目的:探讨电针百会穴和大椎穴对脑瘫大鼠学习记忆能力及miR-126介导的血管内皮生长因子(VEGF)/Notch1通路的影响。方法:选取健康7日龄SD雄性大鼠54只，按照随机数字表法将其分为假手术组、模型组、电针组，每组18只。模型组、电针组采用左颈总动脉(LCCA)结扎结合缺氧的方法制备脑瘫大鼠模型。造模后24 h，电针组大鼠予以百会穴和大椎穴电针干预，共14次，隔日1次，持续至第28天。造模后第29天，采用Morris水迷宫法检测3组大鼠的学习记忆能力。采用免疫组化染色法观察大鼠海马组织VEGF及血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)的表达量。采用Western blot法检测大鼠海马组织Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白水平。采用RT-qPCR法检测大鼠海马组织miR-126的表达水平。结果:与假手术组比较，模型组大鼠的学习记忆能力明显降低( P<0.05)，miR-126的表达水平下调，VEGF、VEGFR-2的表达水平上调，Notch1、Hes1蛋白表达水平上调( P<0.05)；与模型组比较，电针组大鼠的学习记忆能力明显改善( P<0.05)，miR-126的表达水平上调，VEGF、VEGFR-2的表达水平上调，Notch1、Hes1蛋白表达水平上调( P<0.05)。 结论:电针百会穴和大椎穴可以改善脑瘫大鼠的学习记忆能力，其机制可能与miR-126调控VEGF/Notch1通路，进而促进血管新生有关。

目的:探讨先天性胫骨假关节(congenital pseudarthrosis of the tibia，CPT)患儿病变骨膜对大鼠胫骨发育的影响，为CPT动物模型的建立提供理论基础。方法:收集2021年4月至2021年5月在湖南省儿童医院骨科行手术治疗的CPT患儿胫骨病变骨膜和脑瘫患儿胫骨骨膜，分别将CPT患儿胫骨病变骨膜(实验组)与脑瘫患儿胫骨骨膜(对照组)移植包裹至2周龄SD大鼠胫骨周围，记录骨膜移植术后1 d、1周、2周、3周、6周两组SD大鼠胫骨影像学变化情况。获取术后第6周两组SD大鼠胫骨组织标本行Micro-CT扫描，分析骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨皮质骨矿物质密度(Cort.BMD)、骨小梁骨矿物质密度(Trabe.BMD)、骨表面积体积比(BS/BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨孔隙体积(Po.V)、骨孔隙密度(Po.Dn)等参数。结果:实验组术后1周影像表现为移植区骨皮质周围高密度影形成；术后2~3周移植区胫骨纤细、髓腔狭窄，上下端类骨质生成；术后6周胫骨移植区胫骨纤细、髓腔狭窄情况仍存在，而上下端类骨质吸收硬化。实验组Micro-CT扫描表现为水平轴向可见胫骨骨皮质表面凹凸不平，骨髓腔内存在部分高密度影改变；冠状位及矢状位可见胫骨骨皮质密度不均，髓腔稍狭窄，部分骨皮质不连续；3D重建可见胫骨外观不规整，骨表面存在局部凹陷。对照组术后1周影像表现为移植区骨皮质周围高密度影形成；术后2~3周可见胫骨移植区局部骨膜反应，未见髓腔狭窄；术后6周胫骨移植区未见明显异常。对照组Micro-CT扫描水平轴向、冠状位、矢状位及3D重建未见胫骨异常表现。实验组及对照组Tb.Th分别为(0.21±0.03) μm和(0.20±0.03) μm( P＝0.79)；Th.Sp分别为(0.33±0.01) μm和(0.38±0.04) μm( P＝0.24)；Th.N分别为(3.23±0.56) mm －1和(3.99±1.00) mm －1( P＝0.54)；Cort.BMD分别为(9 507.00±73.67) g/cm 3和(9 747.00±130.00) g/cm 3( P＝0.18)；Trabe.BMD分别为(8 357.00±25.66) g/cm 3和(8 905.00±209.40) g/cm 3( P＝0.06)；BS/BV分别为(4.01±0.36) mm －1和(2.98±0.12) mm －1( P＝0.06)，差异无统计学意义。实验组及对照组BV/TV分别为74.35%±0.86%和81.33%±0.82%( P<0.01)；Po.V分别为(7.24±1.90) mm 3和(2.48±0.97) mm 3( P＝0.01)；Po.Dn分别为(5.52±0.24) mm －3和(0.95±0.23) mm －3( P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:CPT患儿胫骨病变骨膜移植包裹2周龄SD大鼠胫骨后胫骨表现与CPT患儿胫骨临床特征相似，为CPT动物模型的创建提供了一定的参考和依据。

