目的:探讨非结核分枝杆菌肺病的临床病理学特征和分子病理学方法在其诊断中的价值。方法:分析首都医科大学附属北京胸科医院2016年2月至2019年8月石蜡包埋标本诊断肺部非结核分枝杆菌（NTM）感染的45例患者病理组织学形态、抗酸杆菌形态特征及临床、影像、细菌学资料；荧光PCR方法检测结核分枝杆菌特异基因序列IS6110；探针熔解曲线方法行分枝杆菌菌种鉴定；选取同期确诊肺结核病例50例进行比较分析。结果:NTM肺病病理组织学表现为坏死性肉芽肿34例（75.6%，34/45），非坏死性肉芽肿1例（2.2%，1/45），非肉芽肿病变10例（22.2%，10/45）；坏死为粉染坏死、富于核碎片的嗜碱性坏死及化脓性坏死，与肺结核比较，后者更多表现为粉染坏死及嗜碱性坏死，差异有统计学意义（χ 2=10.270， P=0.001；χ 2=7.449， P=0.006）；17例（37.8%，17/45）NTM肺病中观察到巨大奇异形多核巨细胞，与肺结核组比较差异有统计学意义（χ 2=13.446， P<0.01）。抗酸杆菌数量多少不一，形态多样，胞内分枝杆菌常见大量抗酸杆菌，堪萨斯分枝杆菌奇异形抗酸杆菌易见。胞内分枝杆菌18例（40.0%，18/45），蟾蜍分枝杆菌8例（17.8%，8/45），鸟、堪萨斯、龟分枝杆菌各6例（13.3%，6/45），猿猴分枝杆菌1例（2.2%，1/45）。 结论:NTM肺病的诊断和鉴别诊断值得病理医师关注，仅靠组织形态学特征和抗酸杆菌形态特点不能明确诊断，分子病理学方法是确诊结核病和NTM肺病的重要手段。

目的:寻找海南省人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症发病情况和基因突变特点。方法:对海南省2007至2016年出生的914 520名新生儿的干血斑使用荧光斑点法进行G6PD活性筛查。初筛可疑标本召回使用G6PD/6-磷酸葡萄糖脱氢酶（6GPD）比值法进行确诊，对2016年确诊为G6PD缺乏的患儿的3 012份干血斑使用多色探针荧光PCR熔解曲线法进行基因分型。结果:海南省10年间在914 520例新生儿中初筛阳性36 314例，确诊了26 370例G6PD缺乏，发病率为2.88%（26 370/914 520）。以民族划分，汉族人群G6PD发病率2.80%（21 688/774 555）。黎族人群发病率3.45%（4 292/124 419），黎族和汉族发病率比较，差异具有统计学意义（χ 2=161.261， P=0.000）。苗族人群发病率3.31%（212/6 401），苗族和汉族发病率相比较差异具有统计学意义（χ 2=6.104， P=0.013）。其他民族人群发病率为1.95%（178/9 145），与汉族发病率相比较差异具有统计学意义（χ 2=24.283， P=0.000）。在3 012例G6PD确诊病例中共检出13种基因突变，其中c.1376 G>T、c.1388 G>A、c.95 A>G和c.1024 C>T突变合并约占91.74%。其中经基因测序发现16种基因型以外的2种突变，即c.86C>T和c.1311C>T。 结论:海南省新生儿人群G6PD发病率高，G6PD发病有民族和地域差异。海南省人群基因突变主要以c.1376G>T、c.1388G>A、c.95 A>G和c.1024 C>T为主。

目的:了解宁波市人群地中海贫血（简称地贫）基因分型情况，为今后宁波市地贫防控提供参考依据。方法:选取2019年1月至2022年3月在宁波市妇女儿童医院就诊的疑似地贫患者为研究对象，采集末梢血制成干血斑标本并提取DNA。采用荧光PCR熔解曲线分析技术结合Sanger测序或多重连接依赖探针扩增（MLPA）进行地贫热点变异基因检测。结果:共纳入疑似地贫患者2 680例，检出地贫基因携带者1 426例，总检出率为53.2%。其中，α-地贫595例，占41.7%，以-- SEA/αα、αα/-α 3.7和-- SEA/-α 3.7较常见；β-地贫807例，占56.6%，以β IVS-Ⅱ-654/β N、β CD41-42/β N、β CD17/β N较常见；αβ-复合型地贫24例，占1.7%。其中，包括6种罕见变异类型，包括融合基因（Fusion）、-- FIL、HBA2：c.376C>T、CD8/9（+G）、IVS-Ⅰ-2（T>C）和IVS-Ⅱ-1（G>A），均为宁波市的首次报道。 结论:宁波市疑似地贫患者中，地贫检出率较高，基因变异类型复杂，应提高对贫血患者行地贫基因检测的意识。

