目的 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定五味清浊颗粒中的化学成分,联合网络药理学、分子对接技术探讨其治疗腹泻药效物质基础和作用机制.方法 采用Eclipsepius C18 色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8 μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.4 mL·min-1.质谱采用电喷雾离子源(ESI)正、负离子模式,扫描范围m/z 50～2000条件下采集多级质谱碎片信息.应用网络药理学构建"核心成分-作用靶点-通路"的网络,对其潜在药效物质基础进行预测.利用 AutoDock Vina进行分子对接验证.结果 共鉴定出86个主要化学成分,包括生物碱类25个、黄酮类23个、有机酸类12个、鞣质类16个、苯丙素类2个、其他类化合物8个.网络药理学分析结果显示,槲皮素、木犀草素、鞣花酸、胡椒碱、山柰酚、荜茇宁主要作用于IL-6、TNF、EGFR、IFNG、IL-10、IL-8等核心靶点,调节PI3K-Akt、HIF-1、JAK-STAT等关键信号通路来发挥治疗腹泻作用.分子对接结果显示核心成分与核心靶点间具有良好的结合性能.结论 该研究成功采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对五味清浊颗粒化学成分进行全面分析鉴定,初步阐明其治疗腹泻的作用机制,为其药效物质基础和质量控制奠定基础.

研究五味清浊散在不同肠段的吸收情况,以及其生物碱类成分胡椒碱、胡椒新碱、荜茇宁和二氢荜茇宁的吸收特征.通过构建大鼠肠外翻模型,应用UPLC-Q-TOF-MS技术测定五味清浊散在不同肠段透过的化学成分,以及采用UPLC-Q-TRAP-MS技术测定肠吸收液中胡椒碱、胡椒新碱、荜茇宁和二氢荜茇宁的含量,计算其吸收参数,并分析其在大鼠不同肠段、不同时间的吸收特征.实验结果显示,在建立的UPLC-Q-TOF-MS条件下,在空肠、回肠、十二指肠和结肠段的肠囊液中分别检测到 27、27、8、6 个吸收成分;且发现五味清浊散中胡椒碱、胡椒新碱、荜茇宁和二氢荜茇宁在各肠段均为线性吸收,r均达到0.9 以上,各肠段的吸收量胡椒碱>胡椒新碱>二氢荜茇宁>荜茇宁,但各成分在各个肠段的吸收速率及其机制不尽相同,提示在不同肠段五味清浊散提取液各成分的吸收具有选择性,并不是简单的半透膜渗透过程.

目的 研究荜茇不同极性部位高效液相色谱(HPLC)图谱与其体外抗氧化活性的谱效关系,明确荜茇抗氧化物质基础.方法 建立荜茇不同极性部位的HPLC图谱,并采用HPLC-Q-Orbitrap HRMS对共有峰进行识别分析;对INS-1胰岛β细胞进行高糖损伤,建立细胞氧化损伤模型,通过荜茇不同部位干预,并采用荧光酶标仪检测细胞内的活性氧(ROS)水平,筛选荜茇的体外抗氧化活性部位;采用灰色关联度分析荜茇各极性部位HPLC特征峰与抗氧化活性之间的谱效关系,寻找对抗氧化作用贡献较大的成分.结果 分别得到石油醚部位1.70 g,乙酸乙酯部位5.18 g,正丁醇部位51.21 g,水提部位3.16 g,得到胡椒碱单晶;细胞内抗氧化活性实验结果表明正丁醇部位的抗氧化活性较好,HPLC图谱表明荜茇共有18个特征峰,灰色关联度结果表明荜茇图谱中峰 1(荜茇宁,piperlonguminine),峰7(荜茇环碱,pipernonaline),峰5(pipercallosine),峰6(荜茇壬三烯哌啶,dehydropipernonaline),峰4(墙草碱,pellitorin),峰3(胡椒碱,piperine),峰8(假荜茇酰胺B,retrofractamide B),峰 12(brachystamide B),峰 11[(2E,4E,13E)-14-(benzo[d][1,3]dioxol-6-yl)-N-isobutyltetradeca-2,4,13-trienamide]和峰10(几内亚胡椒碱,guineensine)与体内抗氧化活性密切.结论 本文采用方法科学严谨,能较为全面和准确地反映荜茇中具有抗氧化活性的有效成分,为荜茇的进一步开发利用提供科学依据和理论支持.

目的 阐释通拉嘎-5抗绝经后骨质疏松的药效物质基础和作用机制.方法 采用HPLC-Q-Exactive MS/MS技术分析通拉嘎-5的入血原型成分,并利用分子对接技术表征入血原型成分与雌激素受体ER的结合能,探讨通拉嘎-5抗绝经后骨质疏松的作用机制.结果 分析得到入血原型成分26个,主要包括生物碱类、酚酸类和挥发油类;其中,桂二萜醇、荜茇环碱、胡椒碱、二氢胡椒碱和1,3-Benzodioxle-5-propanal与ERα、ERβ结合能均≤-5 kcal·mol-1,鞣花酸、对羟基苯甲酸、二氢荜茇明宁碱、荜茇宁、胡椒油碱B、(2E,4E,12Z)-N-Isobutylocatadeca-2,4,12-trienamide与Erα结合能≤-5 kcal·mol-1.结论 通拉嘎-5中桂二萜醇、胡椒碱等11个入血原型成分可能作用于雌激素受体发挥抗绝经后骨质疏松的作用,可为该方质量控制研究和临床合理应用提供参考.

