目的:探讨LINC00958/血管内皮生长因子C(VEGF-C)信号通路在宫颈癌的淋巴管生成和淋巴转移中的作用.方法:从2020年9月至2022年9月期间在河南省人民医院接受手术的患者中收集了42例宫颈癌组织标本,通过qPCR检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞(Hela、C33A、SiHa、Caski)中LINC00958的表达情况.将LINC00958过表达载体(LINC00958组)或对照载体(CMV组)转染Caski细胞,敲减LINC00958(shLINC00958组)、VEGF-C(shVEGF-C组)的shRNA序列或阴性对照shRNA(shNC组)转染SiHa细胞.分别通过CCK-8法、Transwell实验检测过表达或敲减LINC00958对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.观察转染后细胞的培养上清液对人淋巴管内皮细胞(HLEC)淋巴管形成能力的影响.建立小鼠腘淋巴结转移模型,观察过表达LINC00958或同时敲减VEGF-C对宫颈癌淋巴结转移的影响.结果:LINC00958在宫颈癌组织中呈高表达(P<0.001),高水平的LINC00958与大肿瘤、晚期肿瘤分级、浸润深度和淋巴转移有关联(P<0.05或P<0.01).与正常人宫颈上皮细胞ende1617相比,宫颈癌细胞中LINC00958水平均显著升高(P<0.01或P<0.001).shLINC00958组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力均显著低于shNC组(P<0.05、P<0.01或P<0.001),LINC00958组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力显著高于CMV组(P<0.05、P<0.01或P<0.001).通过RNA下拉、RNA免疫沉淀实验发现宫颈癌细胞中LINC00958能够特异性结合VEGF-C.LINC00958+shVEGF-C组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促淋巴管形成能力显著低于LINC00958组(P<0.01或P<0.001);在小鼠腘淋巴结转移模型中,LINC00958+ shVEGF-C组中小鼠腘窝淋巴结的体积和VEGF-C蛋白、N-cadherin蛋白以及LYVE-1的阳性细胞比例均显著低于LINC00958组(均P<0.001).结论:LINC00958通过直接与VEGF-C蛋白相互作用增强宫颈癌细胞的增殖、侵袭、淋巴管生成能力,促进小鼠腘淋巴结转移模型的淋巴结转移.

肿瘤引流淋巴结(TDLN)是肿瘤抗原首先进入的二级淋巴器官,是决定机体免疫激活抑或免疫耐受的关键初始部位.本研究旨在探讨建立小鼠TDLN的可行性.一、材料与方法将悬浮于20μl磷酸盐缓冲液(PBS)的体外培养Hepa1-6细胞(6×105个)应用1 ml注射器(注射胰岛素用)注射于6～8周龄C57BL/6J小鼠右后肢足掌皮下,每隔3d测量肿瘤长径.第12天处死小鼠,自足踝向上剪开皮肤后予剥脱后肢皮肤,髌骨后方可见局部有脂肪堆积的腘窝,用小弯眼科镊纵向钝性分离,辨别[1],再轻柔取出足掌肿瘤侧腘淋巴结(TDLN)(勿夹挤淋巴结,以免破碎).自踝关节剪断双足并称重,每只小鼠肿瘤足重量减去对侧正常足重量测得肿瘤重量.剖检观察肺、肝及腹腔有无转移.统计分析采用t检验.

目的:探讨迷迭香酸钠对H22肝癌细胞小鼠移植瘤淋巴结转移的药理作用及相关机制.方法:小鼠爪垫皮下接种H22细胞, 建立小鼠肿瘤淋巴结转移模型.荷瘤小鼠随机分为:正常对照组、模型组、阿霉素组 (5mg/kg) 、白藜芦醇组 (40mg/kg) 、迷迭香酸钠高 (200mg/kg) 、中 (100mg/kg) 、低 (50mg/kg) 剂量组.造模第5天开始, 各组小鼠每天腹腔注射相应剂量药物, 连续给药21天, 建模第30天后处死小鼠;观测小鼠移植瘤、淋巴结、免疫器官的变化;通过HE染色和Realtime-PCR等技术检测肿瘤淋巴结转移情况以及转移相关因子MMP-9、VEGF-C的表达, 探索迷迭香酸钠对肿瘤淋巴结转移影响.结果:迷迭香酸钠50mg/kg以上剂量能明显抑制肿瘤增殖, 减少其向腘窝、腹股沟淋巴结转移;对小鼠的免疫器官无明显的刺激作用;迷迭香酸钠还可降低肿瘤组织中淋巴管生成因子MMP-9、VEGF-C表达.结论:迷迭香酸钠能通过下调MMP-9、VEGF-C表达而在H22荷瘤小鼠体内发挥显著的抗肝癌淋巴结转移作用, 其展现出低毒优点, 具有良好抗肝癌转移活性.

