目的:探讨黏附分子nectin-1的表达对大鼠癫痫发作及苔藓纤维出芽的影响。方法:(1)选取成年雄性SD大鼠36只按照随机数字表法分为对照组( n=6)、空载体组( n=6)和病毒干扰组( n=24)，其中病毒干扰组按病毒注射后时间点进一步分为3 d、7 d、14 d及30 d 4个亚组，各亚组6只。采用Western blotting实验检测各组大鼠海马区nectin-1蛋白表达情况。(2)另选取成年雄性SD大鼠12只按照随机数字表法分为病毒干扰癫痫组( n=6)及空载体癫痫组( n=6)。向2组大鼠海马分别注入等量基因干扰慢病毒和慢病毒空载体并点燃匹罗卡品癫痫模型，观察2组大鼠行为学变化，通过Timm染色观察大鼠海马区苔藓纤维出芽的情况。 结果:(1)各组大鼠海马区nectin-1蛋白表达差异有统计学意义( F=76.120， P=0.000)。与对照组及空载体组比较，病毒干扰组中7 d、14 d、30 d亚组大鼠海马组织中nectin-1表达均明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。(2)大鼠行为学比较：病毒干扰癫痫组大鼠点燃所需时间[(34.33±2.38) min]较空载体癫痫组大鼠[(24.50±2.06) min]明显延长，差异有统计学意义( t=7.650， P=0.000)。发作级别：病毒干扰癫痫组大鼠造模后1 h内各时间点癫痫发作级别均较空载体癫痫组大鼠低，差异具有统计学意义( P<0.05)。大鼠癫痫点燃后至30 d，与空载体癫痫组比较，病毒干扰癫痫组大鼠出现自发发作时间延长，自发发作次数减少，差异均具有统计学意义( P<0.05)。Timm染色：病毒干扰癫痫组Timm染色评分[(3.500±0.224)分]较空载体癫痫组大鼠[(4.667±0.211)分]明显降低，差异具有统计学意义( t=9.289， P=0.000)。 结论:癫痫大鼠海马区nectin-1表达被抑制后能延缓大鼠癫痫发生，减少癫痫的自发发作次数，其作用机制可能与nectin-1减少海马区异常神经回路苔藓纤维出芽的形成有关。

目的 探讨姜黄素通过调控miR-134发挥神经保护及潜在抗癫痫作用的机制.方法 按照随机数字表法将48只大鼠分为对照组、癫痫组和姜黄素组3组,每组16只.除对照组外,其余两组采用氯化锂-匹罗卡品诱导制备癫痫持续状态大鼠模型.造模后第2天开始,姜黄素组大鼠每天固定时间腹腔注射2 mL/kg姜黄素,而癫痫组和对照组每天固定时间腹腔注射等量二甲基亚砜溶液,持续10 d.在造模后第14天,通过颈椎脱臼法处死3组大鼠,采用Timm染色观察大鼠海马组织中苔藓纤维出芽程度,qRT-PCR法检测大鼠海马组织及血清中miR-134表达水平,Western blot法检测大鼠海马组织中LIM激酶1(LIMK1)蛋白表达水平.结果 与对照组比较,癫痫组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均升高(均P＜0.05);与癫痫组比较,姜黄素组大鼠齿状回和CA3区苔藓纤维出芽程度评分均降低(均P＜0.05).与对照组比较,癫痫组大鼠海马组织中miR-134表达水平升高(P＜0.05),LIMK1蛋白表达水平下降(P＜0.05);与癫痫组比较,姜黄素组大鼠海马组织中miR-134表达水平下降(P＜0.05),LIMK1蛋白表达水平升高(P＜0.05).与对照组比较,癫痫组和姜黄素组大鼠血清中miR-134表达水平均下降(均P＜0.05).结论 姜黄素可抑制癫痫持续状态大鼠海马组织中miR-134表达,上调LIMK1蛋白表达水平,影响突触重塑,可能因此发挥神经保护及潜在的抗癫痫作用.

目的:比较雷帕霉素靶向制剂与雷帕霉素普通制剂治疗癫痫的差异.方法:制备脑靶向的雷帕霉素纳米粒.采用毛果芸香碱诱发大鼠癫痫发作.脑电描记术监测自发性癫痫的发作;蛋白质印迹法检测不同剂型雷帕霉素对mTOR信号通路的影响;Fluoro-Jade B染色观察海马区神经元活性;Timm染色观察海马区苔藓纤维出芽情况.结果:脑靶向制剂可降低大鼠自发性癫痫发作频率,作用效果较普通制剂明显(P<0.05);以磷酸化S6K和S6为指征,脑靶向制剂比普通制剂雷帕霉素对mTOR信号通路异常激活的抑制作用更强(均P<0.05);脑靶向制剂可显著改善神经元凋亡,但与普通制剂无差异(P>0.05);脑靶向制剂可减少海马区苔藓纤维出芽,作用效果较普通制剂明显(P<0.05);脑靶向制剂对大鼠体质量增长的抑制作用较普通制剂减弱(P<0.05).结论:雷帕霉素脑靶向制剂对癫痫的治疗作用优于普通制剂,且其不良反应小于普通制剂.

