患儿女，9岁，以“多饮、多尿、精神欠佳2个月，加重半天”于2021年9月10日入西安市儿童医院儿童内分泌科。2个月前患儿无明显诱因出现多饮、多尿，每天饮水量约2 500 mL，尿7~8次/d，每次尿量约400~500 mL，食欲增加，体质量较前减轻。同时伴有乏力，睡眠增多，双下肢浮肿，无昏迷、抽搐及意识障碍，无发热、咳嗽，无呕吐、腹泻，无腹痛，曾就诊当地中医诊所，诊断为“脾胃虚、气血不足”予口服中药调理治疗2个月，效果欠佳。6 h前患儿精神反应差，意识障碍进行性加重，伴深大呼吸，全身乏力明显，就诊于我院急诊。急查血糖：31.3 mmol/L；尿常规：葡萄糖（+++），酮体（+++），隐血（++）；血气分析：pH 7.06，二氧化碳分压（PCO 2）6 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），氧分压（PO 2）143 mmHg，血清钠（Na +）127 mmol/L，血清钾（K +）2. 5 mmol/L，血清钙（Ca 2+）1.31 mmol/L，碳酸氢盐（HCO 3-）< 3 mmol/L，剩余碱（BE）未测出。给予0.9%氯化钠注射液360 mL（20 mL/kg）后以“糖尿病酮症酸中毒”收入内分泌科。患儿自发病后，食欲增加，尿量增加。近2 d无大便，2个月内体质量下降3 kg。既往史：2个月前因“急性扁桃体炎"于当地医院查尿常规：葡萄糖（++++），蛋白质（+），酮体（+++），未特殊处理、未规律复查。否认“肝炎、结核”等传染病史及接触史，否认过敏、手术及外伤史。无糖尿病家族史。入院查体：体温36.3 ℃，呼吸32次/min，脉搏124次/min，血压104/56 mmHg，体质量18 kg，嗜睡，反应差，深大呼吸，营养不良貌，口周略苍白，面色口唇欠红润，重度脱水貌。皮肤弹性差。双肺呼吸音清，未闻及干湿啰音。心音有力，律齐，各瓣膜听诊区未闻及杂音。腹胀，拒按，肝脾触诊不满意，肠鸣音2次/min。双足踝及胫前轻度凹陷性浮肿。双手足及小腿下2/3温度低，毛细血管再充盈时间5 s。初步诊断：糖尿病酮症酸中毒。入内分泌科后给予补液（1/2张无糖液体）、胰岛素（0.1 U·kg －1·h －1）静脉泵入等治疗。入院后急查血气分析：pH 7.01，PCO 2 9 mmHg，PO 2 140 mmHg，Na + 132 mmol/L，K + 1.8 mmol/L，HCO 3- < 3 mmol/L，BE未测出，监测血糖28 mmol/L，入院治疗1 h后患儿呼吸急促、费力，张口呼吸，不能平卧，意识障碍进行性加重，格拉斯哥评分10分，病情危重，转入儿童重症医学科。查体：意识不清，格拉斯哥评分8分，嗜睡，反应差，深大呼吸，营养不良貌，面色口唇欠红润，重度脱水貌。皮肤弹性差。腹膨隆，叩诊鼓音，拒按，肠鸣音2次/min。双足踝及胫前轻度凹陷性浮肿。双手足及小腿下2/3温度降低，毛细血管再充盈时间5 s。复查血糖27 mmol/L，甘油三酯162 mmol/L，胆固醇21.6 mmol/L，凝血因乳糜血测不出。转入后予无创辅助通气，但呼吸困难进行性加重，遂予气管插管，有创呼吸机辅助通气，同时予补液（1/2张无糖液体），胰岛素（0.1 U·kg －1·h －1）静脉泵入，同时血浆置换（置换血浆量900 mL）治疗，10 h后该患儿血糖降至19 mmol/L，仍呈嗜睡状，轻度脱水貌，无明显深大呼吸，面色口唇欠红润，四肢末梢稍暖，毛细血管再充盈时间3 s；继续补液及胰岛素泵入治疗；但1 h后，患儿意识障碍加重，呈昏睡状，腹胀加重，肠鸣音消失，四肢发绀，四肢末梢凉，毛细血管再充盈时间5 s，血压波动于50/30 mmHg~60/40 mmHg，血气分析pH 6.81，HCO 3- 2.3 mmol/L，BE-32.8 mmol/L，酸中毒无好转，考虑存在脓毒性休克，肠穿孔可能，立即给予0.9%氯化钠注射液扩容，去甲肾上腺素升压，美罗培南、万古霉素抗感染等治疗，胃肠减压引出黄绿色含粪汁液体，急查腹部B超提示肠淤张；腹部CT提示小肠多发肠壁积气，伴门静脉积气，腹腔积液。考虑肠管坏死伴穿孔可能性大，急请普外科会诊，急诊行剖腹探查术，术中发现距回盲部约20 cm肠管及距离曲氏韧带有约10 cm肠管颜色尚可，其余肠管均已发黑伴多处穿孔，切除坏死肠管，予空肠造瘘，肠腔置16号橡胶引流管，术后禁饮食，引流管及瘘口可引出大量墨绿色分泌物，术后继续行持续床旁血液净化治疗，于术后第2天行第2次血浆置换（置换量900 mL），术后第5天撤离有创呼吸机。患儿静脉用胰岛素静泵下血糖控制尚可，5 d后开始间断予温水鼻饲，逐渐过渡为配方奶。住院第11天患儿诉下腹胀、伤口疼痛，伴发热，体温最高39.0 ℃，且易反复，查体下腹部皮肤可有握雪感，考虑皮下积气。第12天，腹部皮下积气减少，左侧腹壁出现红肿热痛，考虑腹壁感染，予拔除肠腔引流管，腹壁缝线拆除，造瘘袋贴于腹壁切口周围皮肤，保持引流通畅，伤口周围涂抹氧化锌软膏保护皮肤，治疗上继续禁食、胃肠减压，小剂量胰岛素，补液，静脉营养，美罗培南联合万古霉素抗感染。动态监测血糖、血脂，均正常；经抗感染治疗后患儿逐渐体温正常，精神反应好转，于住院第20天转入内分泌科继续静脉营养治疗，住院70 d后，患儿腹部切口愈合好，行造瘘口闭合术，术后肠道恢复良好，逐渐过度肠内营养联合静脉营养，住院90 d，好转出院。随访半年，患儿精神反应好，营养状态中等，持续静脉营养及部分肠内营养中。血糖控制良好。