目的:利用小鼠直接胭窝淋巴结(D-PLNA)和报告抗原胭窝淋巴结(RA-PLNA)对脉络宁、生脉、丹香冠心3种中药注射液的免疫毒性进行评价.方法:D-PLNA模型中设脉络宁、生脉、丹香冠心3种中药注射液,生理盐水对照组和阳性药物苯妥英钠对照组;RA-PLNA模型中上述各组分别加入报告抗原三硝基苯基聚蔗糖(TNP-Ficoll)和三硝基苯基卵蛋白(TNP-OVA),每组8只BALB/c小鼠,于左足趾部给药50μL.第7天处死小鼠分离腘窝淋巴结,研磨制备淋巴单细胞悬液并进行细胞计数,计算细胞指数;将细胞悬液培养于96孑L板中,加入刺激剂共孵育后,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中免疫球蛋白IgE和单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)的含量.结果:与生理盐水对照组比较,小鼠D-PLNA模型中,仅丹香冠心注射液组胭窝淋巴结细胞数显著增加(P＜0.05);小鼠RA-PLNA模型中,各给药组与TNP-Ficoll作用时,细胞数目和MCP-1浓度均显著升高(P＜0.05),各给药组与TNP-OVA作用时,脉络宁注射液能显著刺激IgE分泌,同时丹香冠心注射液IgE和MCP-1含量均显著升高(P均＜0.05).结论:脉络宁和生脉注射液仅在加入报告抗原后引起小鼠淋巴结阳性反应,说明两者中可能存在作为半抗原的小分子物质诱发Ⅰ型超敏反应,而丹香冠心注射液成分复杂,可能直接诱导Ⅰ型超敏反应,也可能存在新的抗原或表位诱发免疫反应.

目的 探讨磁共振(MR)血氧水平依赖(BOLD)成像评估兔VX2瘤转移性淋巴结放疗后反应的可行性.方法 28只健康新西兰大白兔,苏州大学实验动物中心提供[(2018)科第020号],雌雄不限,2～3个月龄,体质量2 ～3 kg,建立VX2瘤胴窝转移性淋巴结模型,分为放疗组(n=16)和对照组(n=12).放疗组接受20 Gy放疗,对照组接受假放疗.所有实验兔于放疗前(0 d)及放疗后3、7、14d(4个时间点)行MRI扫描,测量参数:淋巴结的大小和R2*值(s-1).在各时间点,每组随机处死两只实验兔,取腘窝淋巴结行病理学检查,分析参数:微血管密度(MVD)和凋亡指数(AI).比较两组间,以及组内各时间点间参数的差异,分析淋巴结大小和R2*值分别与MVD及AI的相关性.结果 淋巴结的大小在两组间、组内4个时间点间差异均无统计学意义(均P＞0.05).放疗组淋巴结在0、3、7和14d的R2*值分别为(29.6±1.7)、(36.8±2.6)、(44.8±5.8)和(57.7±6.2)s-1,呈逐渐升高趋势;MVD分别为(52.3±2.5)、(41.0±3.6)、(34.0±3.6)和(22.7±2.5)条/高倍视野,呈逐渐减少趋势;AI分别为12.8％±0.5％、14.9％土0.6％、20.6％±0.5％和27.5％±0.7％,呈逐渐增加趋势(均P＜0.05).对照组淋巴结R2*值和AI在4个时间点间均无明显变化(均P＞0.05),但MVD呈逐渐增加趋势,分别为(50.0±3.0)、(53.0±1.7)、(60.3±2.5)和(70.0±2.0)条/高倍视野,P＜0.05.两组间淋巴结的R2*值和MVD在3、7、14d差异有统计学意义,而AI在7、14d差异均有统计学意义(均P＜0.05).淋巴结R2*值,而不是淋巴结的大小,分别与MVD及AI有显著相关性(r分别为-0.87和0.94).结论 MR血氧水平依赖成像间接反映放射性治疗后转移性淋巴结内部乏氧状态,具有潜在的评价放射性治疗反应的价值.