目的:观察电针刺激头部运动区对脑瘫大鼠脑损伤及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及电针刺激组，每组10只大鼠。将模型组及电针刺激组大鼠制成脑瘫动物模型，假手术组大鼠术中不结扎左颈总动脉。于造模后24 h及21 d时采用BBB运动功能评分评价各组大鼠运动功能情况，并于造模后21 d时处死各组大鼠并提取脑组织。采用苏木素-伊红染色观察各组大鼠脑皮质病理学改变；采用荧光定量PCR法检测凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平；采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)及氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量；采用Western blot法检测JAK2、STAT3、p-JAK2及p-STAT3表达水平。结果:造模后21 d时模型组大鼠BBB运动功能评分、脑组织中Bcl-2 mRNA表达、SOD、T-AOC含量均显著低于假手术组水平( P<0.05)，Caspase-3 mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MDA含量、p-JAK2和p-STAT3表达水平均明显高于假手术组水平( P<0.05)；电针刺激组大鼠BBB运动功能评分、Bcl-2 mRNA表达、SOD、T-AOC含量均显著高于模型组水平( P<0.05)，Caspase-3 mRNA表达、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MDA含量、p-JAK2及p-STAT3表达均明显低于模型组水平( P<0.05)。 结论:电针刺激头部运动区可缓解脑瘫模型大鼠脑损伤，改善肢体运动功能，其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活，进而减轻细胞凋亡、炎症反应及氧化应激反应有关。

目的 探讨温阳通络针灸法对缺血缺氧脑瘫幼鼠的JAK2、p-JAK2、STAT 3、p-STAT3蛋白的影响,方法选用SD清洁级新生大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型+药物组、模型+针灸组、模型+针灸+药物组,共6组,每组30只;采用2％戊巴比妥钠麻醉,小心剪开颈部皮肤,分离出迷走神经,并且暴露出颈总动脉,选用6-0的丝线双重结扎颈总动脉,并且中间离断颈总动脉,造成永久性失流,接着将含8％氧气的92％氮氧混合气体以1L/min的流速持续通入缺氧箱中,假手术组仅作皮肤切口,不做缺血处理亦不做缺氧处理,于术后第3天开始干预,药物治疗选用神经节苷脂治疗,隔天1次腹腔注射,针灸治疗穴位选取:百合、大椎、至阳,斜刺百会0.5 cm留针25 min,艾灸大椎、至阳25 min,采用Western Blot(WB)方法分析不同分组中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达.结果 与假手术组比较,模型+药物组、模型+针灸组、模型+药物+针灸组的p-JAK2、p-STAT3的表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05),与模型组比较,模型+药物组、模型+针灸组、模型+药物+针灸组的p-JAK2、p-STAT3表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 温阳通络针灸可明显下调缺血缺氧脑瘫幼鼠p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达,减少缺血缺氧对脑组织造成的损伤,促进神经功能恢复.