目的:建立火焰原子吸收光谱法测定山葡健脾颗粒中葡萄糖酸锌、滴定法测定枸橼酸含量的方法。方法:火焰原子吸收光谱法测定锌元素含量，采用空气-乙炔火焰，锌元素测定波长213.9 nm，燃气流量0.9 L/min，燃烧器高度7.2 mm，背景校正：氘灯，通带宽度1.0 nm；以酚酞作为指示剂，氢氧化钠进行滴定，测定枸橼酸含量。结果:山葡健脾颗粒中锌元素在0.1～2.0 μg/ml范围内，线性关系良好( r＝0.999 8)，平均回收率94.06%( RSD＝1.67%)，枸橼酸含量的平均回收率为94.65%( RSD＝0.91%)。 结论:该方法简单、准确、灵敏度高，可用于山葡健脾颗粒中葡萄糖酸锌和枸橼酸含量的测定。

目的:探讨应用药物治疗早期声门型喉癌低温等离子射频术后形成的喉肉芽肿的有效性。方法:对2011年1月至2021年1月大连市中心医院收治289例早期声门型喉癌内镜支撑喉镜下等离子射频手术治疗后形成的32例喉肉芽肿患者按照随机数字表法分为两组，一组为药物直接治疗组16例，另一组为观察再治疗组16例。两组用药皆为葡萄糖酸锌片剂（每片剂量70 mg，含锌10 mg）口服治疗，每次3片，每日2次。肉芽位于声带突者另加艾司奥美拉唑20 mg，每日2次，空腹口服。总疗程6~12周。结果:随诊复查电子喉镜，肉芽肿的形成时间均在术后2~4个月，其中观察再治疗组的16例患者观察随诊3个月肉芽无明显变化，之后再进行药物治疗，发现两组患者药物治疗后的反应相似，均在治疗3周后肉芽开始变小，治疗6~12周肉芽均消失而停药，肉芽无再发，治愈率100%（32/32）。有2例患者葡萄糖酸锌片剂口服治疗3周后出现恶心，上腹部不适，减量用药后不适消失。结论:早期声门型喉癌低温等离子射频术后出现的喉肉芽肿，单独给予葡萄糖酸锌片剂或者联合艾司奥美拉唑口服是一种有效、安全、复发率低的治疗方法。

