h，2组EPC-Exo的CD9、CD63和CD81表达均呈阳性，证实本实验已成功提取EPC-Exo。(4)培养24 h，2组EPC-Exo均呈圆形膜囊泡，形态无明显差异。(5)培养24 h，黄芪甲苷组中98.7%的EPC-Exo粒径为84.7～143.1 nm，PBS组中98.0%的EPC-Exo粒径为88.7～123.5 nm。(6)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo的质量浓度为(310±5)μg/mL，明显高于PBS组的(257±5)μg/mL， t＝13.369， P<0.01。(7)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo中miRNA-126-3p( t＝16.062， P<0.01)和miRNA-126-5p( t＝3.252， P<0.05)均明显多于PBS组。 结论:黄芪甲苷可改善人EPC分泌外泌体的功能，且所分泌的外泌体负载miRNA-126。

目的:优化脐带血单个核细胞的分离方法，培养、纯化及鉴定脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)，并观察其生物学特性，探讨单份和混合UCB-MSCs的区别。方法:采用四联袋方法和试管方法分离脐带血单个核细胞，比较两种方法分离后单个核细胞的回收率、细胞数及红细胞混入量。鉴定UCB-MSCs向神经样细胞横向分化的能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析单份组和混合组培养液上清中白细胞介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)含量。符合正态分布并方差齐的，根据数据类型应用参数检验中的单因素方差分析或 t检验，不符合正态分布的应用非参数检验中秩和检验。 结果:试管法和四联袋法分离的单个核细胞回收率分别为(60.23±6.34)%、(71.92±11.30)%( P<0.05)。试管法和四联袋法分离后单个核细胞(MNC)数量分别为(6.12±1.21)×10 7、(9.29±3.11)×10 7个( P<0.05)。混合组的培养液上清中IL-2和IFN-γ含量高于单份组。单份组和混合组的IL-2水平分别为(0.52±0.13)、(1.50±0.23) pg/ml( P<0.05)；单份组和混合组IFN-γ水平分别为(43.16±4.75)、(56.07±6.67) pg/ml( P<0.05)。巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)染色均为阳性表达。 结论:采用四联袋方法分离的单个核细胞回收率和细胞数均高于试管方法，四联袋法分离单个核细胞是一种高效、高质量和安全的分离方法，UCB-MSCs可以向神经样细胞分化，混合组UCB-MSCs增殖活跃，分泌更多IL-2和IFN-γ细胞因子。

目的:基于转录组测序（RNA-Seq）技术探讨猪苓多糖改变人原代巨噬细胞生长形态的可能分子机制。方法:通过提取粗多糖并进行分离和纯化得到猪苓多糖。Ficoll法分离新生儿脐带血来源的外周血单个核细胞（PBMC），并通过CD14磁珠分选及重组人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导人巨噬细胞，连续5 d观察100 ng/ml猪苓多糖对其生长形态的影响。实验组取巨噬细胞使用猪苓多糖干预48 h，对照组不进行处理，对两组细胞进行转录组测序筛选差异基因；将得到的测序结果进行差异基因表达的GO、KEGG功能注释及信号通路显著性富集分析。结果:诱导巨噬细胞具有贴壁生长及伪足分化能力，贴壁后细胞呈梭形和多角形，伪足较细长。100 ng/ml猪苓多糖处理能显著影响巨噬细胞的生长状态，巨噬细胞伪足逐渐消失且细胞变圆，最终分化褪失。比较两组测序结果发现差异表达基因共13 825个，其中上调基因7028个，下调基因6797个。差异基因的GO功能显著性富集分析显示，差异基因主要集中在细胞外基质（ECM）过程。差异基因的信号通路显著性富集分析结果主要集中在ECM合成与细胞黏附通路。结论:通过RNA-Seq技术证实猪苓多糖影响巨噬细胞的生长状态的分子机制依赖于ECM相关基因及黏附蛋白合成相关基因实现，为进一步研究猪苓多糖对巨噬细胞自身生理功能的调节作用提供依据。

目的 观察人脐带血单个核细胞(hUCB-MNC)静脉移植治疗轻中度阿尔茨海默病(AD)患者的临床疗效.方法 选取轻中度AD患者50例,随机分为治疗组和对照组,每组25例.治疗组给予hUCB-MNC静脉输注,对照组给予盐酸多奈哌齐口服,两组疗程均为12周.评价两组治疗前后磁共振质子波谱技术(1H-MRS)中N-乙酰天冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)、胆碱/肌酸(Cho/Cr)、肌醇/肌酸(mI/Cr)、N-乙酰天冬氨酸/肌醇(NAA/mI)比值、尿AD7c-NTP水平、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)得分.结果 治疗组治疗后较治疗前MoCA总分及各认知域评分提高,尤其在记忆力、视空间与执行力、注意力、定向力领域的提高优于对照组(P<0.05).治疗组治疗后较治疗前NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/mI升高,mI/Cr降低(P<0.05),且治疗组NAA/Cr、Cho/Cr、NAA/mI、mI/Cr改善程度优于对照组(P<0.05).治疗组治疗后较治疗前尿AD7c-NTP水平降低,且治疗组尿AD7c-NTP改善程度优于对照组(P<0.05).结论 hUCB-MNC可明显改善轻中度AD患者的记忆力、视空间与执行力等认知域,并且能改善轻中度AD患者的脑代谢水平及减轻神经元损伤程度,1H-MRS结合尿AD7c-NTP的评估模式可为临床治疗AD提供新的思路和方法.