目的 分析非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床病理特征及分子病理诊断,提高病理医生的诊断及鉴别诊断能力.方法 回顾性分析2016年11月至2022年4月首都医科大学附属北京胸科医院收治的57例NTM肺病患者的临床病理资料,光镜下观察组织学形态,行抗酸染色法查找抗酸杆菌,并进一步应用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌(MTB)DNA和探针熔解曲线法进行分枝杆菌菌种鉴定.结果 57例NTM肺病的分枝杆菌菌种鉴定结果:胞内分枝杆菌23例,蟾蜍分枝杆菌14例,堪萨斯分枝杆菌8例,鸟分枝杆菌7例,脓肿分枝杆菌3例,龟分枝杆菌2例.27例手术标本组织学特征主要表现为典型肉芽肿伴坏死13例,不典型肉芽肿伴坏死8例,纤维包裹性坏死3例,支气管扩张2例,非坏死性肉芽肿1例,脓肿分枝杆菌感染灶可见小脓肿形成.57例标本抗酸染色均查找到抗酸杆菌.抗酸杆菌分布在坏死、纤维素样渗出及组织细胞胞质;胞内分枝杆菌较易形成菌团;堪萨斯分枝杆菌可见异型菌.FQ-PCR技术均未检测到MTB DNA.结论 NTM肺病的临床病理学特征表现多样,没有特异性,分子病理技术能够显著提高明确诊断率.

结核病(TB)是严重危害公众健康的全球性公共卫生问题.耐药结核病(DR-TB)是TB防治的重点和难点.目前,常用的体外药物敏感性试验方法包括表型药物敏感性检测技术和分子药物敏感性检测技术.表型药物敏感性检测技术包括固体药物敏感性试验、液体药物敏感性试验、最低抑菌浓度法,分子药物敏感性检测技术包括GeneXpert MTB/RIF、线性探针技术、基因芯片技术、荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法、FluoroType MTBDR、Xpert MTB/XDR、核酸质谱分析、全基因组测序技术.文章就表型药物敏感性检测和分子药物敏感性检测对DR-TB实验室诊断技术的研究进展进行综述,旨在为DR-TB的早期诊断提供参考.

目的 评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,MeltPro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值.方法 收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病预防控制中心结核病门诊GeneXpert MTB/RIF检测为MTB的(简称MTB阳性)患者痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术和线性探针技术(GenoType MTBDRplus,简称Hain试验)异烟肼耐药检测.分析MeltPro技术检测痰标本MTB异烟肼的耐药性,痰标本荷菌量对检测结果的影响;以培养阳性菌株异烟肼比例法药敏结果为参考标准,评价MeltPro技术耐药检测效能.结果 收集MTB阳性的合格痰标本157例,经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株.MeltPro技术痰标本MTB异烟肼耐药性检测成功率为84.1%(132/157).不同痰涂片结果等级间,MeltPro技术检测异烟肼耐药成功的比例差异存在有统计学意义(H = 24.169,P = 0.000),随痰涂片结果等级的升高,检测成功率由"阴性"标本的64.8%(35/54)升高到"3+""4+"标本的100%(17/17,6/6);该比例也随GeneXpert MTB/RIF检测MTB等级的升高而升高,由"极低"标本的54.8%(17/31),到"高"标本的96.4%(27/28),各等级间差异有统计学意义(H = 27.763,P = 0.000).MeltPro技术、Hain试验和药敏试验的异烟肼耐药检出率分别为22.0%(29/132),15.3%(19/124),和14.6%(19/130),三者差异无统计学意义(χ2 = 2.997,P = 0.223).以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,MeltPro技术检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:84.6%(11/13)、91.2%(93/102)、55%(11/20)、97.9%(93/95),Kappa值为0.614;Hain试验检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:55.6%(10/18)、92.3%(84/91)、58.8%(10/17)、91.3%(84/92),Kappa值为0.490.结论 MeltPro技术可直接检测痰标本MTB耐药性,快速准确筛查患者耐药情况,缩短耐药筛查时间.