目的:观察补锌治疗对1型糖尿病（T1DM）心肌病小鼠心肌腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、线粒体动力相关蛋白1（Drp1）及氧化应激水平的变化，初步探讨锌对糖尿病心肌病保护作用的分子机制。方法:取8周龄雄性FVB小鼠60只，通过小剂量（50 mg/kg）链脲霉素连续腹腔注射5 d的方法构建T1DM心肌损伤小鼠模型。造模成功后将小鼠通过整群随机抽样方法分为3组，分别为对照组（A组，20只）、糖尿病心肌损伤模型组（B组，18只）和模型+高锌饮食组（C组，18只）。A组和B组给予正常锌饮食（锌含量为30 mg/kg），C组给予高锌饮食（锌含量150 mg/kg），饲养时间均为3个月。测量小鼠体重；检测血清葡萄糖、丙二醛、超氧化物歧化酶水平；心脏彩色超声多普勒测量小鼠心脏功能，测量左室射血分数（EF）、收缩期和舒张期心室充盈早期峰值速度、晚期充盈速度的比值（E/A比值）和左室舒张末期内径（LVDD）；观察心肌组织病理学改变，并检测AMPK、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（pAMPK Thr172）、Drp1和磷酸化动力相关蛋白1（pDrp1 Ser616）的蛋白表达水平，计算pAMPK Thr172/AMPK和pDrp1 Ser616/Drp1比值。多组间比较采用单因素方差分析方法。 结果:A、B、C三组间，体重、血糖、丙二醛和超氧化物歧化酶水平、E/A比值、EF值和LVDD的差异均有统计学意义（ P<0.05），其中B组血浆丙二醛水平较A组升高，超氧化物歧化酶水平较A组降低，而C组较B组丙二醛水平降低，超氧化物歧化酶水平较B组升高，差异有统计学意义（ P<0.05）。与A组相比，B组小鼠E/A比值和EF值降低，而C组较B组增加，差异有统计学意义（ P<0.05）。与A组相比，B组的pAMPK Thr172/AMPK值降低，而C组较B组升高，差异有统计学意义（ P<0.05）；与A组相比，B组的pDrp1 Ser616/Drp1值增加，C组较B组降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。补锌治疗增加了心肌AMPK蛋白Thr172位点磷酸化水平，减少了Drp1蛋白Ser616位点磷酸化水平（ P<0.05）。 结论:补锌治疗可能通过调控AMPK/Drp1通路来抑制糖尿病心肌损伤的氧化应激及心肌细胞线粒体分裂而达到治疗目的。

目的:探讨黄芪甲苷是否通过锌离子(Zn 2+)调控线粒体相关内质网膜(MAMs)发挥神经保护作用，并阐明可能的机制。 方法:常规培养PC12细胞并分为7组。对照组：细胞常规培养；2-DG组：用50 μmol/L 2-DG处理30 min；黄芪甲苷+2-DG组：用50 μmol/L黄芪甲苷处理20 min后再用50 μmol/L 2-DG处理30 min；黄芪甲苷组：用50 μmol/L黄芪甲苷处理20 min；TPEN+黄芪甲苷+2-DG组：用10 μmol/L TPEN处理10 min后再用50 μmol/L黄芪甲苷处理20 min，接着用50 μmol/L 2-DG处理30 min；TPEN组：10 μmol/L TPEN处理10 min；TPEN+2-DG组：用10 μmol/L TPEN处理10 min后再用50 μmol/L 2-DG处理30 min。通过Western blotting实验检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78、GRP94、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8、B细胞受体相关蛋白31(Bap31)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达，采用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平，采用免疫荧光法检测Fis1蛋白的表达，采用线粒体荧光探针TMRE检测线粒体通透性转移孔(mPTP)开放情况。结果:(1)与对照组相比，2-DG组GRP78、GRP94、Caspase-8、Bap31、Fis1蛋白表达以及Annexin V-FITC/PI染色的绿色荧光强度明显增加；与2-DG组相比，黄芪甲苷+2-DG组上述5种蛋白表达以及Annexin V-FITC/PI染色的绿色荧光强度明显降低；与黄芪甲苷+2-DG组相比，TPEN+黄芪甲苷+2-DG组上述5种蛋白表达以及Annexin V-FITC/PI染色的绿色荧光强度明显增强；差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)与对照组相比，2-DG组Fis1蛋白荧光强度明显增强；与2-DG组相比，黄芪甲苷+2-DG组Fis1蛋白荧光强度明显减弱；与黄芪甲苷+2-DG组相比，TPEN+黄芪甲苷+2-DG组Fis1蛋白荧光强度明显增强；与对照组相比，TPEN+2-DG组Fis1蛋白荧光强度明显增强；差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与对照组相比，2-DG组TMRE荧光强度明显减弱；与2-DG组相比，黄芪甲苷+2-DG组TMRE荧光强度明显增强；与黄芪甲苷+2-DG组相比，TPEN+黄芪甲苷+2-DG组TMRE荧光强度明显减弱；与对照组相比，TPEN+2-DG组TMRE荧光强度明显减弱；差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:黄芪甲苷能够通过Zn 2+抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡，阻止mPTP开放发挥神经保护作用，其作用机制可能与Fis1、Bap31表达有关。