目的:评价基于增感屏的辐射光成像技术的基本性能.方法:在体外和体内2种方式上将增感屏辐射光成像与切伦科夫光成像进行对比研究.体外研究中,采用Eppendorf管进行光谱特性、与核素成像的定量相关性、空间分辨力、灵敏度以及组织穿透性方面的对比.体内研究中,在小鼠模型上与切伦科夫光成像进行成像性能的对比,并进行兔子腘窝淋巴结增感屏辐射光成像.结果:增感屏辐射光成像的光信号可以被临床常用放射性核素激发,例如18-氟(18F)、32-磷(32P)和99m-锝(99mTc),其光信号强度与核素成像定量结果呈线性相关,可以获得比切伦科夫光成像高2个数量级的灵敏度以及更低的能量损失.在移植瘤小鼠与兔子腘窝淋巴结的显像中,组织靶器官都观察到了光信号.结论:增感屏辐射光成像在信号强度、灵敏度以及穿透性方面均优于切伦科夫光成像,展示出非常强的潜在临床应用价值.

目的 建立小鼠局部淋巴结实验模型检测红花注射液的致敏性,探讨其用于评价中药注射剂致敏的可行性.方法 BALB/c小鼠90只,随机分为9组,即3个阳性对照组(分别给予2,4,6-三硝基苯磺酸、链脲佐菌素、D-青霉胺),1个阴性对照组(给予磷酸盐缓冲液)和5个供试品组(分别给予5批红花注射液),每组10只,在小鼠左后肢足趾部注射相应试药1次,每只50μL,第7天处死动物,采用小鼠局部淋巴结实验方法(LLNA)测定腘窝淋巴结质量指数(WI)及细胞指数(CI),采用流式细胞术法测定淋巴细胞亚群,观察各供试品组与对照组的差别.采用豚鼠全身主动过敏实验(ASA)对5批供试品进行同步检测,并与小鼠局部淋巴结实验进行比较.结果 小鼠局部淋巴结实验结果显示5批红花注射剂中,仅1批WI有增加的趋势,且T淋巴细胞比例升高,提示这批供试品可能引起淋巴结的增大和T淋巴细胞的增殖,具有一定的致敏潜在风险,而其他批次供试品指标的变化均差异无统计学意义;ASA结果显示5批红花注射剂均未见变态反应.两种方法的结果基本一致.结论 在该实验条件下,初步判定小鼠局部淋巴结分析实验可以作为ASA的一种替代方法评价红花注射液致敏的潜能.

目的 探讨EB病毒(EBV)阳性鼻咽癌细胞外泌体对淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移的影响.方法 利用超速离心获得细胞外泌体,对外泌体进行Western blot与纳米颗粒追踪分析(NTA)鉴定.利用Dio染料吞噬实验,验证外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取.离体条件下,分别利用等体积培养基以及20μg/mL鼻咽上皮细胞(NP69)、HK1-EBV、C666-1细胞外泌体和除去外泌体的HK1-EBV与C666-1上清蛋白预处理淋巴管内皮细胞,检测淋巴管内皮细胞成管与迁移情况;在体实验,首先建立裸鼠腘窝淋巴结转移模型,负瘤裸鼠被随机分成4组,3只/组.对照组:腘窝处注射生理盐水(30μL);NP69外泌体组:10μg/30μL NP69外泌体;HK1-EBV除去外泌体上清组:10μg/30μL HK1-EBV除去外泌体上清蛋白;HK1-EBV外泌体组:10μg/30μL HK1-EBV外泌体.每2 d注射1次,共4次.结果 超速离心获得外泌体富含外泌体特异性蛋白,同时NTA鉴定表明其粒径范围正常;鼻咽癌细胞与NP69外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取;HK1-EBV与C666-1外泌体较空白对照组与NP69外泌体可显著促进淋巴管内皮细胞成管与迁移(P<0.05),HK1-EBV与C666-1外泌体组与对应除去外泌体上清蛋白组间无显著性差异(P>0.05);腘窝淋巴结转移实验发现:HK1-EBV外泌体较空白对照组、NP69外泌体以及除去外泌体的HK1-EBV上清蛋白可显著促进鼻咽癌细胞淋巴结转移以及局部淋巴管新生(P<0.05).结论 EBV阳性鼻咽癌细胞外泌体能促进鼻咽癌淋巴管新生与淋巴结转移.