目的 评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2(arylamine N-acetyl-transferases 2,NAT2)基因多态性的性能.方法 选取于2015-2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象,分别为371例和355例.收集研究对象外周血标本.应用荧光探针熔解曲线法[分析NA T2基因rs1801280(341T→G)、rs1799929(481C→T)、rs1799930 (590G→ A)和rs1799931(857G→A)等4个单核苷酸多态性(SNP)]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279 (191G→A)、rs1041983 (282C→T)、rs1801280(341T→C)、rs1799929 (481C→T)、rs1799930 (590G→A)、rs1208 (803A→G)和1799931 (857G→A)的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析,并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析.结果 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致.荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2.5h.共检测到NAT2*4/*4、NAT2*5/*4、NAT2*6/*4、NAT2 *7/*4、NAT2*5/* 11、NAT2*6/* 11、NAT2*7/* 11、NAT2*5/*6、NAT2*6/*7、NAT2*5/*5、NAT2*6/*6、NAT2*7/*7、NAT2*5/*7等13种NA T2基因型.福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37.20％(138/371)、42.32％(157/371)和20.49％(76/371);北京胸科医院的结核病患者中,快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27.89％(99/355)、54.65％(194/355)、17.46％(62/355);两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义(x2 =11.37,P=0.003).所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2*4/*4基因型[100.00％ (237/237)],而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2*6和NAT2*7的单倍型[90.22％ (249/276)].结论 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NA T2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点,适用于中国地区人群的NA T2基因型的检测.

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是一种利用DNA杂交与退火熔解特性进行核酸分析的技术,主要通过对DNA解离活动中荧光染料变化的监控,实现突变的筛查和检测.HRM分析技术不需要探针标记,并且能够在很大程度上减少测序的负担,具有特异性好、通量高、时间成本低、便于操作等优点.HRM分析技术还是一种同质闭管的检测方法,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与后续检测均在同一孔内完成,无需转移样品,能有效的减少交叉污染的可能性.近年来有越来越多的专家学者尝试将HRM分析技术应用于法医学研究和相关案例中.本文拟对高分辨率熔解曲线分析技术的原理、技术特点、局限性以及在法医学中的应用进行综述.

目的 根据ISO15189认可要求评价全自动单核苷酸多态性分析仪i-densy IS-5320平台检测骨髓增殖性肿瘤患者JAK2基因V617F突变.方法 仪器性能验证.选择2014 年12月至2017年2月间复旦大学附属华山医院JAK2 基因 V617F 突变阳性外周血标本20 例,JAK2 基因V617F突变阴性的外周血标本20例,以TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR作为对照方法,经测序方法验证评价仪器直接检测全血JAK2基因V617F突变的准确性.使用全血样本分别评估检测平台的检测重复性、携带污染与交叉污染,以及抗干扰能力.取HEL细胞与HCT116细胞为突变型对照和野生型对照,配制12种不同突变细胞比例样本进行检测,以此评价检测突变负荷的能力.结果 i-densy IS-5320平台与TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法检测完全一致;批内重复性与批间重复性为100%;未观察到携带污染与交叉污染;高胆红素(总胆红素:＞20.4 μmol/L)与高甘油三酯(甘油三酯:＞1.8 mmol/L)血样本对突变检测无明显干扰;该平台能够稳定检出负荷低至0.25%的突变.结论 i-densy IS-5320可实现对全血直接进行JAK2基因V617F突变检测,具备较高的灵敏度、准确度和稳定性,操作简便,能够达到临床对突变的检测要求.

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值.方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况.以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等.结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44％(135/158),特异度为94.01％(769/818),Kappxa值为0.75,诊断符合率为92.62％(904/976).以MGIT960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33％(20/24),特异度为94.59％(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59％(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83％(23/24),特异度为95.50％(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56％(129/135).结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查.