目的:基于缺血缺氧脑瘫大鼠神经功能评分(Zea-Longa评分)、脑组织肉眼观和大脑海马区胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平变化,探讨缺血缺氧模型脑瘫大鼠的有效时长.方法:选取3周龄斯泼累格·多雷(SD)健康大鼠,随机分为正常组和模型组,采用改良的Rice-Vannucci方法建立脑瘫模型,造模后第1、7、14、21天,观察各组大鼠的一般情况并进行神经功能评分,在第7、14、21天分批处死大鼠并取脑组织,观察各组大鼠左侧脑组织,检测海马区Caspase-9、Caspase-3的表达水平.结果:一般情况:造模后第1天,与正常组比较,模型组大鼠左侧瞳孔缩小、姿势异常、自发或夹尾左旋、自主活动减少、兴奋性降低、肌肉颤动、头颤,抽搐,抓取时抵抗反应明显,随着时间延长,以上异常行为逐渐消失,造模后21 d基本消失不见,但左侧瞳孔一直小于对侧;Zea-Longa评分:与正常组比较,模型组造模后7、14 d Zea-Longa评分较高,差异有统计学意义(P＜0.05);脑组织肉眼观:与正常组比较,模型组造模后7、14及21 d大鼠左侧脑组织有不同程度的萎缩和坏死;免疫组化结果:与正常组比较,模型组造模后7 d、14 d Caspase-9、Caspase-3的表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:3周龄缺血缺氧脑瘫模型大鼠的有效时长为14～21 d,可干预14 d.

目的 探讨神经节苷脂(GM1)联合神经生长因子(NGF)对脑瘫幼鼠神经行为学的影响.方法 制备缺血缺氧性脑瘫幼鼠模型,随机分为模型对照组、GM1组、NGF组和联合组,每组10只;另取10只作为假手术组.联合组腹腔注射GM1 10 ml/kg和NGF 10 ml/kg,GM1组腹腔注射GM1 10 ml/kg和生理盐水10 ml/kg,NGF组腹腔注射NGF 10 ml/kg和生理盐水10 ml/kg,模型对照组腹腔注射生理盐水20ml/kg;每天1次,共14d.给药完成后对每组进行神经行为学评价,并检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量以及缺血侧海马区细胞凋亡情况和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平.结果 联合组、GM1组和NGF组神经行为学实验评分均高于模型对照组(P＜0.05),且联合组高于GM1组和NGF组(P＜0.05).联合组、GM1组和NGF组凋亡细胞数目、MDA和NO水平低于模型对照组(P＜0.05),NSE和SOD水平高于模型对照组(P＜0.05),且联合组较GM1组和NGF组更明显(P＜0.05).结论 GM1联合NGF可有效减少脑损伤造成的神经细胞凋亡,改善脑瘫幼鼠的神经行为学能力和记忆力,效果优于单一药物.

目的 探讨脑瘫鼠模型采用侧脑室内神经干细胞(NSCs)移植治疗的效果.方法 准备60只7日龄健康、SPF级Wistar大鼠,随机选取12只作为正常组(等量生理盐水处理),其余48只建立脑瘫鼠模型,选取24只建模成功脑瘫鼠随机分为模型组(等量生理盐水处理)和NSCs组(侧脑室内NSCs移植治疗),对比42日龄后各组大鼠的神经行为学检测结果、脑室旁白质中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量差异.结果 42日龄时,模型组大鼠的Morris水迷宫逃避潜伏时间、脑室旁白质中GFAP阳性细胞数显著高于NSCs组和正常组大鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05);NSCs组大鼠的Morris水迷宫逃避潜伏时间、脑室旁白质中GFAP阳性细胞数显著的高于正常组大鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05);42日龄时,模型组大鼠的斜坡实验时间显著长于NSCs组和正常组大鼠,悬吊试验和旷场试验评分显著低于NSCs组和正常组大鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05);NSCs组大鼠斜坡实验时间显著长于正常组大鼠,悬吊试验和旷场试验评分显著低于正常组大鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 脑瘫鼠模型采用侧脑室内NSCs移植治疗能够显著改善神经行为及学习能力.

