目的:研究艳山姜挥发油(essential oils from Fructus Alpiniae zerumbet,EOF AZ)对Nw-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐(Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,L-NAME)诱导高血压大鼠心脏损伤的保护作用.方法:L-NAME溶液口服灌胃4周建立高血压大鼠模型,模型成功的大鼠分别给予EOFAZ和卡托普利治疗4周.每周采用无创血压测量系统监测大鼠动脉血压;小动物B超成像系统检测大鼠心脏功能;HE染色观察大鼠心脏组织病理变化;比色法检测大鼠心脏中MDA、SOD、NO水平;免疫组化法检测大鼠心脏中eNOS、iNOS表达;Western blot法检测大鼠心脏中炎症相关蛋白TNF-α、IL-1β,氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、Prdx-1,心脏肥厚相关蛋白ANP、BNP,以及eNOS、iNOS蛋白表达.结果:EOFAZ显著降低高血压大鼠血压,改善大鼠心脏结构异常和功能障碍,降低MDA和NO水平,增加SOD活性,下调ANP、BNP、TNF-α、IL-1β、iNOS表达,以及上调Nrf2、HO-1、Prdx-1、eNOS表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:EOFAZ对L-NAME诱导的高血压大鼠心脏损伤具有明显保护作用,其作用与抑制炎症、改善氧化应激、提高NO生物利用度有关.

目的 探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对糖尿病诱导视网膜Muller细胞功能障碍的保护作用及机制.方法 视网膜Muller细胞使用不同剂量的EOFAZ进行预处理1 h后,采用高糖(30 mmol·L-1)孵育 48 h,Western blot 法检测细胞中自噬信号 Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62 蛋白的表达水平;qRT-PCR分析细胞中P62mRNA、Beclinl mRNA的转录水平,免疫荧光实验分析LC3 Ⅱ/Ⅰ、P62的表达.并进一步使用钙离子螯合剂BAPTA-AM及CaMK Ⅱ特异性抑制剂KN93孵育细胞,检测自噬信号LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、P62蛋白表达水平.使用自噬抑制剂氯喹(CQ)孵育细胞,检测细胞中CaMKⅡ及自噬信号LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达.结果 与高糖组相比,EOFAZ可明显上调Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62的表达水平;使用BAPTA-AM及KN93孵育细胞与EOFAZ的作用类似.同时观察到EOFAZ与BAPTA-AM或KN93联合应用后,与EOFAZ单独作用的结果无明显差异.当EOFAZ与CQ共同孵育细胞后,EOFAZ对自噬相关蛋白下调的改善作用可被抑制,对CaMKⅡ的磷酸化水平无明显影响.结论 EOFAZ对高糖诱导的视网膜Muller细胞自噬障碍具有明显的改善作用,其作用可能是通过抑制CaMKⅡ信号发挥的.

目的:研究温州产艳山姜根茎、花、叶等部位挥发油的化学成分.方法:水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用气相色谱-质谱联周(GC-MS)进行分离分析,通过HP MSD化学工作站检索Nist 5.0标准质谱图库,并结合有关文献人工图谱解析并鉴定各化学成分,按峰面积归一化法求出挥发油中化学成分的百分含量.结果:分别从艳山姜根茎、花、叶挥发油中分离出了47、43、48个化合物,分别鉴定了其中的46、41、48个化合物.结论:温州产艳山姜根茎、花、叶等部位挥发油含有丰富的药用活性成分,不同部位的化学成分存在一定程度的差异,但主要成分基本相同.