目的:探讨5-HTR6参与氯化锂-匹罗卡品致慢性颞叶癫痫大鼠海马苔藓纤维出芽的机制.方法:动物分组:分为空白组及癫痫组,分别于造模后1、2、4周观察苔藓纤维出芽变化及5-HTR6、Fyn、p-ERK1/2蛋白及GAP-43 mRNA表达变化.将实验鼠分为空白组、癫痫组、药物干预组,药物干预组又分为6个亚组,分别给予溶剂二甲基亚砜DMSO、5-HTR6受体拮抗剂SB271046、Fyn拮抗剂PP2、ERK1/2拮抗剂PD98059、SB271046+PP2、SB271046+PD98059,观察海马苔藓纤维出芽及5-HTR6、Fyn、p-ERK1/2、GAP-43mRNA表达变化.结果:①造模后第2周进入慢性期,在造模后7～28 d开始出现慢性自发性发作,5-HTR6受体拮抗剂SB-271046能够降低癫痫发作等级及发作频率;②癫痫发作后1周即观察到少量海马CA3区苔藓纤维出芽,随时间延长进行性增加,而空白组未见或只有极少量海马苔藓纤维出芽.SB-271046干预后海马苔藓纤维出芽明显减少,与空白组比较差异有统计学意义;③造模后5-HTR6、Fyn、p-ERK1/2及GAP-43 mRNA表达水平增高,于造模后4周时表达最高,给予5-HTR6受体、Fyn、ERK1/2拮抗剂后p-ERK1/2表达均减少,其中联合应用5-HTR6受体、ERK1/2受体拮抗剂最为明显.结论:氯化锂-匹罗卡品点燃的大鼠癫痫模型痫样放电后出现苔藓纤维出芽,随时间延长出芽程度加重,5-HTR6可能在苔藓纤维出芽过程中发挥重要作用.而SB271046通过抑制5-HTR6介导的Fyn/ERK通路,调控下游GAP-43mRNA表达,从而减少苔藓纤维出芽.

癫痫是多种原因引起的以中枢神经元反复异常放电为特征的综合征,部分患者对常规治疗效果不佳,发展为耐药性癫痫.长期痫性损伤可导致海马齿状回发生苔藓纤维出芽及异位突触联系,形成异常的兴奋性环路,从而增高颗粒细胞的敏感性,促进自发性癫痫发作的反复产生.层黏连蛋白与神经异常再生密切相关,是细胞外基质的重要成分,具有调节神经细胞生长、黏附、迁移和信号传导的功能;其是神经元异常生长、胶质细胞增生与苔藓纤维发芽过程中的关键因素.苔藓纤维发芽是耐药性癫痫患者脑组织中异常神经网络形成的基础,层黏连蛋白在耐药性癫痫的发生、发展中扮演重要角色.

癫痫是常见的神经系统疾病,其发病机制复杂,病理改变亦多样化,以海马神经元细胞凋亡、胶质细胞增生、苔藓纤维出芽等为主要病理表现.近年来,国内外对于抗癫痫治疗专注于分子水平及其信号通路的研究,其中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)这一信号通路通过细胞生长增殖、蛋白质代谢、细胞凋亡自噬、突触可塑性等对抗癫痫发挥重要的作用.中医药在治疗癫痫上疗效明显,大量实验证明中医药干预,包括中药单体、中药复方等治疗,能够通过mTOR信号通路发挥抗癫痫作用,从而减少癫痫发作频率、保护神经元细胞、改善癫痫症状等.mTOR信号通路也成为中医药治疗癫痫的重要靶点.现综述mTOR通路对癫痫的影响及中医药干预作用的研究进展.

针灸是中医治疗癫痫的常用方法,能够安全有效地提高癫痫治疗总有效率、降低癫痫发作程度及减少不良反应率.本文通过对近10年来国内外针灸治疗癫痫的相关机制研究进行总结,归纳发现针灸可以通过激活PI3K/Akt信号通路以及调控半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、肿瘤抑制基因(P53)等表达,有效拮抗神经元凋亡;通过负向调控核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)等表达,抑制脑内炎性反应;通过抑制胶质细胞的异常活化,抑制神经元过度兴奋;通过下调免疫因子IgG1、IgG2a等表达以及调控内分泌水平,纠正神经—内分泌—免疫网络失衡;通过激活Nrf-2-ARE抗氧化信号通路以及调节抗氧化酶水平,减轻氧化应激损伤;通过调控磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated camp response element binding protein,pCREB)、神经元性特异性烯醇化酶(neuron-specific-enolase,NSE)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)等的表达水平,发挥神经元保护作用;通过调控离子通道、抑制苔藓纤维出芽、调节肠道菌群以及抑制多药耐药基因及蛋白过表达等多种途径治疗癫痫.研究结果表明针灸对于癫痫的干预作用具有多方面、多维度、多靶点综合调控的特点.今后的研究应加强对针灸治疗癫痫的辨证选穴规律以及操作手法的探讨及统一,同时更深入地研究针灸各靶点间潜在的关联性,加快更多更深层次基础研究的开展以丰富针灸机制研究.