目的:观察脊柱推拿对脑性瘫痪模型幼鼠学习记忆的影响, 并探索其机制.方法:将40只雄性幼鼠随机分为空白对照组、正常推拿组、模型对照组、模型推拿组, 每组10只.模型对照组、模型推拿组在出生后第3天制备脑瘫模型, 并于出生后第5天开始进行脊柱推拿, 持续28 d.采用Morris水迷宫实验和跳台实验观察幼鼠学习记忆能力, 采用高效液相色谱法检测大鼠海马组织内5-羟色胺、多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素含量.结果:模型对照组和模型推拿组在Morris水迷宫实验中找到平台的潜伏期高于空白对照组;正常推拿组穿越平台的次数多于空白对照组 (P<0.05);跳台实验中, 模型对照组跳下平台的潜伏期明显低于空白对照组, 跳下平台的次数明显多于空白对照组 (P<0.05) .模型对照组海马组织内去甲肾上腺素和5-羟色胺含量明显低于空白对照组 (P<0.05);正常推拿组、模型推拿组海马组织内肾上腺素均明显高于空白对照组 (P<0.05);正常推拿组和模型推拿组肾上腺素明显高于模型对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) .模型对照组海马组织内多巴胺明显高于空白对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) .结论:脊柱推拿可改善脑瘫模型幼鼠学习记忆能力, 可能与调节海马内5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺等单胺类神经递质有关.

目的 观察慢病毒介导EPhrinB2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑瘫大鼠脑损伤的保护作用及相关机制.方法 从大鼠中分离、培养BMSCs,以慢病毒为载体介导EPhrinB2转染BMSCs.采用随机数字表法将96只大鼠分为假手术组、溶剂对照组(简称PBS组)、空载慢病毒组(简称EGFP/BMSCs组)及EPhrinB2重组慢病毒组(简称EPhrinB2/BMSCs组).选用改良缺氧缺血脑病(HIE)造模方法将PBS组、EGFP/BMSCs组及EPhrinB2/BMSCs组大鼠制成脑瘫模型,于术后7 d时分别将PBS溶液、BMSCs或慢病毒介导EPhrinB2基因转染BMSCs注射到PBS组、EGFP/BMSCs组、EPhrinB2/BMSCs组大鼠侧脑室内.于脑损伤28 d后采用免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织EPhrinB2蛋白表达;采用HE染色方法观察细胞移植后大鼠海马CA1区神经元密度;采用TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡情况;采用免疫荧光法检测大鼠海马区Nestin及CD31表达水平.于脑损伤28 d后采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习、记忆能力变化.结果 脑损伤28 d后,发现EPhrinB2/BMSCs组海马组织EPhrinB2蛋白表达均显著高于假手术组、PBS组及EGFP/BMSCs组,组间差异均具有统计学意义(P<0.05);另外EPhrinB2/BMSCs组海马CAl区病理改变明显轻于PBS组及EGFP/BMSCs组;EPhrinB2/BMSCs组海马区神经元凋亡率明显低于其它各组(P<0.05).另外免疫荧光检查显示EPhrinB2/BMSCs组海马Nestin及CD31阳性率均显著高于其它各组.远期行为学测试结果显示EPhrinB2/BMSCs组Morris水迷宫实验平均潜伏期明显优于PBS组及EGFP/BMSCs组(P<0.05).结论慢病毒介导EPhrinB2转染BMSCs移植到脑瘫大鼠侧脑室海马区能高效表达EPhrinB2基因,有助于神经元细胞分化及血管新生,抑制细胞凋亡,加速受损神经功能恢复.

脑性瘫痪的发病原因与机制复杂、多样,建立稳定的动物模型是后续研究的基础.目前脑瘫模型制备方法主要有缺血缺氧型、感染型、神经毒素型、脑外伤型、多法联合型5种.在诸多的脑瘫模型中,大鼠单侧颈总动脉结扎合并缺氧环境动物模型被认为最为成熟,成功率高,易于操作,重复性好,实验结果稳定可靠,运用较为广泛.感染模型中,应用孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)致宫内感染合并缺氧的方法更为成熟,具有创伤小,简单易行,能够逼真模拟人类在怀孕晚期宫内感染缺氧致胎儿脑部损伤等优点.