目的 探究高糖干预对胰腺癌细胞免疫逃逸的影响及作用分子机制.方法 采用不同浓度葡萄糖(0、7.5、15、30 mmol/L)处理PANC-1细胞24 h构建高糖干预的PANC-1细胞.将miR-429 mimics及其阴性对照(mimics NC)转染至PANC-1细胞,分为对照组、HG组、HG+mimics NC组、HG+mimics 组、HG+mimics+oe-NC 组和 HG+mimics+oe-ZEB1组.流式细胞术检测细胞表面分子细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达水平;qRT-PCR检测细胞miR-429和锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)mRNA表达水平;Western blot检测细胞ZEB1蛋白表达水平.将以上各组PANC-1细胞与CD8+T细胞建立共培养体系,CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CD8+T细胞对PANC-1细胞的杀伤作用;采用双荧光素酶报告系统验证miR-429和ZEB1的靶向调控关系.结果 HG可促进PANC-1细胞表面分子PD-L1及ZEB1表达(P＜0.05),抑制miR-429表达,且呈浓度依赖性.miR-429过表达可显著抑制HG诱导的PANC-1细胞表面分子PD-L1表达,而过表达ZEB1可逆转miR-429过表达对HG诱导PANC-1细胞表面分子PD-L1表达的抑制作用.建立与CD8+T细胞共培养体系后,与对照组比较,HG组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P＜0.05);与 HG+mimics NC 组比较,HG+mimics 组 PANC-1细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡水平和杀伤活性明显升高(P＜0.05).与 HG+mimics+oe-NC 组比较,HG+mimics+oe-ZEB1组PANC-1细胞增殖活性明显增加,细胞凋亡率和杀伤活性明显降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,miR-429靶向负调控ZEB1.结论 高糖通过下调miR-429表达水平,靶向负调控ZEB1 mRNA的表达,提高PANC-1细胞表面分子PD-L1表达水平,进而促进PANC-1细胞免疫逃逸.

目的 观察锌剂预处理对丙咪嗪抗抑郁药效的增强作用,并探讨相关机制.方法 将SD大鼠随机分为模型组、锌组、丙咪嗪组、锌+丙咪嗪组、锌+H89+丙咪嗪组及对照组.模型组、锌组、丙咪嗪组、锌+丙咪嗪组、锌+H89+丙咪嗪组采用电击箱构建习得性无助抑郁模型;对照组大鼠同样放于电箱中,但不给予电击.造模结束后,模型组腹腔注射生理盐水;锌组腹腔注射葡萄糖酸锌连续3 d;丙咪嗪组腹腔注射丙咪嗪、单次给药;锌+丙咪嗪组腹腔注射葡萄糖酸锌连续3 d,第4天给予丙咪嗪;锌+H89+丙咪嗪组腹腔注射葡萄糖酸锌连续3 d,在第1天锌剂给药后注射H89[蛋白激酶A(PKA)抑制剂]注射液,在第4天给予丙咪嗪;对照组腹腔注射生理盐水.大鼠给药结束24 h后进行电击穿梭逃避试验及强迫游泳行为学测试评价抑郁样行为,采集外侧缰核(LHb)检测细胞色素氧化酶及星形胶质细胞中的内向整流钾通道4.1(Kir4.1)蛋白.结果 锌组、丙咪嗪组、锌+H89+丙咪嗪组和模型组强迫游泳不动时间和逃避失败次数高于对照组;锌+丙咪嗪组强迫游泳不动时间和逃避失败次数低于模型组、锌组、丙咪嗪组及锌+H89+丙咪嗪组(P均<0.01).锌组、丙咪嗪组、锌+H89+丙咪嗪组和模型组LHb中细胞色素氧化酶表达及Kir4.1阳性星形胶质细胞数高于对照组,锌组、丙咪嗪组、锌+丙咪嗪组细胞色素氧化酶表达及Kir4.1阳性星形胶质细胞数低于模型组,锌+丙咪嗪组细胞色素氧化酶表达及Kir4.1阳性星形胶质细胞数低于锌组、丙咪嗪组(P均<0.01).结论 锌剂预处理可增强丙咪嗪的抗抑郁药效,其作用机制可能与调控Kir4.1表达、抑制LHb簇状放电有关,这一作用可被PKA抑制剂H89所阻断.