目的:研究艳山姜挥发油(essential oil of Alpinia zerumber fructus,EOAZF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)炎性损伤的保护作用.方法:体外传代培养HAECs,先用不同剂量EOAZF(0.05,0.1 mg·L-1)和阿司匹林(0.5 mmol·L-1)预处理1h,另设空白组,再与LPS(5 mg·L-1)共同作用12 h.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;苏木素-伊红染色进行细胞形态学观察;细胞划痕修复实验分析HAECs划痕修复能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),核转录因子-κB抑制蛋白激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,IKK),磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,p-IKK)蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中TLR4和VCAM-1 mRNA的表达;免疫荧光法观察NF-κB p65的核转位情况.结果:与空白组比较,LPS能诱导HAECs形态学损伤,降低细胞存活率及划痕修复能力,同时上调VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达.免疫荧光实验结果分析表明LPS能够诱导NF-κB p65的核转位.与模型组比较,EOAZF预处理后,能够改善LPS诱导的HAECs形态学损伤,提高细胞存活率及划痕修复能力,抑制VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达及NF-κBp65的核转位.结论:EOAZF对LPS诱导的HAECs炎性损伤具有保护作用,其机制与调控TLR4/IKK/NF-κB-p65信号有关.

目的:研究艳山姜挥发油对高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞(RMCs)增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法:将培养的RMCs分为正常对照组、甘露醇对照组、模型组、罗格列酮阳性对照组及艳山姜挥发油高(1 μg/L)、中(0.5μg/L)、低(0.25 μg/L)浓度组.给药48 h后,MTT法检测艳山姜挥发油对高糖诱导RMCs增殖的影响,苏木素-伊红染色(HE)进行形态学观察,划痕修复实验及transwell实验分别分析RMCs迁移能力和侵袭能力.免疫印迹法(Western blot)分析血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果:高糖作用后,RMCs增殖率、迁移及侵袭能力显著升高(P＜0.0l);VEGF蛋白表达显著上调(P＜0.01).与模型组比较,给予艳山姜挥发油及罗格列酮预保护能显著抑制RMCs的异常增殖(P＜0.05),RMCs形态和数量趋近正常对照组,RMCs迁移和侵袭能力显著降低,同时显著下调了VEGF蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:艳山姜挥发油对高糖诱导下RMCs的增殖及VEGF蛋白的表达具有调控作用.

目的 研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制.方法 分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及体内小鼠胸主动脉炎性损伤模型.采用体外血管新生小管成环实验,分析TNF-α诱导HUVECs的血管新生;Western blot和qRT-PCR实验法分别检测HUVECs中VEGFR-2蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测小鼠血清中VEGFR-2的分泌水平;采用HE染色分析小鼠胸主动脉炎性损伤.结果 EOFAZ和ERK抑制剂U0126明显抑制TNF-α诱导的HUVECs血管新生小管成环数量(P＜0.01);EOFAZ能够下调TNF-α诱导小鼠血清中VEGFR-2的分泌(P＜0.01);EOFAZ和U0126对TNF-α诱导的HUVECs中VEG-FR-2的蛋白和mRNA表达有抑制作用(P＜0.01);EOFAZ能够抑制TNF-α诱导小鼠胸主动脉炎性细胞的浸润.结论EOFAZ能抑制TNF-α诱导血管新生和炎性损伤,其机制与通过ERK信号通路下调VEGFR-2的表达有关.

目的:检测艳山姜挥发油(EOFAZ)进入大鼠血浆的成分.方法:采用GC-MS技术和血清药物化学研究方法,分析大鼠经EOFAZ灌胃1h后的入血成分.结果:建立了大鼠给药后血浆样品的分析测定方法,并与空白血浆样品及EOFAZ对比,检测并鉴定出37个入血成分,且均为挥发油原型成分,主要活性成分β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、1,8-桉叶油醇在EOFAZ及大鼠血浆中所占百分含量均较高.结论:艳山姜活性部位37种挥发油进入大鼠血浆,为艳山姜作用的药效基础.