研究荜茇总生物碱中主要成分在正常大鼠粪便及尿液的代谢产物,推测其代谢途径.通过灌胃给予大鼠荜茇总生物碱后,收集粪便及尿液并进行预处理,采用高效液相色谱与傅里叶变换离子回旋共振质谱仪联用技术(HPLC-FT-MS)进行检测,根据高分辨质谱数据,并与文献对照,推测代谢产物的结构.在大鼠的粪便及尿液中检测到胡椒碱、胡椒新碱、荜茇明宁碱、二氢荜茇明宁碱、墙草碱及其13个代谢产物,进而提示荜茇总生物碱中的主要成分可能在大鼠体内通过Ⅰ相、Ⅱ相代谢反应产生代谢产物,并经粪便及尿液排出体外.为阐明荜茇总生物碱在体内发挥药效的物质基础和作用机制奠定基础.

颅痛宁颗粒是由国医大师卢芳教授研发,广泛用于治疗三叉神经痛.现研究将其用于偏头痛的治疗,以期扩展其适应症范围.本文通过临床观察证明颅痛宁颗粒治疗偏头痛疗效显著,同时分析其作用机制以及"川芎-荜茇"药对的配伍关系,从而为其合理应用于临床提供依据.

活性蛋白质组技术(ABPP)是越来越多的化学蛋白质组学方法之一,该技术利用小分子化学探针来探索化合物和靶点之间的相互作用机制.在中药活性成分分子靶点的鉴定中,ABPP技术具有高效、准确等优越性,目前已经利用该技术鉴定了许多中药活性成分的分子靶点.综述了ABPP技术在中药活性分子靶点中的应用,包括青蒿素、黄芩苷、穿心莲内酯、苏木酮、龙牙葱木皂苷、山楂酸、蟾毒内酯、毛兰素与荜茇宁等,为创新药物靶点的发现提供新的思路.

目的:探讨荜茇宁(GBN)和胡椒碱(PIP)对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏与肌肉线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和糖脂代谢的影响.方法:采用高脂饲料喂养配合高脂乳剂灌胃,同时按每周5mg/kg注射STZ的方法诱导IR大鼠模型.每4周检测各组空腹血糖(FBG)、血清甘油三酯(TG)情况,连续给药8周后进行糖耐量实验(OGTT)、检测血清胰岛素(FINS)含量并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).给药8周后,采用Real-time PCR检测大鼠肌肉和肝脏mtDNA拷贝数和骨骼肌PGC-1α mRNA表达水平的变化.结果:GBN和PIP均能显著降低IR模型大鼠血清TG、FBG、INFS水平和HOMA-IR(P＜0.05,P＜0.01),显著改善葡萄糖耐量异常情况(P＜0.01).IR模型大鼠肝脏与肌肉细胞mtDNA拷贝数均减少,各药物组均能抵抗这种抑制作用;高剂量的GBN和PIP能增加肌肉mtDNA的拷贝数(P＜0.05,P＜0.01),并且增加肌肉PGC-1 α mRNA表达(P＜0.05);PIP能增加肝脏mtDNA拷贝数(P＜0.05,P＜0.01).结论:GBN和PIP能够明显改善IR模型大鼠的糖脂代谢异常状况;同时增加IR模型大鼠肌肉mtDNA拷贝数和PGC-1 α mRNA表达,改善线粒体功能.

目的 对苎叶蒟Piper boehmeriifolium的枝叶部位进行化学成分研究.方法 采用硅胶、RP-C18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行分离和纯化,并综合运用IR、HR-ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC等方法鉴定化合物的结构.结果 从苎叶蒟乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为3-(3,4-methylene-dioxybenzyl)-4-(3,4-dimethoxybenzyl)-1H-pyrrole-2,5-dione(1)、2E,4E-decadienoylpiperidide (2)、2E-decenoylpiperidide (3)、墙草碱(4)、piperchabamide B(5)、假蒟亭碱(6)、piperdardine (7)、胡椒新碱(8)、胡椒碱(9)、二氢荜茇明宁碱(10)、chingchengenamideA(11)、假荜茇酰胺B(12)、guineensine (13)、荜茇宁(14)和kusunokinin (15).结论 化合物1为新化合物,命名为胡椒木脂酰亚胺,化合物2、3、7、8、10和15为首次从该植物中分离得到.

目的 探究荜茇生物碱对胰岛素抵抗的脂肪细胞葡萄糖摄取的影响.方法 将由3T3-L1前脂肪细胞分化来的脂肪细胞给予地塞米松诱导,建立胰岛素抵抗模型,将细胞分为正常组、胰岛素抵抗模型组、二甲双胍组、荜茇宁组、胡椒碱组.除正常组外其余各组使用地塞米松造模48 h,造模成功后分别按照分组进行给药,检测给药后葡萄糖消耗量的变化.结果 地塞米松造模48 h后,模型组的葡萄糖消耗量显著高于正常组,证明造模成功.之后对造模后的细胞进行药物干预,结果显示经过荜茇宁和胡椒碱处理后,给药组细胞培养基中葡萄糖消耗量较模型组均有所升高.结论 荜茇生物碱能通过增加3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖利用达到改善IR的作用.