背景与目的:前哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy,SLNB)是临床淋巴结(lymph nodes,LN)阴性早期乳腺癌患者的标准分期技术,蓝染法联合核素法作为SLNB的标准方法仍有一定的局限性.应用新型荧光靶向示踪剂吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)与利妥昔单抗(rituximab,RIT)偶联物(indocyanine green-rituximab,ICG-RIT),搭建手持式光声信号传感系统(photoacoustic signal sensing system,PASS)及手持式光声成像(photoacoustic imaging,PAI)系统,探索其探测富集ICG-RIT的淋巴组织穿透深度,研究其定位前哨淋巴结的可行性.方法:为探索PASS及PAI的组织穿透能力及定位能力,通过仿体实验将鸡胸组织覆盖于ICG-RIT染色的明胶仿体上模拟体内LN,通过PASS探测不同深度下ICG-RIT仿体的光声信号强度;同时设计人体组织试验—术前于患乳外上象限注射ICG-RIT,取荧光显像的LN于腋窝脂肪下,对比PASS、PAI及超声成像深度区别.通过SD大鼠后肢淋巴引流模型探索该技术作为SLNB的可行性,在SD大鼠后肢足垫皮下注射ICG-RIT,比较SD大鼠腘LN及髂LN的PASS及PAI定位区别.结果:仿体实验结果显示,PASS探测鸡胸组织下ICG-RIT仿体呈现特征性单峰信号,且信号强度与组织深度成反比,最大探测深度平均达52.42 mm.人体组织试验结果显示,PASS探测腋窝脂肪下ICG-RIT染色LN最大探测深度达32.72 mm,对比鸡胸组织下6.25％浓度ICG-RIT染色仿体最大探测深度达39.72 mm;PAI探测腋窝脂肪下ICG-RIT染色LN深度达25 mm.SD大鼠模型结果显示,ICG-RIT停留于SD大鼠腘LN,在PASS中光声信号呈现特征性单峰曲线,PAI呈现特征性"热点"图,而髂LN未见明显光声信号,对比亚甲蓝则同时染色腘LN及髂LN.结论:利用ICG-RIT的光声效应及靶向LN特性,通过手持式PASS及手持式PAI能准确定位SLN,同时有良好的组织穿透深度,具备良好的应用前景,但仍需进一步临床试验数据证实.

目的 探讨经静脉超声造影(contrast-enhanced ultrasound,CEUS)对诊断小鼠乳腺癌淋巴结转移模型的应用价值.方法 采用小鼠4T1乳腺癌细胞足垫种植成瘤的方法构建50只Balb/c小鼠腘窝淋巴结肿瘤转移模型,接种肿瘤细胞悬液后2～6周,每周随机抽取10只小鼠进行常规超声及CEUS检查,然后立即处死小鼠并解剖肿大腘窝淋巴结进行病理诊断,分析不同时间点淋巴结声像图表现及转移发生率.结果 超声共检出50枚小鼠肿大腘窝淋巴结,其中经病理诊断为转移性淋巴结共32枚(32/50),反应性增生淋巴结18枚(18/50).在CEUS上转移性淋巴结多表现为向心性的整体不均匀增强,反应性增生淋巴结多表现为离心性的整体均匀增强.常规超声在淋巴结良恶性鉴别中准确度为56.0％,灵敏度为56.3％,特异度为55.6％,联合经静脉CEUS在淋巴结良恶性鉴别中准确度为76.0％,灵敏度为75.0％,特异度为77.8％,联合CEUS的诊断准确度要高于单独常规超声(P<0.05),而灵敏度与特异度差异无统计学意义(P均>0.05).结论 经静脉CEUS对小鼠乳腺癌淋巴结转移模型的诊断有一定的应用价值.