目的:观察艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞的抑制作用,并探索其机制.方法:使用佛波酯(PMA,100μg·L-1)诱导人白血病单核细胞(THP-1)24 h后形成巨噬细胞,实验分为4组,分别为空白组(无血清RPMI 1640),模型组(80 mg·L-1ox-LDL),艳山姜挥发油低剂量组(80 mg·L-1ox-LDL+4μg·L-1艳山姜挥发油),艳山姜挥发油高剂量组(80 g·L-ox-LDL+20 μg·L-艳山姜挥发油).噻唑蓝(MTT)比色法检测艳山姜挥发油对巨噬细胞的活性的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞中白细胞分化抗原36(CD36)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测巨噬细胞内胆固醇酯含量,油红0染色法检测巨噬细胞中脂质小滴的含量.结果:艳山姜挥发油对巨噬细胞无毒性.与空白组比较,模型组的巨噬细胞内脂滴和胆固醇酯的含量显著增加(P＜0.01),CD36蛋白表达显著上升(P＜0.01),ABCA1蛋白表达无显著变化;与模型组比较,艳山姜挥发油显著抑制巨噬细胞中脂滴和胆固醇酯的含量(P＜0.01),下调CD36的蛋白表达(P＜0.01),上调ABCA1蛋白的表达(P＜0.01),艳山姜挥发油可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化.结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导的巨噬细胞向泡沫细胞的形成具有抑制作用,该药理作用与艳山姜挥发油下调巨噬细胞CD36和上调ABCA1蛋白的表达有关.

艳山姜Alpinia zerumbet作为贵州省少数民族常用药物,具有温中燥湿、行气止痛、截疟之功效,主治心腹冷痛、胸腹胀满、消化不良、呕吐腹泻等症状,目前已有近200多年的悠久历史.作者查阅了近30年中外文献,综述了国内外艳山姜化学成分及其药理作用的研究进展,以期为艳山姜的药用价值提供理论依据.随着仪器和科技的进步,艳山姜化学成分引起越来越多的关注,目前已经分离并鉴定出200多种化合物,主要包括挥发油类、黄酮类、甾体类、萜类以及有机酸类等多种化学成分.药理学研究表明艳山姜具有抗氧化、降血压、解痉镇痛、对内皮细胞的保护作用等多种药理活性.然而,目前对艳山姜化学成分的研究仅停留在挥发油部分,对其他有机物及多糖的研究较少,不够深入.临床上对艳山姜用药部位使用比较混乱,艳山姜根、茎、叶、花、果实及种子均可入药,但各药用部位所对应的药理作用没有明确的说明,导致临床用药混乱.此外,对于艳山姜药理作用机制不明确,特别是止痛、消食和抗溃疡等传统活性的研究中,仅能探明其具有该药理活性,而对作用机制的研究较少;且现有研究主要为体外活性实验,还需要临床实验的进一步验证,为进一步合理开发和综合利用艳山姜的药用资源提供参考.

目的:探讨艳山姜挥发油对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的内皮间质转分化(EndMT)的干预作用及信号机制.方法:以10 ng·mL-1 TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立EndMT模型.实验共分为两个部分:(1)分组:正常组,模型组(10 ng·mL-1 TGF-β1),EOFAZ低剂量组(10 ng·mL-1 TGF-β1+1μg·L-1 EOFAZ),EOFAZ高剂量组(10 ng·mL-1TGF-β1+ 4μg·L-1 EOFAZ).EOFAZ干预作用2h后加入TGF-β1共同孵育72 h.采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;波形蛋白(Vimentin)和血小板-内皮细胞粘附分子(CD31)以及Notch-1的蛋白表达情况通过蛋白免疫印迹法检测.(2)分组:正常组,模型组(10 ng·mL-1 TGF-β1),γ-分泌酶抑制剂组(10 ng·mL-1 TGF-β1+15 μmol·L-1 DAPT),EOFAZ高剂量组(10 ng·mL-1 TGF-β1+4 μg·L-1 EOFAZ).DAPT及EOFAZ干预作用2h后加入TGF-β1共同孵育72 h.通过蛋白免疫印迹法检测Notch-1,Snail和Slug的表达.结果:内皮细胞经TGF-β1处理72 h后,细胞迁移能力明显增强(P＜0.01),CD31蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Vimentin,Notch-1,Snail和Slug蛋白表达水平显著提高(P＜0.01,P＜0.05),给予EOFAZ作用后能逆转上述改变.同时在给予DAPT阻断Notch信号后,Notch-1,Snail和Slug蛋白水平下降(P＜0.05).结论:EOFAZ干预TGF-β1诱导EndMT的作用与Notch信号相关,其可以进一步调控Snail和Slug的表达.