目的 探讨创面局部应用脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)治疗皮肤缺损的效果及相关机制.方法 选取45只C57小鼠建立创面损伤模型后分为3组.实验组:先将0.5 mL的UCB-MNCs(细胞数:1×109mL-1)皮下于8～10 mm均匀注射在每只小鼠伤口周围,再将0.5 mL的UCB-MNCs均匀注射在创面表面,共1次;阳性对照组:创口表面涂抹牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶(商品名:贝复新);空白对照组:不做处理,伤口自然暴露.各组小鼠造模后第0、3、7及14天,采用Elisa技术检测血清内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),HE和MASSON染色观察创面组织病理学情况.结果 所有小鼠均造模成功,与空白对照组和阳性对照组相比,实验组在造模后第3、7、14天血清VEGF、TGF-β和bFGF的表达水平显著升高(P＜0.05).术后第14天HE和MASSON染色结果显示实验组小鼠的创伤已全部愈合,且表皮修复状况良好,可以观察到部分炎症细胞的浸润;阳性对照组的小鼠部分表皮修复状况良好,但仍有一部分创伤没有完全愈合,肉芽组织的生长状况良好;空白对照组未完全愈合的创伤周围瘢痕组织增生明显,且出现明显的炎症细胞浸润以及部分创伤仍未愈合的现象.结论 UCB-MNCs修复小鼠的皮肤损失创伤,是通过促进细胞因子的分泌来促进皮肤缺损创伤的愈合.

随着干细胞治疗炎症性肠病研究的不断深入,其安全性问题日益受到重视.干细胞治疗炎症性肠病的过程,根据预处理方案的强度,可以分为清髓性和非清髓性两种.本文梳理了现有国内外临床研究数据,综述了干细胞治疗炎症性肠病短期及长期研究的安全性.已有文献显示,目前研究均未观察到致瘤性风险,清髓性方案易合并感染,非清髓性方案严重不良反应少见.脐带血单个核细胞免疫原性低,不用HLA配型,解决了清髓性干细胞移植需要长期服用抗排斥药物的问题,在安全性方面优势突出.希望为进一步的前瞻性研究提供参考.

目的:观察乳腺珠蛋白(mammaglobinA,MGBA)负载脐带血来源树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导产生的细胞毒性T细胞(cytotoxicT lymphocyte,CTL)对乳腺癌细胞的体外杀伤效果.方法:采集健康剖宫产女性志愿者的脐带血,分离脐带血单个核细胞并诱导DC生成,用MGBA致敏DC与自体淋巴细胞共培养诱导CTL.采用流式细胞术测定DC的表型(CD83、CD86、HLA-DR)变化,ELISA法测定IL-10、IL-12分泌水平,CCK-8法测定CTL对乳腺癌细胞的杀伤活性.结果:成功培养出形态典型、功能成熟的DC,MGBA负载DC诱导的MGBA特异性CTL对乳腺癌细胞MDA-MB-415产生显著的杀伤效果(P＜0.05);加入HLA-Ⅰ抗体可显著减弱杀伤效果,加入HLA-Ⅱ抗体细胞毒活性无显著变化,加入HLA-Ⅰ抗体或HLA-Ⅱ抗体对正常乳腺细胞的杀伤性均无影响.结论:MGBA能明显加强脐带血DC诱导的CTL对乳腺癌细胞的杀伤活性,该杀伤活性具有MHC限制性.

目的:探讨齐多夫定(AZT)对新生儿、新生鼠造血干/祖细胞活性的影响.方法:取孕期接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART,AZT+ 3TC+ LPV/r)的HIV感染孕产妇新生儿脐带血15份,以及正常新生儿脐带血12份,分离脐血单个核细胞,流式细胞术检测CD34+细胞比例,培养粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E)以及巨核系祖细胞(CFU-Meg),计算克隆形成集落数.取脐血造血干/祖细胞、新生小鼠骨髓单个核细胞,在CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg体系和造血干/祖细胞悬浮培养体系中,进行体外AZT干预,计算成集落数及凋亡率.取Balb/c孕小鼠,进行宫内AZT(5 mg、10 mg)干预,检测新生小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数.结果:HAART暴露的脐血单个核细胞中,CD34+造血干/祖细胞比例、CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg集落数均显著低于正常脐血(P＜0.05).脐血造血干/祖细胞和新生小鼠骨髓细胞在1.0 μmol/L AZT干预下,CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数显著降低(P＜0.05);AZT浓度＞0.5 μmol/L时,脐血造血干/祖细胞和新生小鼠骨髓细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).宫内不同剂量AZT暴露的新生小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg集落数明显低于正常对照组(P＜0.01).结论:妊娠期AZT干预可明显抑制造血干/祖细胞的活性.

目的:评价脐带血来源单个核细胞(umbilical cord blood mononuclear cell,UCMC)诱导分化的免疫细胞对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者免疫功能的影响.方法:选取2012年1月至2015年12月就诊于内蒙古医科大学附属医院的90例SCLC患者,采用分层随机方法分为对照组(45例,EP方案)和研究组(45例,EP方案+UCMC诱导分化的免疫细胞),研究组患者在化疗结束后3～5 d进行一个疗程的UCMC诱导分化的免疫细胞治疗[(1～3)×1010个细胞/疗程],每30 d为一个周期.治疗前及治疗结束后12周,采用流式细胞术检测患者外周血中T细胞亚群的变化及相关因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TGF-β1的变化,评价患者生活质量和不良反应等.结果:研究组获得CR 15例、PR 25例、SD 5例,研究组T细胞亚群含量较对照组有明显增加(P＜0.01)、并且恢复正常范围的时间明显短于对照组(P＜0.05);80.9％的患者炎性细胞因子IFN-γ在血清中升至或高于正常范围,IL-10、TGF-β1较治疗前降低(P＜0.05);患者生活质量较对照组有显著提高.结论:UCMC诱导分化的免疫细胞可以促进SCLC患者化疗后免疫功能的恢复.