目的 探讨葡萄糖酸锌、培菲康及叶酸联合治疗小儿腹泻的临床疗效.方法 研究对象选取 2021-2023 年杭州市妇产科医院收治的108 例小儿腹泻患者,按照随机数字法分为对照组(54 例),采取补液、退热、抗生素等常规治疗,和观察组(54 例),在对照组基础上采取培菲康、葡萄糖酸锌及叶酸联合治疗.比较两组患者治疗前后血清免疫球蛋白、锌水平以及双歧杆菌、乳杆菌水平,并比较两组临床症状改善时间及住院时间,统计两组临床疗效.结果 观察组治疗总有效率为 94.44%,高于对照组治疗的 79.63%,差异有统计学意义(χ2=5.252,P<0.05);观察组粪便次数恢复时间(2.24±0.84)d、粪便性状恢复时间(3.08±1.00)d、脱水消退时间(2.05±0.86)d、发热消退时间(1.54±0.70)d及住院时间(3.56±1.38)d均明显低于对照组的(4.45±1.44)、(5.38±1.85)d、(3.31±1.22)d及(6.80±2.52)d,差异有统计学意义(t=9.792、8.037、6.203、5.843、8.287,均P<0.05);观察组治疗后血清免疫球蛋白G(5.76±1.29)g/L、免疫球蛋白M(0.98±0.35)g/L、免疫球蛋白A(0.52±0.18)g/L、锌(68.84±7.24)μg/L及双歧杆菌(11.87±2.75)logN/g、乳杆菌(9.35±2.47)logN/g水平均明显高于对照组的(5.13±1.28)g/L、(0.83±0.39)g/L、(0.32±0.12)g/L、(57.75±9.65)μg/L、(9.24±2.28)logN/g、(7.42±2.68)logN/g,差异有统计学意义(t=2.548、2.013、6.794、6.733、5.410、3.891,均P<0.05).结论 培菲康、葡萄糖酸锌、叶酸联合治疗有助于改善小儿腹泻的临床疗效,具有一定的临床推广应用价值.

目的 探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制.方法 应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成.结果 GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞.周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05).结论 GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化.

一、填空题1、24％ 15％～19％ 葡萄糖 半乳糖 N-乙酰氨基葡萄糖 L-岩藻糖 唾液酸 协同菌群发展 维持肠道屏障完整性 促进免疫系统发育 大脑发育2、抗生素 潜在致病菌 厌氧菌 肠道菌群移位3、细胞清除异常 Ⅰ型干扰素(IFN-1)的过度产生 自身免疫耐受受损 其他单基因变异异常4、家庭成员微生物 分娩方式 喂养方式 其他因素如生活环境、机械通气5、人鼻病毒(HRV) 呼吸道合胞病毒(RSV) 流感病毒 副流感病毒 偏肺病毒 博卡病毒 腺病毒 冠状病毒 HRV 流感病毒6、奥马珠单抗 抗病毒免疫应答7、正常外源基因 异常基因 锌指核酸酶(ZFN) CRISPR/Cas 9技术8、对症治疗 酶替代治疗(ERT) 造血干细胞移植(HSCT) 9、中枢神经系统疾病 皮肤症状 皮肤冻疮样皮损 基因测序10、代谢功能 免疫功能 厚壁菌门 变形菌门二、简答题1、脓毒症患儿菌群失调主要表现为四种状态:①维持机体健康的重要菌群(如厚壁菌门和拟杆菌门)的缺失;②肠道菌群多样性的丧失;③菌群生态功能的转变;④病原体(如变形菌门)的大量繁殖.