作为抗骨质疏松的基础用药，活性维生素D主要通过促进肠道对钙和磷的吸收，抑制甲状旁腺激素释放，维持血钙和血磷水平正常，进而保证骨骼健康。艾地骨化醇(eldecalcitol, ED-71)是活性维生素D的新型类似物，于2011年正式用于日本骨质疏松患病人群的临床治疗。艾地骨化醇不仅能够促进肠道钙吸收、抑制破骨细胞数量和活性，还可有效促进不依存于破骨细胞骨吸收的局灶性骨形成—"mini-modeling"骨形成，提升骨小梁连续性和增加骨小梁厚度，从而修复骨组织微损伤。

艾地骨化醇是一种新型活性维生素D类似物,在1,25(OH)2D3基础上于2β位引入 3-羟基丙氧基结构,与其他活性维生素D及类似物相比,具有更强的抑制骨吸收作用.临床证据显示艾地骨化醇治疗骨质疏松症具有良好的疗效和安全性.艾地骨化醇可增加骨质疏松症患者的骨密度,降低骨质疏松性椎体骨折和部分非椎体骨折风险,并且耐受性良好.艾地骨化醇在我国获批不久,临床经验仍需积累,中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会组织编写艾地骨化醇治疗绝经后骨质疏松症中国专家建议,以期为我国医务工作者合理使用艾地骨化醇提供帮助.

[背景]近年来骨化醇类化合物(活性维生素D及其类似物)在肿瘤治疗、免疫调节中的作用逐渐被发现,药用价值显著,但目前化学合成法制备困难,因此高效制备骨化醇类化合物成为研究热点. [目的]利用假诺卡氏菌(Pseudonocardia sp.)转化骨化醇类底物分子并提高转化率.[方法]从化学合成方法常用的原料及中间体中筛选能被有效转化的底物分子,利用单因素及正交试验对转化条件进行优化.[结果]筛选到阿法骨化醇(Alfacalcidol,1α-(OH)VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitol intermediate,AD-M07)、帕立骨化醇中间体(Paricalcitolintermediate,PC-M07)3种底物分子,分别被转化为骨化三醇(Calcitriol,1α,25(OH)2VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitol intermediate,AD-M08)、帕立骨化醇(Paricalcitol,PC).确定最优转化条件:蛋白胨20.0 g/L,葡萄糖15.0 g/L,部分甲基化的β-环糊精(PMCD) 0.5％(质量体积比),转化温度25-30℃C,接种量5％-10％(体积比),转化时间72、72、96 h,底物浓度1.2、0.6、0.6 mg/mL,初始pH 6.0-8.0.在此条件下3种底物的最高转化率分别达到85％、96％、75％.[结论]通过转化条件的优化3种产物的转化率大幅提高,为更加快速高效地利用微生物转化法制备骨化醇类化合物提供参考.

目的 探讨艾地骨化醇(eldecalcitol,ED-71)对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)表达的影响.方法 首先,使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-CYR61组)及阴性对照pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到人骨肉瘤细胞系(U2OS)中,通过RT-PCR和Western blot验证转染效率.然后,将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组,对照组和ED-71组细胞未进行转染,ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61.转染后,对照组细胞不做药物处理,其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h.CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平,Western blot 检测细胞中 CYR61、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Fibronectin、E-cadherin 和 N-cadherin 的蛋白表达水平.结果 与 pc-DNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-CYR61组细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.001).与对照组比较,ED-71组中CYR61的mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.001),OD450 nm值降低(P＜0.001),集落数量降低(P＜0.001),细胞凋亡率升高(P＜0.001),Bax蛋白表达水平升高(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.001),迁移和侵袭细胞数降低(P＜0.001),MMP-2、MMP-9 和 Fibronectin 蛋白表达水平降低(P＜0.001),E-cadherin 蛋白表达水平升高(P＜0.001),N-cadherin 蛋白表达水平降低(P＜0.001).与 ED-71+pcDNA3.1-NC 组比较,ED-71+pcDNA3.1-CYR61 组 U2OS 细胞中 CYR61 的 mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.001),集落数量升高(P＜0.001),OD450nm值升高(P＜0.001),细胞凋亡率降低(P＜0.001),Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.001),迁移和侵袭细胞数升高(P＜0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin 蛋白相对表达水平升高(P＜0.001),E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.001),N-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.001).结论 艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移能力.